高粱鏈格孢葉斑病病原菌鑒定

彭陳+何曉蘭+黃益洪+徐照龍+郭士偉

摘要：對(duì)高粱葉片上的1種葉斑病進(jìn)行了病原菌鑒定。病原菌在PDA平板上生長(zhǎng)迅速，菌絲邊緣白色、中央灰綠色；分生孢子串聯(lián)成鏈狀，褐色，單個(gè)呈近圓柱狀或倒棍棒狀，有橫隔膜2～7個(gè)，縱隔膜0～4個(gè)，鑒定為鏈格孢屬（Alternaria）真菌。

關(guān)鍵詞：高粱；病原菌；鏈格孢菌；癥狀；致病性

中圖分類號(hào)：S432.4+4；S435.14文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0165-01

高粱是世界上重要的禾谷類作物之一，其種植面積僅次于小麥、水稻、玉米和大麥而居第5位。高粱具有抗旱、抗?jié)?、耐高溫、耐寒、耐鹽堿、耐貧瘠等多種抗逆性，被廣泛種植于非洲、北美洲和亞洲，且在南美洲和歐洲等地高粱產(chǎn)業(yè)也在逐步興起[1]。長(zhǎng)期以來(lái)，高粱一直是重要的糧食作物，特別是在非洲，高粱甚至被譽(yù)為“生命之谷”[2]；釀酒也是高粱的主要經(jīng)濟(jì)價(jià)值之一；此外，高粱的莖和葉還可以加工成飼料。

我國(guó)是高粱主產(chǎn)國(guó)之一，單產(chǎn)僅次于美國(guó)，居世界第2位。在實(shí)際生產(chǎn)中，病害是制約高粱產(chǎn)量的主要因素。目前我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的高粱病害有30多種，而在全世界范圍內(nèi)，高粱病害有60余種，并且這些病害在一定條件下可能會(huì)流行成災(zāi)，造成高粱產(chǎn)量和品質(zhì)嚴(yán)重下降。因此，對(duì)高粱病害病原菌的鑒定及其種群地理分布的研究，是高粱生產(chǎn)上的關(guān)鍵問(wèn)題。本研究對(duì)高粱的1種葉斑病病原菌進(jìn)行了鑒定，以期為該病的防治提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1病原菌分離

于2013年10月在江蘇省南通市采集高粱病葉，按常規(guī)方法進(jìn)行菌株分離，單胞純化備用。

1.2致病性測(cè)定

將菌株接種于PDA平板上，于28℃黑暗培養(yǎng)3d；切取菌絲塊接種到高粱離體葉片上，28℃保濕培養(yǎng)，觀察病害。

1.3病原菌鑒定

將菌株接種于PDA平板上，28℃黑暗培養(yǎng)7d，用無(wú)菌水收集孢子，觀察分生孢子形態(tài)，結(jié)合病癥，參照《真菌鑒定手冊(cè)》鑒定病原菌。

2結(jié)果與分析

2.1病害病癥觀察

該病害主要危害高粱葉片，病斑近圓形，中央顏色較淺、淡紅色，邊緣顏色較深、褐色（圖1）。病斑擴(kuò)展受葉脈影響較小，嚴(yán)重時(shí)病斑連接成片，并導(dǎo)致高粱葉片呈淡紅色，最后干枯死亡。

2.2致病性測(cè)定

將分離得到的菌株記為SL1，采用菌絲塊接種高粱離體葉片的方法進(jìn)行致病性測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果與田間癥狀相似（圖2），重新分離可得到接種病原菌，但發(fā)病沒(méi)有田間嚴(yán)重。

2.3病原菌鑒定

病原菌SL1在PDA平板上生長(zhǎng)迅速，4d可長(zhǎng)滿平板。菌絲邊緣白色、中央灰綠色。病原菌產(chǎn)孢量豐富，分生孢子串聯(lián)成鏈狀，褐色，單個(gè)近圓柱狀或倒棍棒狀，有橫隔膜2～7個(gè)，縱隔膜0～4個(gè)，分隔處縊縮（圖3），鑒定其為鏈格孢屬（Alternaria）真菌。

3討論與結(jié)論

鏈格孢菌屬于半知菌絲孢綱絲孢目暗色孢科鏈格孢屬，其適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)繁殖快，產(chǎn)孢能力強(qiáng)，是一種主要的植物病原菌和常見(jiàn)的腐生菌。目前已發(fā)現(xiàn)的鏈格孢菌有近500種，且寄主范圍十分廣泛，包括玉米、馬鈴薯、梨[3]、煙草、番茄及十字花科蔬菜等多種農(nóng)作物，能夠?qū)r(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)造成重要影響[4]。早疫病菌（Alternariasolani）侵染馬鈴薯和番茄引起早疫病[5]，嚴(yán)重時(shí)可造成減產(chǎn)50%以上；白菜黑斑病菌（Alternariabrassicae）感染引起的十字花科蔬菜黑斑病，曾在我國(guó)大規(guī)模暴發(fā)流行[6]；長(zhǎng)柄鏈格孢（Alternarialongipes）引起的煙草赤星病也是煙草的主要病害之一[7]。除了能夠在植物體內(nèi)致病，鏈格孢菌還能夠引起人和動(dòng)物的許多疾病，如角膜炎、流涎癥、胃腸出血，甲癬等[8]。作為一類常見(jiàn)的腐生菌，鏈格孢可腐生在污水、皮革、木材、紡織品等多種基質(zhì)上，有些鏈格孢菌還可腐生在植物枯死病斑上。鏈格孢菌作為收獲后病原菌，引起的腐爛所造成的損失甚至能達(dá)到農(nóng)業(yè)總產(chǎn)量的50%[9]。

本研究對(duì)高粱的1種葉斑病病原菌進(jìn)行了分離和鑒定，證明其為鏈格孢菌。此葉斑病在高粱葉片上發(fā)病嚴(yán)重，但是在致病性鑒定試驗(yàn)中發(fā)病較輕，可能是由于試驗(yàn)中的溫度和濕度不是該病菌發(fā)病的最適條件，因此對(duì)鏈格孢菌侵染高粱的最適條件尚需進(jìn)一步研究。此外，為了更好地控制該病的發(fā)生，鏈格孢菌在高粱葉片中的侵染致病過(guò)程和致病機(jī)制還需要進(jìn)行更深層次的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]PalmerGH.Sorghum—food，beverageandbrewingpotentials[J].ProcessBiochemistry，1992，27（3）：145-153.

[2]余傳漲，翟國(guó)偉，鄒桂花，等.41個(gè)高粱品種遺傳多樣性的SSR標(biāo)記檢測(cè)[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，26（2）：248-253.

[3]劉新偉，陳巖，宋福，等.我國(guó)梨和部分國(guó)外梨果實(shí)上鏈格孢菌的鑒定研究[J].植物檢疫，2009，23（5）：1-5.

[4]PeeverTL，SuG，Carpenter-BoggsL，etal.Molecularsystematicsofcitrus-associatedAlternariaspecies[J].Mycologia，2004，96（1）：119-134.

[5]RotemJ.ThegenusAlternaria：biology，epidemiology，andpathogenicity[M].StPaul，Minnesota：AmericanPhytopathologicalSocietyPress，1998.

[6]鄭建秋，胡榮娟，王艷梅，等.秋白菜黑斑病產(chǎn)量損失關(guān)鍵期分析[J].北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，1994，12（2）：39-40.

[7]易龍，肖崇剛，馬冠華，等.防治煙草赤星病有益內(nèi)生細(xì)菌的篩選及抑菌作用[J].微生物學(xué)報(bào)，2004，44（1）：19-22.

[8]AnjosJ，F(xiàn)ernandesC，SilvaBM，etal.β（1，3）-glucansynthasecomplexfromAlternariainfectoria，araredematiaceoushumanpathogen[J].MedicalMycology，2012，50（7）：716-725.

[9]WilsonCL，WisniewskiME.Biologicalcontrolofpostharvestplantdiseasesoffruitsandvegetables：theoryandpractice[M].BocaRaton，F(xiàn)lorida：CRCPress，1994：465.

摘要：對(duì)高粱葉片上的1種葉斑病進(jìn)行了病原菌鑒定。病原菌在PDA平板上生長(zhǎng)迅速，菌絲邊緣白色、中央灰綠色；分生孢子串聯(lián)成鏈狀，褐色，單個(gè)呈近圓柱狀或倒棍棒狀，有橫隔膜2～7個(gè)，縱隔膜0～4個(gè)，鑒定為鏈格孢屬（Alternaria）真菌。

關(guān)鍵詞：高粱；病原菌；鏈格孢菌；癥狀；致病性

中圖分類號(hào)：S432.4+4；S435.14文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0165-01

高粱是世界上重要的禾谷類作物之一，其種植面積僅次于小麥、水稻、玉米和大麥而居第5位。高粱具有抗旱、抗?jié)?、耐高溫、耐寒、耐鹽堿、耐貧瘠等多種抗逆性，被廣泛種植于非洲、北美洲和亞洲，且在南美洲和歐洲等地高粱產(chǎn)業(yè)也在逐步興起[1]。長(zhǎng)期以來(lái)，高粱一直是重要的糧食作物，特別是在非洲，高粱甚至被譽(yù)為“生命之谷”[2]；釀酒也是高粱的主要經(jīng)濟(jì)價(jià)值之一；此外，高粱的莖和葉還可以加工成飼料。

我國(guó)是高粱主產(chǎn)國(guó)之一，單產(chǎn)僅次于美國(guó)，居世界第2位。在實(shí)際生產(chǎn)中，病害是制約高粱產(chǎn)量的主要因素。目前我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的高粱病害有30多種，而在全世界范圍內(nèi)，高粱病害有60余種，并且這些病害在一定條件下可能會(huì)流行成災(zāi)，造成高粱產(chǎn)量和品質(zhì)嚴(yán)重下降。因此，對(duì)高粱病害病原菌的鑒定及其種群地理分布的研究，是高粱生產(chǎn)上的關(guān)鍵問(wèn)題。本研究對(duì)高粱的1種葉斑病病原菌進(jìn)行了鑒定，以期為該病的防治提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1病原菌分離

于2013年10月在江蘇省南通市采集高粱病葉，按常規(guī)方法進(jìn)行菌株分離，單胞純化備用。

1.2致病性測(cè)定

將菌株接種于PDA平板上，于28℃黑暗培養(yǎng)3d；切取菌絲塊接種到高粱離體葉片上，28℃保濕培養(yǎng)，觀察病害。

1.3病原菌鑒定

將菌株接種于PDA平板上，28℃黑暗培養(yǎng)7d，用無(wú)菌水收集孢子，觀察分生孢子形態(tài)，結(jié)合病癥，參照《真菌鑒定手冊(cè)》鑒定病原菌。

2結(jié)果與分析

2.1病害病癥觀察

該病害主要危害高粱葉片，病斑近圓形，中央顏色較淺、淡紅色，邊緣顏色較深、褐色（圖1）。病斑擴(kuò)展受葉脈影響較小，嚴(yán)重時(shí)病斑連接成片，并導(dǎo)致高粱葉片呈淡紅色，最后干枯死亡。

2.2致病性測(cè)定

將分離得到的菌株記為SL1，采用菌絲塊接種高粱離體葉片的方法進(jìn)行致病性測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果與田間癥狀相似（圖2），重新分離可得到接種病原菌，但發(fā)病沒(méi)有田間嚴(yán)重。

2.3病原菌鑒定

病原菌SL1在PDA平板上生長(zhǎng)迅速，4d可長(zhǎng)滿平板。菌絲邊緣白色、中央灰綠色。病原菌產(chǎn)孢量豐富，分生孢子串聯(lián)成鏈狀，褐色，單個(gè)近圓柱狀或倒棍棒狀，有橫隔膜2～7個(gè)，縱隔膜0～4個(gè)，分隔處縊縮（圖3），鑒定其為鏈格孢屬（Alternaria）真菌。

3討論與結(jié)論

鏈格孢菌屬于半知菌絲孢綱絲孢目暗色孢科鏈格孢屬，其適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)繁殖快，產(chǎn)孢能力強(qiáng)，是一種主要的植物病原菌和常見(jiàn)的腐生菌。目前已發(fā)現(xiàn)的鏈格孢菌有近500種，且寄主范圍十分廣泛，包括玉米、馬鈴薯、梨[3]、煙草、番茄及十字花科蔬菜等多種農(nóng)作物，能夠?qū)r(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)造成重要影響[4]。早疫病菌（Alternariasolani）侵染馬鈴薯和番茄引起早疫病[5]，嚴(yán)重時(shí)可造成減產(chǎn)50%以上；白菜黑斑病菌（Alternariabrassicae）感染引起的十字花科蔬菜黑斑病，曾在我國(guó)大規(guī)模暴發(fā)流行[6]；長(zhǎng)柄鏈格孢（Alternarialongipes）引起的煙草赤星病也是煙草的主要病害之一[7]。除了能夠在植物體內(nèi)致病，鏈格孢菌還能夠引起人和動(dòng)物的許多疾病，如角膜炎、流涎癥、胃腸出血，甲癬等[8]。作為一類常見(jiàn)的腐生菌，鏈格孢可腐生在污水、皮革、木材、紡織品等多種基質(zhì)上，有些鏈格孢菌還可腐生在植物枯死病斑上。鏈格孢菌作為收獲后病原菌，引起的腐爛所造成的損失甚至能達(dá)到農(nóng)業(yè)總產(chǎn)量的50%[9]。

本研究對(duì)高粱的1種葉斑病病原菌進(jìn)行了分離和鑒定，證明其為鏈格孢菌。此葉斑病在高粱葉片上發(fā)病嚴(yán)重，但是在致病性鑒定試驗(yàn)中發(fā)病較輕，可能是由于試驗(yàn)中的溫度和濕度不是該病菌發(fā)病的最適條件，因此對(duì)鏈格孢菌侵染高粱的最適條件尚需進(jìn)一步研究。此外，為了更好地控制該病的發(fā)生，鏈格孢菌在高粱葉片中的侵染致病過(guò)程和致病機(jī)制還需要進(jìn)行更深層次的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]PalmerGH.Sorghum—food，beverageandbrewingpotentials[J].ProcessBiochemistry，1992，27（3）：145-153.

[2]余傳漲，翟國(guó)偉，鄒桂花，等.41個(gè)高粱品種遺傳多樣性的SSR標(biāo)記檢測(cè)[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，26（2）：248-253.

[3]劉新偉，陳巖，宋福，等.我國(guó)梨和部分國(guó)外梨果實(shí)上鏈格孢菌的鑒定研究[J].植物檢疫，2009，23（5）：1-5.

[4]PeeverTL，SuG，Carpenter-BoggsL，etal.Molecularsystematicsofcitrus-associatedAlternariaspecies[J].Mycologia，2004，96（1）：119-134.

[5]RotemJ.ThegenusAlternaria：biology，epidemiology，andpathogenicity[M].StPaul，Minnesota：AmericanPhytopathologicalSocietyPress，1998.

[6]鄭建秋，胡榮娟，王艷梅，等.秋白菜黑斑病產(chǎn)量損失關(guān)鍵期分析[J].北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，1994，12（2）：39-40.

[7]易龍，肖崇剛，馬冠華，等.防治煙草赤星病有益內(nèi)生細(xì)菌的篩選及抑菌作用[J].微生物學(xué)報(bào)，2004，44（1）：19-22.

[8]AnjosJ，F(xiàn)ernandesC，SilvaBM，etal.β（1，3）-glucansynthasecomplexfromAlternariainfectoria，araredematiaceoushumanpathogen[J].MedicalMycology，2012，50（7）：716-725.

[9]WilsonCL，WisniewskiME.Biologicalcontrolofpostharvestplantdiseasesoffruitsandvegetables：theoryandpractice[M].BocaRaton，F(xiàn)lorida：CRCPress，1994：465.

摘要：對(duì)高粱葉片上的1種葉斑病進(jìn)行了病原菌鑒定。病原菌在PDA平板上生長(zhǎng)迅速，菌絲邊緣白色、中央灰綠色；分生孢子串聯(lián)成鏈狀，褐色，單個(gè)呈近圓柱狀或倒棍棒狀，有橫隔膜2～7個(gè)，縱隔膜0～4個(gè)，鑒定為鏈格孢屬（Alternaria）真菌。

關(guān)鍵詞：高粱；病原菌；鏈格孢菌；癥狀；致病性

中圖分類號(hào)：S432.4+4；S435.14文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0165-01

高粱是世界上重要的禾谷類作物之一，其種植面積僅次于小麥、水稻、玉米和大麥而居第5位。高粱具有抗旱、抗?jié)?、耐高溫、耐寒、耐鹽堿、耐貧瘠等多種抗逆性，被廣泛種植于非洲、北美洲和亞洲，且在南美洲和歐洲等地高粱產(chǎn)業(yè)也在逐步興起[1]。長(zhǎng)期以來(lái)，高粱一直是重要的糧食作物，特別是在非洲，高粱甚至被譽(yù)為“生命之谷”[2]；釀酒也是高粱的主要經(jīng)濟(jì)價(jià)值之一；此外，高粱的莖和葉還可以加工成飼料。

我國(guó)是高粱主產(chǎn)國(guó)之一，單產(chǎn)僅次于美國(guó)，居世界第2位。在實(shí)際生產(chǎn)中，病害是制約高粱產(chǎn)量的主要因素。目前我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的高粱病害有30多種，而在全世界范圍內(nèi)，高粱病害有60余種，并且這些病害在一定條件下可能會(huì)流行成災(zāi)，造成高粱產(chǎn)量和品質(zhì)嚴(yán)重下降。因此，對(duì)高粱病害病原菌的鑒定及其種群地理分布的研究，是高粱生產(chǎn)上的關(guān)鍵問(wèn)題。本研究對(duì)高粱的1種葉斑病病原菌進(jìn)行了鑒定，以期為該病的防治提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1病原菌分離

于2013年10月在江蘇省南通市采集高粱病葉，按常規(guī)方法進(jìn)行菌株分離，單胞純化備用。

1.2致病性測(cè)定

將菌株接種于PDA平板上，于28℃黑暗培養(yǎng)3d；切取菌絲塊接種到高粱離體葉片上，28℃保濕培養(yǎng)，觀察病害。

1.3病原菌鑒定

將菌株接種于PDA平板上，28℃黑暗培養(yǎng)7d，用無(wú)菌水收集孢子，觀察分生孢子形態(tài)，結(jié)合病癥，參照《真菌鑒定手冊(cè)》鑒定病原菌。

2結(jié)果與分析

2.1病害病癥觀察

該病害主要危害高粱葉片，病斑近圓形，中央顏色較淺、淡紅色，邊緣顏色較深、褐色（圖1）。病斑擴(kuò)展受葉脈影響較小，嚴(yán)重時(shí)病斑連接成片，并導(dǎo)致高粱葉片呈淡紅色，最后干枯死亡。

2.2致病性測(cè)定

將分離得到的菌株記為SL1，采用菌絲塊接種高粱離體葉片的方法進(jìn)行致病性測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果與田間癥狀相似（圖2），重新分離可得到接種病原菌，但發(fā)病沒(méi)有田間嚴(yán)重。

2.3病原菌鑒定

病原菌SL1在PDA平板上生長(zhǎng)迅速，4d可長(zhǎng)滿平板。菌絲邊緣白色、中央灰綠色。病原菌產(chǎn)孢量豐富，分生孢子串聯(lián)成鏈狀，褐色，單個(gè)近圓柱狀或倒棍棒狀，有橫隔膜2～7個(gè)，縱隔膜0～4個(gè)，分隔處縊縮（圖3），鑒定其為鏈格孢屬（Alternaria）真菌。

3討論與結(jié)論

鏈格孢菌屬于半知菌絲孢綱絲孢目暗色孢科鏈格孢屬，其適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)繁殖快，產(chǎn)孢能力強(qiáng)，是一種主要的植物病原菌和常見(jiàn)的腐生菌。目前已發(fā)現(xiàn)的鏈格孢菌有近500種，且寄主范圍十分廣泛，包括玉米、馬鈴薯、梨[3]、煙草、番茄及十字花科蔬菜等多種農(nóng)作物，能夠?qū)r(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)造成重要影響[4]。早疫病菌（Alternariasolani）侵染馬鈴薯和番茄引起早疫病[5]，嚴(yán)重時(shí)可造成減產(chǎn)50%以上；白菜黑斑病菌（Alternariabrassicae）感染引起的十字花科蔬菜黑斑病，曾在我國(guó)大規(guī)模暴發(fā)流行[6]；長(zhǎng)柄鏈格孢（Alternarialongipes）引起的煙草赤星病也是煙草的主要病害之一[7]。除了能夠在植物體內(nèi)致病，鏈格孢菌還能夠引起人和動(dòng)物的許多疾病，如角膜炎、流涎癥、胃腸出血，甲癬等[8]。作為一類常見(jiàn)的腐生菌，鏈格孢可腐生在污水、皮革、木材、紡織品等多種基質(zhì)上，有些鏈格孢菌還可腐生在植物枯死病斑上。鏈格孢菌作為收獲后病原菌，引起的腐爛所造成的損失甚至能達(dá)到農(nóng)業(yè)總產(chǎn)量的50%[9]。

本研究對(duì)高粱的1種葉斑病病原菌進(jìn)行了分離和鑒定，證明其為鏈格孢菌。此葉斑病在高粱葉片上發(fā)病嚴(yán)重，但是在致病性鑒定試驗(yàn)中發(fā)病較輕，可能是由于試驗(yàn)中的溫度和濕度不是該病菌發(fā)病的最適條件，因此對(duì)鏈格孢菌侵染高粱的最適條件尚需進(jìn)一步研究。此外，為了更好地控制該病的發(fā)生，鏈格孢菌在高粱葉片中的侵染致病過(guò)程和致病機(jī)制還需要進(jìn)行更深層次的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]PalmerGH.Sorghum—food，beverageandbrewingpotentials[J].ProcessBiochemistry，1992，27（3）：145-153.

[2]余傳漲，翟國(guó)偉，鄒桂花，等.41個(gè)高粱品種遺傳多樣性的SSR標(biāo)記檢測(cè)[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，26（2）：248-253.

[3]劉新偉，陳巖，宋福，等.我國(guó)梨和部分國(guó)外梨果實(shí)上鏈格孢菌的鑒定研究[J].植物檢疫，2009，23（5）：1-5.

[4]PeeverTL，SuG，Carpenter-BoggsL，etal.Molecularsystematicsofcitrus-associatedAlternariaspecies[J].Mycologia，2004，96（1）：119-134.

[5]RotemJ.ThegenusAlternaria：biology，epidemiology，andpathogenicity[M].StPaul，Minnesota：AmericanPhytopathologicalSocietyPress，1998.

[6]鄭建秋，胡榮娟，王艷梅，等.秋白菜黑斑病產(chǎn)量損失關(guān)鍵期分析[J].北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，1994，12（2）：39-40.

[7]易龍，肖崇剛，馬冠華，等.防治煙草赤星病有益內(nèi)生細(xì)菌的篩選及抑菌作用[J].微生物學(xué)報(bào)，2004，44（1）：19-22.

[8]AnjosJ，F(xiàn)ernandesC，SilvaBM，etal.β（1，3）-glucansynthasecomplexfromAlternariainfectoria，araredematiaceoushumanpathogen[J].MedicalMycology，2012，50（7）：716-725.

[9]WilsonCL，WisniewskiME.Biologicalcontrolofpostharvestplantdiseasesoffruitsandvegetables：theoryandpractice[M].BocaRaton，F(xiàn)lorida：CRCPress，1994：465.