SD大鼠血常規(guī)參考值區(qū)間建立

王 蕊(通信作者)，溫賢濤，王 輝，湯菊莉，管 博，曾亞力

(1北京市醫(yī)療器械檢驗所，北京101111;2醫(yī)療器械檢驗與安全性評價北京市重點實驗室，北京101111)

SD大鼠血常規(guī)參考值區(qū)間建立

王 蕊1，2(通信作者)，溫賢濤1，2，王 輝1，2，湯菊莉1，2，管 博1，2，曾亞力1，2

(1北京市醫(yī)療器械檢驗所，北京101111;2醫(yī)療器械檢驗與安全性評價北京市重點實驗室，北京101111)

血常規(guī)是醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗中必須測定的項目，但由于血常規(guī)易受動物品種、來源、年齡、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作、檢測試劑等因素的影響，各實驗室有必要建立自己的血常規(guī)參考值區(qū)間。本文以建立我室大鼠血液學檢測指標參考區(qū)間為目的，以我室常用的SD大鼠為研究動物，結合醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗周期，90d、28d、14d，對不同周齡(8～10周齡、10～12周齡、19～21周齡)的大鼠進行常規(guī)血液學檢測，并對結果進行統(tǒng)計學分析，以95%可信范圍得出參考值區(qū)間。分析發(fā)現，各周齡雌雄大鼠白細胞計數(WBC)、紅細胞比容(HCT)及網織紅細胞(RET)均有顯著性差異，且隨著周齡增加，各周齡雌雄大鼠紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白測定(HGB)及血小板計數(PLT)等指標也開始出現顯著性差異。由此可見大鼠各項血常規(guī)指標受年齡及性別等因素影響很大，本研究所建立的血常規(guī)參考值區(qū)間非常有必要，為我室亞慢(亞急)試驗提供血液學判定依據。

血液學檢測;SD大鼠;參考區(qū)間

0 背景介紹

血液學分析是醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗中臨床病理學觀察項目之一，是用以研究、組織、器官和其他系統(tǒng)毒性反應的重要依據［1－2］。目前醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗主要使用大鼠作為實驗動物，大鼠的血常規(guī)參考區(qū)間也能在一些動物實驗相關文獻中查到，但考慮到這些指標本身受實驗室條件、人員操作、儀器試劑、動物種屬年齡等因素的影響［3－6］，其他實驗室建立的參考區(qū)間不宜直接作為我室的參考，各實驗室建立自己的血常規(guī)參考區(qū)間很有必要，在對實驗結果進行毒性判定時，使用本實驗室自己建立的參考區(qū)間更科學，更可信，本文以我室常用的SD大鼠作為研究動物，在實驗設計時充分考慮到大鼠年齡、人員操作、飼養(yǎng)條件、儀器試劑等因素的影響，結合醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗周期90d(13周)、28d(4周)、14d(2周)對不同周齡的大鼠血常規(guī)進行檢測，并進行統(tǒng)計分析，初步建立常規(guī)參考區(qū)間。

1 材料與方法

(1)實驗動物:SD大鼠 ，6～8周，雌雄各半(雌雄無孕)，由中國食品藥品檢定研究院提供，SCXK(京) 2009－0017，雌雄動物分籠于無毒塑料盒內，每籠5只，每周鼠籠清洗2次，食物為提供的標準顆粒飼料，由科澳協(xié)力實驗動物有限責任公司提供，自由飲水。室溫為20～24℃，相對濕度為40%～70%，飼養(yǎng)2～3周，大鼠活動情況和體征無異常后進行本實驗。

(2)儀器及耗材:血常規(guī)使用的全自動血液分析儀XT－2000i和配套試劑，采用執(zhí)信醫(yī)療提供的配套質控。EDTA抗凝采血管、5mL注射器。

(3)試驗方法:SD大鼠起始周齡6－8周，按飼養(yǎng)時間分三組:13周組、4周組、2周組。飼養(yǎng)結束時這三組大鼠分別為19～21周齡、10～12周齡、8～10周齡。用注射器進行下腔靜脈采血并儲存于EDTA抗凝采血管中，充分混勻后，在血液分析儀上讀數。

(4)統(tǒng)計學處理:應用SPSS 11.0 for windows軟件，進行統(tǒng)計學分析，比較不同性別及不同周齡大鼠血常規(guī)指標的差異。進行數據正態(tài)性分布檢驗，參考范圍采用95%可信區(qū)間。

2 結果

表1為8～10周齡雌雄大鼠血常規(guī)指標均值及參考區(qū)間，統(tǒng)計分析結果顯示，該周齡大鼠的 HCT、MCV、MCHC、WBC、LY、MONO、NEU、BASO及RET等指標雌雄存在顯著性差異。表2為10～12周齡大鼠血常規(guī)結果，統(tǒng)計分析結果顯示，該周齡大鼠的 HGB、RBC、HCT、WBC、LY、MONO、NEU、EO及RET等指標雌雄存在顯著性差異。表3為19～21周齡大鼠血常規(guī)結果，該周齡大鼠的HGB、RBC、HCT、MCV、MCH、WBC、LY、MONO、NEU、EO、BASO、PLT及RET等指標雌雄存在顯著性差異。從變異系數CV%值看，所有周齡的大鼠白細胞計數及分類CV%值都較高。

表4為8～10周齡與10～12周齡大鼠血常規(guī)指標比較，結果顯示雄性大鼠的HGB、RBC、MCV、MCH、WBC、PLT及RET等指標存在顯著性差異。雌性大鼠的MCV、MCH、BASO、PLT及RET等指標存在顯著差異。表5為8～10周齡與19～21周齡大鼠血常規(guī)指標比較，雄性大鼠在HGB、RBC、MCV、MCH、MCHC、NEU、BASO、PLT及RET等指標存在顯著性差異。雌性大鼠的 RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、BASO、PLT及RET等指標存在顯著差異。表6為10～12周齡與19～21周齡大鼠血常規(guī)指標比較，雄性大鼠在RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、NEU及BASO等指標存在顯著性差異。雌性大鼠的HGB、RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、BASO及RET等指標存在顯著差異。

表1 8～10周齡SD大鼠的血常規(guī)指標增均值及參考區(qū)間(雌雄各140只)

表2 10～12周齡SD大鼠的血常規(guī)指標均值及參考區(qū)間(雌雄各40只)

表3 19～21周齡SD大鼠的血常規(guī)指標均值及參考區(qū)間(雌雄各30只)

(續(xù)表)

表4 8～10周齡與10～12周齡SD大鼠的血常規(guī)指標比較

(續(xù)表)

表5 8～10周齡與19～21周齡SD大鼠的血常規(guī)指標比較

(續(xù)表)

表6 10～12周齡與19～21周齡SD大鼠的血常規(guī)指標比較

(續(xù)表)

3 討論

統(tǒng)計分析發(fā)現，各周齡雌雄大鼠白細胞計數(WBC)、紅細胞比容(HCT)及網織紅細胞(RET)均有顯著性差異，且各周齡雄性大鼠WBC、HCT及RET均顯著高于雌性大鼠的 WBC。隨著周齡增加各雌雄大鼠紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白測定(HGB)及血小板計數(PLT)等指標也開始出現顯著性差異。不同周齡大鼠的大部分血常規(guī)指標也存在顯著性差異，可見大鼠血常規(guī)指標受性別及周齡等因素影響。與目前能查到的文獻參考值相比，我室所得的WBC值相比林?。?］、王學文［7］、王德軍等［8］研究結果偏低，但與劉科亮等［9］的研究結果相近。其他指標如HGB、RBC、PLT等也與其它實驗室的參考值存在差異。這充分證明了血常規(guī)指標受動物品種、來源、年齡、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作、檢測試劑等因素的影響。因此各實驗室應該建立本實驗室的血常規(guī)參考區(qū)間，為結果評判提供參考。從各指標的變異系數(CV%)來看，WBC及分類的變異系數均較大，說明這些指標的離散度大，可能是由于這些指標絕對值較小，比較容易受到偶然因素的影響［3］。

醫(yī)療器械亞慢(亞急)毒性試驗中，血常規(guī)是必須檢測的項目之一，是亞慢(亞急)毒性判定的重要指標之一［10－11］。在判斷實驗組大鼠血常規(guī)指標是否正常時，不僅需要與同批對照組大鼠比較，判斷是否具有統(tǒng)計學差異，還應與各實驗室建立的健康大鼠血常規(guī)正常參考區(qū)間進行比較。一些血常規(guī)指標進行統(tǒng)計學分析時，實驗組和對照組進行比較時可能具有顯著性差異，但其值仍落在正常參考區(qū)間中，可以認為這種統(tǒng)計學差異沒有臨床意義。當然，血常規(guī)指標只是判斷亞慢(亞急)性毒性的依據之一，還應該結合血生化及病理結果進行綜合判斷。血常規(guī)指標檢測相對病理分析等時間短，出結果快，在亞慢(亞急)試驗過程中，可將血常規(guī)結果作為初步毒性判定依據，如果血常規(guī)結果顯示被測樣品可能具有毒性，可以考慮暫緩后期的病理試驗，待充分討論后，有必要時再進行病理試驗，即為委托方節(jié)約時間和費用，也為檢測中心節(jié)約大量的人力和時間。

4 結論

大鼠血常規(guī)指標受動物品種、來源、年齡、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作、檢測試劑等因素的影響，各實驗室應該建立本實驗室的大鼠血常規(guī)指標參考區(qū)間。且在條件許可的情況下，盡可能建立不同年齡、不同性別、不同品種的血常規(guī)參考區(qū)間。由于血常規(guī)指標受采血方式、樣本放置時間、檢測試劑、人員操作等的影響明顯，應該制定統(tǒng)一的操作規(guī)程及嚴格遵守，盡可能避免不必要的誤差。作為醫(yī)療器械檢測機構，各醫(yī)療器械檢測中心應該建立自己的參考區(qū)間，不可隨意采用其它實驗室或文獻提供的參考區(qū)間。

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R446.1

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1002－2376(2015)07－0011－05

2014－12－16