實時熒光PCR法檢測清真食品中馬、驢源性成分

岳苑

摘要：根據馬、驢線粒體DNA序列，設計并篩選了馬、驢源性特異引物及探針，建立了清真食品中馬、驢源性成分的實時熒光PCR檢測方法。擴增產物測序結果表明，馬、驢源性成分擴增產物與數據庫序列完全一致。該方法食品中馬、驢源性成分的最低檢出限分別為1%、0.01%，可以作為清真食品中檢測馬、驢源性成分的有效方法。

關鍵詞：實時熒光PCR；馬源性；驢源性；MGB探針；清真食品

中圖分類號：TS251 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5518-05

寧夏回族自治區(qū)是我國回族主要聚居區(qū)，回族人口222萬，約占寧夏總人口的36%，全民信奉伊斯蘭教，在衣著、飲食、起居等方面形成了獨具特色的風俗習慣。清真食品（HALAL FOOD）是指穆斯林食用的、符合伊斯蘭教律例的食物的統(tǒng)稱。伊斯蘭教飲食律例規(guī)定禽類有素囊者，草食畜類有反芻者，魚類有鱗、鰓、鰭者，植物中性善無毒者可食，即牛、羊、駝、鹿、兔等可食，豬、狗等不可食，馬、驢、騾等雖然是食草型動物，但因平蹄，屬于異形，也不可食。自死物、血液、酒以及非誦真主之名而宰殺的牲畜、禽類不可食。另外牛羊的內外生殖器、睪丸、鼻須、淋巴結等組織器官也不可食用，以上不可食物統(tǒng)稱為穆斯林飲食禁忌物。清真食品安全是寧夏及我國2 000多萬穆斯林群眾的重要民生問題，也是發(fā)展我國與中東、西亞伊斯蘭國家多邊關系的國策需要。因此，突破清真食品檢測技術的瓶頸，加強清真食品的監(jiān)管力度，對提升我國清真食品質量安全，促進清真食品產業(yè)可持續(xù)發(fā)展將起到積極作用。

目前，動物源性成分鑒別的主要方法有物理、化學、免疫學和分子生物學方法[1]，其中分子生物學的方法以其靈敏、快速的特點，成為近幾年研究的重點。英國研究者利用熒光PCR技術檢測豬、牛、羊、雞、火雞動物源性成分，靈敏度低于0.1%[2]。西班牙技術人員采用普通PCR技術鑒別禽類成分，其中包括雞、火雞、野鴨和鵝[3]。國內已有關于豬、牛、羊、兔、馬、驢、魚[4-7]動物源性成分分析的報道，尚缺乏實時熒光PCR法檢測馬、驢源性成分的方法，同時鮮見清真食品禁忌物成分檢測的報道。本試驗選擇馬和驢線粒體DNA特定片段設計引物和探針，建立清真食品及衍生產品中馬、驢源性成分的實時熒光PCR檢測方法，旨在靈敏、準確、快速地檢測出馬、驢源性成分，規(guī)范清真食品市場。

1 材料與方法

1.1 肉制品

肉制品包括馬肉、驢肉、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉、鴨肉、魚肉。所有樣品保證質量，防止不同肉制品的交叉污染。

1.2 主要試劑與儀器

動物源性基因組DNA提取試劑盒（TAKARA公司），Platinum 定量PCR SuperMix-UDG（Invitrogen公司），PCR擴增純化試劑盒（Promager公司），pEASYPM-T1 cloning kit（Transgene公司），DH5α感受態(tài)細胞（Transgene公司），實時熒光定量PCR儀（Eppendorf公司），高速冷凍離心機（HTACHI公司），恒溫加熱器（TAITEC公司）。

1.3 模板制備

采用TAKARA公司基因組DNA提取試劑盒，按其說明分別提取動物基因組DNA。稱取10 mg樣品，加入到基因組DNA提取試劑盒中，充分搗碎，70 ℃加熱10 min，期間輕彈離心管2-3次。在4 ℃、12 000 r/min下離心10 min，吸取上清液200 μL于新的離心管中備用。

1.4 引物、探針設計與合成

選擇細胞色素b基因設計馬和驢的特異性引物和探針，擴增片段分別為69 bp和119 bp。引物序列見表1。此外，為了監(jiān)控PCR反應是否正常進行以及防止假陰性結果的出現，在哺乳動物16sRNA的保守區(qū)域設計了通用上下游引物，大小為74 bp。

1.5 實時熒光PCR檢測

熒光PCR反應體系為40 μL，各組分含量分別為PCR Mix25 μL，10 μmol/L引物各2 μmol/L，5 μM探針2 μL，模板DNA 100～200 ng。馬源性成分擴增條件為50 ℃保溫2 min，95 ℃預變性2 min，95 ℃ 15 s、55 ℃ 45 s進行 40個循環(huán)。驢源性成分擴增條件為50 ℃保溫2 min，95 ℃預變性2 min，95 ℃15 s、52℃ 45 s進行 40個循環(huán)。目標DNA和內參照同時擴增。

1.6 特異性試驗

采用提取的豬、牛、羊、雞、鴨、魚DNA作對照，與提取的馬、驢DNA同時進行熒光PCR擴增。陽性PCR產物使用Promager公司純化回收試劑盒（Wizard PCR preps DNA Purification System）回收PCR產物，純化后連接克隆載體pEASYTM-T1，連接產物轉化大腸桿菌，將經過PCR檢測陽性的菌液送去測序。

1.7 重復性與穩(wěn)定性試驗

用馬肉和驢肉提取的DNA為模板，按照“1.5”所述的反應體系與反應條件進行實時熒光PCR反應，同一模板同時進行3次反應，每隔一天做一次，共重復15次，研究所建立體系的穩(wěn)定性。

1.8 靈敏性試驗

將驢肉、馬肉、魚肉切成薄片分別置于90 ℃的烘箱中烘烤24 h，然后將樣品分別研磨。向魚粉中加入驢肉粉使其含量分別達到1%、0.1%、0.01%，向魚粉中加入馬肉粉使其含量分別達到1%、0.1%、0.01%，充分混勻，提取DNA作為模版，按照“1.5”所述的反應體系與反應條件進行實時熒光PCR反應。確定檢出限含量后，重復8次確定檢出限的穩(wěn)定性。

2 結果與分析

2.1 馬源性成分特異性試驗

用設計的馬引物和探針分別對馬、豬、牛、羊、雞、鴨、魚、驢8種樣品進行實時熒光PCR，部分結果如圖1A（圖中Ct值較小的曲線為內參照），本試驗設計的馬引物和探針能夠擴增出馬源性成分樣品，且對上述其他物種無擴增，證明本研究設計的馬引物和探針具有良好的特異性。

2.2 驢源性成分特異性試驗

用設計的驢引物和探針分別對驢、豬、牛、羊、雞、鴨、魚、馬8種樣品進行實時熒光PCR，部分結果如圖1B（圖中Ct值較小的曲線為內參照），本試驗設計的驢引物和探針可擴增出驢源性成分樣品，且對上述其他物種無擴增，證明本研究設計的驢引物和探針具有良好的特異性。

2.3 馬、驢源性成分擴增片段測序結果

將經過PCR鑒定正確的重組菌活化后，進行序列測定，結果與預期結果一致，插入載體的DNA序列與已知序列相似度達100%。

2.4 PCR反應重復性試驗結果

將馬肉和驢肉提取的DNA作為模板，按照“1.5”所述的反應體系與反應條件進行實時熒光PCR反應，同一模板同時進行3次反應，每隔一天做一次，共重復15次，結果見表2。馬、驢源性成分Ct值的平均值為24.24、21.67，標準偏差為0.28、0.29，變異系數為1.17%、1.34%。說明本試驗所建立的體系較穩(wěn)定。

2.5 PCR反應靈敏性試驗結果

馬源性樣品實時熒光PCR靈敏性試驗結果如圖2A，Ct值如表3所示。當馬肉粉稀釋至含量為0.01%時，無典型擴增曲線。當馬肉粉稀釋至含量為1%和0.1%時，擴增結果Ct值的平均值分別為34.71和37.52，表明本試驗設計的引物可以檢測最低含量為1%的單一馬源性成分。

驢源性樣品實時熒光PCR靈敏性試驗結果如圖2B，Ct值如表3所示。當驢肉粉稀釋至含量為0.01%時，呈典型擴增曲線，Ct值的平均值為34.86；當驢肉粉稀釋至含量為0.1%時，呈典型的擴增曲線，Ct值的平均值為31.20，表明本試驗設計的引物可以檢測最低含量為0.01%的單一驢源性成分。馬、驢源性成分的檢出限均高于陳穎等[1]用普通PCR方法檢測的結果。

確定檢出限含量后，重復8次試驗，說明本試驗檢出限擴增結果穩(wěn)定（表3）。

3 小結與討論

3.1 目的基因的選擇

線粒體DNA（mtDNA）種內遺傳穩(wěn)定，種間高度變異且無組織特異性，屬母系遺傳，普遍存在于真核生物中。mtDNA相對細胞核DNA作為物種鑒定的靶序列具有以下優(yōu)點：①mtDNA具有廣泛的種內和種間多樣性，比核DNA進化速度快，適于親緣相近物種的鑒別。②每個細胞中含1 000個線粒體，每個線粒體含2～6個環(huán)狀DNA，在數量上遠超過核DNA，適于加工樣品的分析。③基因片段長度足夠區(qū)別同屬生物，同時相對核DNA來說也足夠短，可以從嚴重降解的DNA中擴增出來。④mtDNA在不同的物種中具有較高的變異性。

馬和驢都具備馬屬動物的共同特征，親緣關系近，具有高度同源的序列。要準確靈敏地區(qū)分這兩種動物源性成分是本試驗的難點之一。我們選擇馬、驢線粒體DNA上的細胞色素b基因設計特異性引物和探針，通過特異性、重復性和靈敏度試驗表明該引物和探針能夠區(qū)分馬源性和驢源性以及其他六種常見的動物源性成分（豬、牛、羊、雞、鴨、魚），具有很好的特異性。

3.2 擴增目的片段長度的選擇

肉制品放置時間過長或經高溫加工，DNA片段會發(fā)生降解。本試驗選擇的擴增片段較短（分別為69 bp和119 bp），即使經高溫、高壓處理，模板DNA降解，但選取的目的片段依然存在，從而避免了假陰性的結果。此外，為了驗證本試驗的靈敏度，我們模仿肉骨粉的制作工藝，對樣本90 ℃烘烤24 h后研磨制成干粉，與魚粉按比例混合后提取DNA進行靈敏度的試驗，結果顯示馬源性成分的最低檢出限為1%，驢源性成分的最低檢出限為0.01%，表明本試驗確定的引物和探針具有很高的靈敏度。

3.3 MGB探針

MGB（Minor Groove Binder，小型凹槽結合物）可結合在DNA雙螺旋的小溝里，從而起到穩(wěn)定DNA雙螺旋的作用[8]，是在普通的Taq-Man探針基礎上發(fā)展起來的一項新技術。本試驗設計的探針，因為3端MGB基團的存在，大大提高了探針與模板結合的退火溫度，從而提高了雜交的特異性。TaqMan-MGB探針具有熒光本底低、分辨率更高、雜交特異性更強、重現性好、探針長度縮短等優(yōu)點[9]，不僅解決了PCR污染問題，而且自動化程度高，能夠實時監(jiān)控，不存在非特異性擴增現象，已成為目前國際上公認的核酸分子定性、定量檢測方法。

近年來，我國清真食品及衍生產品新品種大幅度增加，規(guī)?；?、產業(yè)化程度也大大提升。但由于我國清真認證、監(jiān)管、檢測技術滯后，出現大量使穆斯林震驚的事件：如在牛羊飼料中添加豬骨粉，在食品中添加豬油、血粉等，許多肉品添加劑生產原料來自穆斯林禁忌物，甚至以騾馬肉冒充牛羊肉，諸如此類事件，使廣大穆斯林的內心受到極大傷害。清真食品的質量安全問題不僅關乎我國穆斯林地區(qū)經濟的健康發(fā)展，也關系到穆斯林身心健康，因此是一個重大的民生工程。本試驗針對清真食品及衍生產品質量安全的檢測技術難點進行突破，采用實時熒光PCR技術檢測動物源性成分。實時熒光PCR技術相當于定性PCR與分子雜交的結合，它能區(qū)別只有少數堿基差異的DNA序列，具有高特異性和高精確性的優(yōu)點[10]。而且實時熒光PCR是在封閉的體系中進行，反應結束無需進行電泳，避免污染和危害，縮短了檢測時間。該方法能夠為清真食品及衍生產品的質量控制和質量監(jiān)督提供適用的技術依據，為保證我區(qū)清真食品及衍生產品的質量，保障食品安全奠定基礎。

參考文獻：

[1] 陳 穎，吳亞君，徐寶梁，等.食品及飼料中馬屬動物源性成分的PCR檢測研究[J].中國生物工程雜志，2004（5）：78-83.

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[3] MIGUEL A R， TERESA G， ISABEL G， et al. Identification of goose， mule duck， chicken， turkey， and swine in foie gras by species-specific polymerase chain reaction[J]. Agricultural and Food Chemistry， 2003， 51：1524-1529.

[4] 陳 茹，林志雄，劉琳琳.應用PCR等核酸技術檢驗動物飼料中牛羊組織成分[J].中國獸醫(yī)科技，2001，31（9）：3-8.

[5] 曹際娟，盧行安，秦 成，等.實時熒光PCR技術檢測肉骨粉中牛羊源性成分的方法[J].生物技術通訊，2002，13（2）：158-160.

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[8] LIVA K J. Allelic discrimination using fluorogenic probes and the 5nuclease assay [J]. Genet Anal， 1999， 14：143-149.

[9] 史成軍，何蘊韶，程 鋼，等.MGB探針檢測中國南方人群糖尿病MTHFR基因多態(tài)性.《中華檢驗醫(yī)學網》（www.labweb.cn）http：//www.labweb.cn/articleview/2006-8-2/article_view_2724.htm.

[10] 劉彥泓，穆 春，孫 屏，等.實時熒光PCR和常規(guī)PCR方法檢測飼料中雞源性成分[J].飼料工業(yè)，2010（7）：45-47.

（責任編輯 彭西甜）

2.2 驢源性成分特異性試驗

用設計的驢引物和探針分別對驢、豬、牛、羊、雞、鴨、魚、馬8種樣品進行實時熒光PCR，部分結果如圖1B（圖中Ct值較小的曲線為內參照），本試驗設計的驢引物和探針可擴增出驢源性成分樣品，且對上述其他物種無擴增，證明本研究設計的驢引物和探針具有良好的特異性。

2.3 馬、驢源性成分擴增片段測序結果

將經過PCR鑒定正確的重組菌活化后，進行序列測定，結果與預期結果一致，插入載體的DNA序列與已知序列相似度達100%。

2.4 PCR反應重復性試驗結果

將馬肉和驢肉提取的DNA作為模板，按照“1.5”所述的反應體系與反應條件進行實時熒光PCR反應，同一模板同時進行3次反應，每隔一天做一次，共重復15次，結果見表2。馬、驢源性成分Ct值的平均值為24.24、21.67，標準偏差為0.28、0.29，變異系數為1.17%、1.34%。說明本試驗所建立的體系較穩(wěn)定。

2.5 PCR反應靈敏性試驗結果

馬源性樣品實時熒光PCR靈敏性試驗結果如圖2A，Ct值如表3所示。當馬肉粉稀釋至含量為0.01%時，無典型擴增曲線。當馬肉粉稀釋至含量為1%和0.1%時，擴增結果Ct值的平均值分別為34.71和37.52，表明本試驗設計的引物可以檢測最低含量為1%的單一馬源性成分。

驢源性樣品實時熒光PCR靈敏性試驗結果如圖2B，Ct值如表3所示。當驢肉粉稀釋至含量為0.01%時，呈典型擴增曲線，Ct值的平均值為34.86；當驢肉粉稀釋至含量為0.1%時，呈典型的擴增曲線，Ct值的平均值為31.20，表明本試驗設計的引物可以檢測最低含量為0.01%的單一驢源性成分。馬、驢源性成分的檢出限均高于陳穎等[1]用普通PCR方法檢測的結果。

確定檢出限含量后，重復8次試驗，說明本試驗檢出限擴增結果穩(wěn)定（表3）。

3 小結與討論

3.1 目的基因的選擇

線粒體DNA（mtDNA）種內遺傳穩(wěn)定，種間高度變異且無組織特異性，屬母系遺傳，普遍存在于真核生物中。mtDNA相對細胞核DNA作為物種鑒定的靶序列具有以下優(yōu)點：①mtDNA具有廣泛的種內和種間多樣性，比核DNA進化速度快，適于親緣相近物種的鑒別。②每個細胞中含1 000個線粒體，每個線粒體含2～6個環(huán)狀DNA，在數量上遠超過核DNA，適于加工樣品的分析。③基因片段長度足夠區(qū)別同屬生物，同時相對核DNA來說也足夠短，可以從嚴重降解的DNA中擴增出來。④mtDNA在不同的物種中具有較高的變異性。

馬和驢都具備馬屬動物的共同特征，親緣關系近，具有高度同源的序列。要準確靈敏地區(qū)分這兩種動物源性成分是本試驗的難點之一。我們選擇馬、驢線粒體DNA上的細胞色素b基因設計特異性引物和探針，通過特異性、重復性和靈敏度試驗表明該引物和探針能夠區(qū)分馬源性和驢源性以及其他六種常見的動物源性成分（豬、牛、羊、雞、鴨、魚），具有很好的特異性。

3.2 擴增目的片段長度的選擇

肉制品放置時間過長或經高溫加工，DNA片段會發(fā)生降解。本試驗選擇的擴增片段較短（分別為69 bp和119 bp），即使經高溫、高壓處理，模板DNA降解，但選取的目的片段依然存在，從而避免了假陰性的結果。此外，為了驗證本試驗的靈敏度，我們模仿肉骨粉的制作工藝，對樣本90 ℃烘烤24 h后研磨制成干粉，與魚粉按比例混合后提取DNA進行靈敏度的試驗，結果顯示馬源性成分的最低檢出限為1%，驢源性成分的最低檢出限為0.01%，表明本試驗確定的引物和探針具有很高的靈敏度。

3.3 MGB探針

MGB（Minor Groove Binder，小型凹槽結合物）可結合在DNA雙螺旋的小溝里，從而起到穩(wěn)定DNA雙螺旋的作用[8]，是在普通的Taq-Man探針基礎上發(fā)展起來的一項新技術。本試驗設計的探針，因為3端MGB基團的存在，大大提高了探針與模板結合的退火溫度，從而提高了雜交的特異性。TaqMan-MGB探針具有熒光本底低、分辨率更高、雜交特異性更強、重現性好、探針長度縮短等優(yōu)點[9]，不僅解決了PCR污染問題，而且自動化程度高，能夠實時監(jiān)控，不存在非特異性擴增現象，已成為目前國際上公認的核酸分子定性、定量檢測方法。

近年來，我國清真食品及衍生產品新品種大幅度增加，規(guī)?；?、產業(yè)化程度也大大提升。但由于我國清真認證、監(jiān)管、檢測技術滯后，出現大量使穆斯林震驚的事件：如在牛羊飼料中添加豬骨粉，在食品中添加豬油、血粉等，許多肉品添加劑生產原料來自穆斯林禁忌物，甚至以騾馬肉冒充牛羊肉，諸如此類事件，使廣大穆斯林的內心受到極大傷害。清真食品的質量安全問題不僅關乎我國穆斯林地區(qū)經濟的健康發(fā)展，也關系到穆斯林身心健康，因此是一個重大的民生工程。本試驗針對清真食品及衍生產品質量安全的檢測技術難點進行突破，采用實時熒光PCR技術檢測動物源性成分。實時熒光PCR技術相當于定性PCR與分子雜交的結合，它能區(qū)別只有少數堿基差異的DNA序列，具有高特異性和高精確性的優(yōu)點[10]。而且實時熒光PCR是在封閉的體系中進行，反應結束無需進行電泳，避免污染和危害，縮短了檢測時間。該方法能夠為清真食品及衍生產品的質量控制和質量監(jiān)督提供適用的技術依據，為保證我區(qū)清真食品及衍生產品的質量，保障食品安全奠定基礎。

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[8] LIVA K J. Allelic discrimination using fluorogenic probes and the 5nuclease assay [J]. Genet Anal， 1999， 14：143-149.

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[10] 劉彥泓，穆 春，孫 屏，等.實時熒光PCR和常規(guī)PCR方法檢測飼料中雞源性成分[J].飼料工業(yè)，2010（7）：45-47.

（責任編輯 彭西甜）

2.2 驢源性成分特異性試驗

用設計的驢引物和探針分別對驢、豬、牛、羊、雞、鴨、魚、馬8種樣品進行實時熒光PCR，部分結果如圖1B（圖中Ct值較小的曲線為內參照），本試驗設計的驢引物和探針可擴增出驢源性成分樣品，且對上述其他物種無擴增，證明本研究設計的驢引物和探針具有良好的特異性。

2.3 馬、驢源性成分擴增片段測序結果

將經過PCR鑒定正確的重組菌活化后，進行序列測定，結果與預期結果一致，插入載體的DNA序列與已知序列相似度達100%。

2.4 PCR反應重復性試驗結果

將馬肉和驢肉提取的DNA作為模板，按照“1.5”所述的反應體系與反應條件進行實時熒光PCR反應，同一模板同時進行3次反應，每隔一天做一次，共重復15次，結果見表2。馬、驢源性成分Ct值的平均值為24.24、21.67，標準偏差為0.28、0.29，變異系數為1.17%、1.34%。說明本試驗所建立的體系較穩(wěn)定。

2.5 PCR反應靈敏性試驗結果

馬源性樣品實時熒光PCR靈敏性試驗結果如圖2A，Ct值如表3所示。當馬肉粉稀釋至含量為0.01%時，無典型擴增曲線。當馬肉粉稀釋至含量為1%和0.1%時，擴增結果Ct值的平均值分別為34.71和37.52，表明本試驗設計的引物可以檢測最低含量為1%的單一馬源性成分。

驢源性樣品實時熒光PCR靈敏性試驗結果如圖2B，Ct值如表3所示。當驢肉粉稀釋至含量為0.01%時，呈典型擴增曲線，Ct值的平均值為34.86；當驢肉粉稀釋至含量為0.1%時，呈典型的擴增曲線，Ct值的平均值為31.20，表明本試驗設計的引物可以檢測最低含量為0.01%的單一驢源性成分。馬、驢源性成分的檢出限均高于陳穎等[1]用普通PCR方法檢測的結果。

確定檢出限含量后，重復8次試驗，說明本試驗檢出限擴增結果穩(wěn)定（表3）。

3 小結與討論

3.1 目的基因的選擇

線粒體DNA（mtDNA）種內遺傳穩(wěn)定，種間高度變異且無組織特異性，屬母系遺傳，普遍存在于真核生物中。mtDNA相對細胞核DNA作為物種鑒定的靶序列具有以下優(yōu)點：①mtDNA具有廣泛的種內和種間多樣性，比核DNA進化速度快，適于親緣相近物種的鑒別。②每個細胞中含1 000個線粒體，每個線粒體含2～6個環(huán)狀DNA，在數量上遠超過核DNA，適于加工樣品的分析。③基因片段長度足夠區(qū)別同屬生物，同時相對核DNA來說也足夠短，可以從嚴重降解的DNA中擴增出來。④mtDNA在不同的物種中具有較高的變異性。

馬和驢都具備馬屬動物的共同特征，親緣關系近，具有高度同源的序列。要準確靈敏地區(qū)分這兩種動物源性成分是本試驗的難點之一。我們選擇馬、驢線粒體DNA上的細胞色素b基因設計特異性引物和探針，通過特異性、重復性和靈敏度試驗表明該引物和探針能夠區(qū)分馬源性和驢源性以及其他六種常見的動物源性成分（豬、牛、羊、雞、鴨、魚），具有很好的特異性。

3.2 擴增目的片段長度的選擇

肉制品放置時間過長或經高溫加工，DNA片段會發(fā)生降解。本試驗選擇的擴增片段較短（分別為69 bp和119 bp），即使經高溫、高壓處理，模板DNA降解，但選取的目的片段依然存在，從而避免了假陰性的結果。此外，為了驗證本試驗的靈敏度，我們模仿肉骨粉的制作工藝，對樣本90 ℃烘烤24 h后研磨制成干粉，與魚粉按比例混合后提取DNA進行靈敏度的試驗，結果顯示馬源性成分的最低檢出限為1%，驢源性成分的最低檢出限為0.01%，表明本試驗確定的引物和探針具有很高的靈敏度。

3.3 MGB探針

MGB（Minor Groove Binder，小型凹槽結合物）可結合在DNA雙螺旋的小溝里，從而起到穩(wěn)定DNA雙螺旋的作用[8]，是在普通的Taq-Man探針基礎上發(fā)展起來的一項新技術。本試驗設計的探針，因為3端MGB基團的存在，大大提高了探針與模板結合的退火溫度，從而提高了雜交的特異性。TaqMan-MGB探針具有熒光本底低、分辨率更高、雜交特異性更強、重現性好、探針長度縮短等優(yōu)點[9]，不僅解決了PCR污染問題，而且自動化程度高，能夠實時監(jiān)控，不存在非特異性擴增現象，已成為目前國際上公認的核酸分子定性、定量檢測方法。

近年來，我國清真食品及衍生產品新品種大幅度增加，規(guī)模化、產業(yè)化程度也大大提升。但由于我國清真認證、監(jiān)管、檢測技術滯后，出現大量使穆斯林震驚的事件：如在牛羊飼料中添加豬骨粉，在食品中添加豬油、血粉等，許多肉品添加劑生產原料來自穆斯林禁忌物，甚至以騾馬肉冒充牛羊肉，諸如此類事件，使廣大穆斯林的內心受到極大傷害。清真食品的質量安全問題不僅關乎我國穆斯林地區(qū)經濟的健康發(fā)展，也關系到穆斯林身心健康，因此是一個重大的民生工程。本試驗針對清真食品及衍生產品質量安全的檢測技術難點進行突破，采用實時熒光PCR技術檢測動物源性成分。實時熒光PCR技術相當于定性PCR與分子雜交的結合，它能區(qū)別只有少數堿基差異的DNA序列，具有高特異性和高精確性的優(yōu)點[10]。而且實時熒光PCR是在封閉的體系中進行，反應結束無需進行電泳，避免污染和危害，縮短了檢測時間。該方法能夠為清真食品及衍生產品的質量控制和質量監(jiān)督提供適用的技術依據，為保證我區(qū)清真食品及衍生產品的質量，保障食品安全奠定基礎。

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（責任編輯 彭西甜）