Th17細胞相關(guān)因子在蕈樣肉芽腫患者外周血中的表達和意義

羅麗敏 李軍 劉菡 劉勁松

1.湖北醫(yī)藥學院附屬東風總醫(yī)院皮膚科，湖北十堰442000；

2.湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院心內(nèi)科，湖北十堰442000

Th17細胞相關(guān)因子在蕈樣肉芽腫患者外周血中的表達和意義

羅麗敏1李軍2劉菡1劉勁松1

1.湖北醫(yī)藥學院附屬東風總醫(yī)院皮膚科，湖北十堰442000；

2.湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院心內(nèi)科，湖北十堰442000

目的探討輔助性T細胞17（Th17）細胞相關(guān)因子在蕈樣肉芽腫患者外周血中的表達及意義。方法以湖北醫(yī)藥學院附屬東風總醫(yī)院（以下簡稱“我院”）2010年1月～2014年10月確診為蕈樣肉芽腫的24例患者作為治療組，以我院同期健康人群24例作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測兩組患者外周血中白介素17（IL-17）、白介素23（IL-23）和白介素16（IL-16）的表達水平，比較兩組之間的差異。結(jié)果治療組患者外周血中IL-17、IL-23和IL-6的表達水平分別為（210.14±33.47）、（244.11±39.88）、（24.54±7.66）ng/L，均高于對照組[（162.34±35.11）、（111.26±36.35）、（10.90±6.81）ng/L]，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。結(jié)論Th17細胞相關(guān)因子在蕈樣肉芽腫患者外周血中的過表達，提示其可能與蕈樣肉芽腫發(fā)病有關(guān)。

蕈樣肉芽腫；輔助性T細胞17；白介素17；白介素23；白介素6

蕈樣肉芽腫又名蕈樣霉菌?。╩ycosis fungoides），是起源于記憶性輔助性T細胞的低度惡性的皮膚T細胞淋巴瘤，約占所有皮膚T細胞淋巴瘤（cutaneous T-cell lymphoma，CTCL）的50%[1]，多累及老年人，病程呈慢性漸進性，目前具體病因及發(fā)病機制尚不明確，研究提示遺傳因素、環(huán)境因素及免疫因素參與了蕈樣肉芽腫的發(fā)生，而其中免疫機制的探討是目前蕈樣肉芽腫研究的熱點及難點[2-6]。輔助性T細胞17（Thelper 17 cell，Th17）是不同于Th1和Th2細胞亞群的一種新的CD4+T細胞亞群，因分泌白介素（IL）-17而得名，IL-23能誘導幼稚CD4+T細胞分化成熟成Th17細胞，并分泌IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-6、腫瘤壞死因子α（TNF-α）及CXCL1、CXCL8等趨化因子，在自身免疫反應及炎性反應中發(fā)揮重要作用[7-8]。然而目前對于蕈樣肉芽腫與Th17細胞相關(guān)因子是否相關(guān)以及Th17細胞相關(guān)因子是否參與蕈樣肉芽腫的致病過程，國內(nèi)尚未見報道（檢索范圍：蕈樣肉芽腫并Th17細胞相關(guān)因子），因此，本研究以酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測蕈樣肉芽腫患者外周血中IL-17、IL-23和IL-6的表達水平，以探討Th17細胞相關(guān)因子在蕈樣肉芽腫發(fā)病機制中的可能作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以湖北醫(yī)藥學院附屬東風總醫(yī)院（以下簡稱“我院”）2010年1月～2014年10月皮膚科門診、住院及會診的24例蕈樣肉芽腫患者作為治療組，其中男13例，女11例；年齡28～75歲，平均（49.4±1.9）歲；病程8個月～30年，平均（8.6±0.2）年。所有納入研究的患者均行常規(guī)組織病理及免疫病理檢查，并符合《中國臨床皮膚病學》[1]蕈樣肉芽腫診斷標準，并且近半年均未接受系統(tǒng)藥物治療，無合并其他皮膚病或系統(tǒng)性疾病。對照組24名來自我院體檢中心的健康人群，均為隨機抽查，男女各12名，年齡25～64歲，平均（43.2±2.1）歲。所有入組人員均行血常規(guī)、肝腎功能、尿常規(guī)、心電圖等檢查。兩組患者年齡、常規(guī)檢查比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 主要儀器和試劑

人IL-17、IL-23和IL-6 ELISA試劑盒購于美國eBioscience公司；酶標儀為美國產(chǎn)Eh800型BioTek酶標儀，離心機Eppendorf5810由德國Eppendorf公司生產(chǎn)；超低溫（-80℃）冰箱由日本Sanyo公司生產(chǎn)。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗標本的收集及儲存清晨空腹狀態(tài)下，取治療組和對照組患者肘靜脈血5 mL，置于含有酶抑制劑的抗凝管中，以3000 r/min低溫離心15 min，分離血漿保存于-80℃冰箱中。

1.3.2 采用ELISA法檢測血清標本中人IL-17、IL-23和IL-6的含量試劑配制和操作步驟嚴格按說明書進行，分別設(shè)置空白孔、標準品孔和待測樣品孔，顯色后用酶標儀在450 nm處檢測A值，建立標準曲線，計算出樣本含量。所有檢測指標均同次復驗。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料采用均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血液項目檢測結(jié)果比較

治療組和對照組患者的血常規(guī)、血生化等血液檢測結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組血液項目檢測結(jié)果比較

表1 兩組血液項目檢測結(jié)果比較

注：WBC：白細胞；Cr：肌酐；ALT：谷丙轉(zhuǎn)氨酶

對照組治療組24 24 7.05±0.72 7.54±0.58 99.87±4.17 104.21±2.41 32.24±2.53 30.55±3.27

2.2 兩組血清中IL-17、IL-23和IL-6的表達情況比較

治療組患者外周血中IL-17、IL-23和IL-6的含量水平均顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 兩組血清中IL-17、IL-23和IL-6的表達情況比較（ng/L，x±s）

3 討論

蕈樣肉芽腫首先由1806年法國的Alibert醫(yī)生報道，是皮膚T細胞淋巴瘤的最常見類型，男女比例為1.6～2.0∶1，病程呈慢性漸進性[9]。臨床上根據(jù)皮損改變分為紅斑期、斑塊期及腫瘤期三期。蕈樣肉芽腫的預后與臨床分期、皮損的嚴重程度及是否系統(tǒng)受累密切相關(guān)，因此，明確蕈樣肉芽腫的發(fā)病機制，早期診斷、早期治療對改善病情預后尤其重要。

傳統(tǒng)的CD4+T細胞分為Th1和Th2細胞亞群，Th17細胞是一種新的CD4+T細胞亞群，具有獨特的發(fā)育分化調(diào)節(jié)機制，在IL-23的刺激誘導下可促進CD4+T細胞分化為Th17細胞，使其分泌IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-6、TNF-α及CXCL1、CXCL8等趨化因子[2,9-11]。Chong等[12]應用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RTPCR）技術(shù)對正常健康人群、銀屑病患者、早期及晚期蕈樣肉芽腫患者外周血Th1、Th2及Th17細胞亞群細胞因子做比較，結(jié)果提示早期及晚期蕈樣肉芽腫表達高水平IL-17，Krejsgaard等[13]研究認為，與正常人比較，IL-17受體在皮膚T細胞淋巴瘤的表達增加，而IL-17F與皮膚T細胞淋巴瘤的皮損嚴重程度及疾病進程相關(guān)，這與Ciree等[4]的研究結(jié)果相符，Doherty[15]的研究提示IL-23在蕈樣肉芽腫患者表皮角質(zhì)形成細胞及真皮淋巴細胞過表達，以上結(jié)果提示IL-17細胞因子參與蕈樣肉芽腫的發(fā)病過程。

本研究結(jié)果表明，與正常健康人群相比，細胞因子IL-17、IL-23和IL-6在蕈樣肉芽腫患者外周血中呈表達增加，差異均有統(tǒng)計學意義，因此，筆者推測IL-23可能刺激誘導CD4+T細胞分化為細胞，進而使其分泌IL-17、IL-6等細胞因子，參與蕈樣肉芽腫的發(fā)病，從而加重皮損的嚴重程度，促進病情進程。所以，加大樣本量，深入探討Th17細胞相關(guān)因子在蕈樣肉芽腫中的可能作用機制，有利于為臨床治療蕈樣肉芽腫提供新的思路和線索。

[1]趙辨.中國臨床皮膚病學[M].南京：江蘇科學技術(shù)出版社，2010：1662-1668.

[2]Mease PJ.Inhibition of interleukin-17，interleukin-23 and the TH17 cell pathway in the treatment of psoriatic arthritis and psoriasis[J].Curr Opin Rheumatol，2015，27（2）：127-133.

[3]Humme D，Nast A，Erdmann R，et al.Systematic review of combination therapies for mycosis fungoides[J].Cancer Treat Rev，2014，40（8）：927-933.

[4]Moraes FY，Carvalho HA，Hanna SA，et al.Literature review of clinical results of total skin electron irradiation（TSEBT）of mycosis fungoides in adults[J].Rep Pract Oncol Radiother，2014，19（2）：92-98.

[5]Olek-Hrab K，Silny W.Diagnostics in mycosis fungoides and Sezary syndrome[J].Rep Pract Oncol Radiother，2014，19（2）：72-76.

[6]Vollmer RT.A review of survival in mycosis fungoides[J]. Am J Clin Pathol，2014，141（5）：706-711.

[7]Gaffen SL，Jain R，Garg AV，et al.The IL-23-IL-17 immune axis：from mechanisms to therapeutic testing[J].Nat Rev Immunol，2014，14（9）：585-600.

[8]Blake SJ，Teng MW.Role of IL-17 and IL-22 in autoimmunity and cancer[J].Actas Dermosifiliogr，2014，105（Suppl 1）：41-50.

[9]Shabgah AG，F(xiàn)attahi E，Shahneh FZ.Interleukin-17 in human inflammatory diseases[J].Postepy Dermatol Alergol，2014，31（4）：256-261.

[10]Zambrano-Zaragoza JF，Romo-Martinez EJ，Duran-Avelar MJ，et al.Th17 cells in autoimmune and infectious diseases[J].Int J Inflam，2014，（2014）：651503.

[11]Lin S，Yang X，Liang D，et al.Treg cells：a potential regulator for IL-22 expression[J].Int J Clin Exp Pathol，2014，7（2）：474-480.

[12]Chong BF，Wilson AJ，Gibson HM，et al.Immune function abnormalities in peripheral blood mononuclear cell cytokine expression differentiates stages of cutaneous T-cell lymphoma/mycosis fungoides[J].Clin Cancer Res，2008，14（3）：646-653.

[13]Krejsgaard T，Litvinov IV，Wang Y，et al.Elucidating the role of interleukin-17F in cutaneous T-celllymphoma[J]. Blood，2013，122（6）：943-950.

[14]Ciree A，Michel L，Camilleri-Broet S，et al.Expression and activity of IL-17 in cutaneous T-celllymphomas（mycosis fungoides and Sezary syndrome）[J].Int J Cancer，2004，112（1）：113-120.

[15]Doherty SD，Ni X，Doherty CB，et al.Abnormal expression of interleukin-23 in mycosis fungoides/Sezary syndrome lesions[J].Arch Dermatol Res，2006，298（7）：353-356.

Expression and significance of Th17 related cytokines in peripheral blood of patients with mycosis fungoides

LUO Limin1LI Jun2LIU Han1LIU Jinsong1
1.Department of Dermatology,Dongfeng General Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Hubei Province, Shiyan 442000,China;2.Department of Cardiology,Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Hubei Province,Shiyan 442000,China

ObjectiveTo explore the expression and significance of T helper 17 cell(Th17)related cytokines in peripheral blood of patients with mycosis fungoides.Methods24 patients diagnosed as mycosis fungoides in Dongfeng General Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine(“our hospital”for short)from January 2010 to October 2014 were taken as treatment group,24 healthy persons at the same time in our hospital were taken as control group. Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)was used to analyze the expression of interleukin 17(IL-17),interleukin 23(IL-23)and interleukin 6(IL-6)in peripheral blood of the two groups,and the differences between the two groups were compared.ResultsThe levels of IL-17,IL-23 and IL-6 in peripheral blood of treatment group[(210.14±33.47), (244.11±39.88),(24.54±7.66)ng/L]were significantly higher than those of control group[(162.34±35.11),(111.26± 36.35),(10.90±6.81)ng/L],the differences were all statistically significant(allP＜0.05).ConclusionThe over-expression of Th17 related cytokines in peripheral blood of patients with mycosis fungoides indicates that it may be related to the genesis of mycosis fungoides.

Mycosis fungoides;Th17 cell;IL-17;IL-23;IL-6

R758.63 [

]A [

]1673-7210（2015）08（b）-0101-03

2015-01-26本文編輯：張瑜杰）

湖北省自然科學基金計劃項目（2011CDC049）；湖北省十堰市科學技術(shù)研究與開發(fā)項目計劃（2010st39）。

羅麗敏（1980-），女，碩士；研究方向：免疫性皮膚病的發(fā)病機制。

劉菡（1966-），女，主任醫(yī)師；研究方向：真菌性皮膚病。