參芎化瘀膠囊對(duì)全腦缺血大鼠海馬區(qū)Notch1/GAP-43 表達(dá)的影響

周 娜 趙雅寧 李建民

1.華北理工大學(xué)護(hù)理與康復(fù)學(xué)院，河北唐山 063000；2.華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，河北唐山 063000

參芎化瘀膠囊對(duì)全腦缺血大鼠海馬區(qū)Notch1/GAP-43 表達(dá)的影響

周 娜1趙雅寧1李建民2

1.華北理工大學(xué)護(hù)理與康復(fù)學(xué)院，河北唐山 063000；2.華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，河北唐山 063000

目的探討參芎化瘀膠囊對(duì)全腦缺血再灌注大鼠海馬區(qū) Notch1/GAP-43 表達(dá)的影響。方法將 100 只健康雄性 SD 大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（n = 25）、腦缺血再灌注組（n = 25）、參芎化瘀膠囊低劑量組（n = 25）以及高劑量組（n = 25）。 參芎化瘀膠囊低劑量組以及高劑量組灌胃劑量為 240、480 mg/（kg·d），假手術(shù)組和腦缺血再灌注組按10 mL/kg 體重給予蒸餾水，早上 8∶00 給藥，每日 1 次，連續(xù) 7 d。 運(yùn)用改良的 Pulsineli 4 血管阻斷（4-VO）法進(jìn)行全腦缺血再灌注模型的制作，分別于 1、2、3、7、14 d 斷頭處死取海馬組織，HE 染色觀察海馬細(xì)胞形態(tài)變化，免疫組化法檢測(cè) Notch1、GAP-43 的表達(dá)。 造模后 1～3 d 采用橫木行走實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能。結(jié)果與假手術(shù)組比較，腦缺血再灌注組海馬區(qū)正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05），Notch1（術(shù)后 1、2、3 d）、GAP-43（術(shù)后 3、7、14 d）表達(dá)均增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05），橫木行走實(shí)驗(yàn)評(píng)分明顯減少（P ＜ 0.05）；與腦缺血再灌注組比較，參芎化瘀膠囊低劑量組正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)增多，Notch1、GAP-43 蛋白明顯增多（P ＜ 0.05），橫木行走實(shí)驗(yàn)評(píng)分明顯提高（P ＜ 0.05）。 參芎化瘀膠囊高劑量組上述各指標(biāo)變化表現(xiàn)得更加明顯（P ＜ 0.05）。 腦缺血再灌注組和參芎化瘀膠囊低劑量組中 Notch1 和 GAP-43 表達(dá)均呈正相關(guān)（r = 0.838，P ＜ 0.01；r = 0.786，P ＜0.01）。結(jié)論參芎化瘀膠囊可能通過(guò) Notch1/GAP-43 通路對(duì)全腦缺血大鼠起神經(jīng)保護(hù)作用。

全腦缺血；參芎化瘀膠囊；Notch1；GAP-43

參芎化瘀膠囊中含有多味中草藥，有通絡(luò)化瘀、益氣養(yǎng)血、療傷定通的功效，有研究表明此藥對(duì)腦有 保護(hù) 作 用[1-3]， 但具體機(jī)制尚不明確。 Notch1 是 Notch通路的一個(gè)受體蛋白，其能精確調(diào)控多種細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。 有研究提示[4-5]，Notch1 對(duì)缺血損傷后的神經(jīng)發(fā)生以及腦的功能恢復(fù)具有重要作用。 GAP-43是特異性表達(dá)于哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)上的生長(zhǎng)相 關(guān) 蛋白，當(dāng)腦神 經(jīng)損傷 時(shí)，GAP-43 表 達(dá)的增 高 是內(nèi)源性神經(jīng)再生過(guò)程中的一個(gè)特征，它可以作為神經(jīng)元發(fā)育生長(zhǎng)、神經(jīng)再生以及成熟中樞神經(jīng)系統(tǒng)中突觸重建和可塑性的標(biāo)志物[6]。 本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用四血管堵塞方法建立全腦缺血模型，對(duì)腦損傷的大鼠 施予高、低劑量的中藥參芎化瘀膠囊，目的是觀察各組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)，同時(shí)從 Notch1/GAP-43 角度來(lái)探討參芎化瘀膠囊對(duì)腦缺血的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

100 只健康成年雄性 SD（Sprague-Dawley）大鼠，體重 250～300 g，購(gòu)買于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：SCXK（京）2010-0013，喂養(yǎng)在華北理工大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中，室溫在（24±2）℃，自然光照射。 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按隨機(jī)數(shù)字表法分為四組：假手術(shù)組（25 只）、腦缺血再灌注組（25 只）、參芎化瘀膠囊低劑量組（25 只）、參芎化瘀膠囊高劑量組（25 只）。除假手術(shù)組外，其余三組均將大鼠造模成全腦缺血 15 min。

1.2 藥物

參芎化瘀膠囊主要是由中草藥川芎、人參、石菖蒲、紫河車、龍血竭等多種成分組成的復(fù)方制劑，由華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院研制，其生產(chǎn)批號(hào)為 Z20051586。

1.3 試劑和儀器

Rabbit Anti-GA P43、Rabbit Anti-Notch1 多 克 隆抗體（北京博奧森公司），濃縮型 DAB 試劑盒（北京中杉金橋生物公司），PV-6001 一步法聚合物檢測(cè)系統(tǒng)（北京中杉金橋生物公司），石蠟切片機(jī)（德國(guó) LEICA），顯微 鏡 （日 本 Olympus Ixto），恒溫?cái)?片 烤 片機(jī)（TK-218型，湖北泰維科技實(shí)業(yè)有限公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 模型制備 SD 大鼠全腦缺血再灌注模型采用Pulsineli 4 血管阻斷（4-VO）法[7]：用 10%水合氯醛溶液給大鼠腹腔麻醉（35 mg/100 g 體重），分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，在其下置線備用，電凝針熱凝第一頸椎橫突翼孔，2～4 s/次，以達(dá)到雙側(cè)翼小孔下的椎動(dòng)脈永久閉塞。 為防止大鼠互相撕咬，術(shù)后大鼠要分籠飼養(yǎng)，一鼠一籠。24 h 后，使大鼠保持非麻醉狀態(tài)，用無(wú)創(chuàng)微動(dòng)脈夾將大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉 15 min，然后釋放，使其再灌注。 術(shù)中保持大鼠肛溫在（37.0±0.5）℃。 假手術(shù)組分離并暴露頸總動(dòng)脈，但不夾閉，也不電凝椎動(dòng)脈。 全腦缺血模型成功：頸總夾閉 30～60 s 內(nèi)大鼠處于昏迷狀態(tài)，瞳孔變大，眼睛顏色變白，呼吸急促，動(dòng)脈夾松開(kāi)20～30 s，大鼠意識(shí)恢復(fù)，眼睛顏色恢復(fù)紅色，可活動(dòng)。

1.4.2 給藥 參芎化瘀膠囊溶于蒸餾水，48 g/L，參芎化瘀膠囊低、高劑量組按照 240、480 mg/（kg·d）灌胃給藥，假手術(shù)組和腦缺血再灌注組按 10 mL/kg 體重給予蒸餾水，在造模之前 7 d 開(kāi)始每天早上 8∶00 灌胃給藥 1 次，第 7 天給藥 1 h 后進(jìn)行水合氯醛麻醉，而后行全腦缺血再灌注，術(shù)后繼續(xù)給藥至各自時(shí)間點(diǎn)。

1.4.3 行為學(xué)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)大鼠于造模前 4 d 做橫木行走實(shí)驗(yàn)（beam walking test，BWT）[8]，每天 1 h，直至能熟練完成橫木行走為止， 造模成功后 1～3 d 重新評(píng)分，評(píng)定大鼠感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能水平。 橫木長(zhǎng) 1200 mm， 直徑25 mm，放置在距離地面 700 mm 的地方。 一端放置一個(gè)黑木盒子，另一端應(yīng)用聲光等刺激誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)大鼠通過(guò)橫木進(jìn)入木盒。評(píng)分等級(jí)分為 0～6 分，其中，不能站立，立即掉下的計(jì)為 0 分；不能前進(jìn)，但能夠站在橫木上的計(jì)為 1 分；在前進(jìn)中掉下的計(jì)為 2 分；能到達(dá)終點(diǎn)，但受累一側(cè)肢體在前進(jìn)中不起作用的計(jì)為 3 分；能到達(dá)終點(diǎn)，但有大于一半的路程中出現(xiàn)腳滑現(xiàn)象的計(jì)為 4 分；能到達(dá)終點(diǎn)，少量腳滑現(xiàn)象的計(jì)為 5 分；能到達(dá)終點(diǎn)，無(wú)腳滑現(xiàn)象的計(jì)為 6 分。

1.4.4 HE 染色 腦組織灌注后在 4%多聚甲醛溶液中固定 24 h，經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片（切片厚度5 μm，載玻片經(jīng)泡酸、涂 1∶4 多聚賴氨酸處理），切好的組織切片在 60℃烤箱烘烤 24 h 后，二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟，遞減的濃度梯度酒精脫水，蘇木精染色，1%鹽酸酒精分化，流水沖洗返藍(lán)，0.5%伊紅復(fù)染，80%、95%、100%酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。 200 倍光鏡隨機(jī)觀察腦組織海馬 CA1 區(qū)不重疊的 6 個(gè)視野， 并攝片，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4.5 免疫組化檢測(cè) 采用一步法聚合物檢測(cè)系統(tǒng)行免疫組化：腦組織灌注后在 4%多聚甲醛溶液中固定24 h，經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片（切片厚度 5 μm，載玻片經(jīng)泡酸、涂 1∶4 多聚賴氨酸處理），切好的組織切片在 60℃烤箱烘烤 24 h 后，二甲苯脫蠟，酒精脫水，水化組織切片，檸檬酸鹽緩沖液高壓修復(fù)，3%H2O2孵育以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，分別滴加 GAP-43 和Notch1 一抗（GAP-43 和 Notch1 濃度分別為 1∶300 和1∶150），4℃冰箱過(guò)夜，滴加二抗，37℃孵育 50～60 min，然后 DAB 顯色，隨時(shí)在顯微鏡下觀察著色情況，及時(shí)終止染色，蘇木精復(fù)染，最后脫水、透明封片。 400 倍光鏡下，計(jì)數(shù)每組標(biāo)本 4 個(gè)不重復(fù)視野中的陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)算平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用 SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。 各組間比較應(yīng)用單因素方差分析和 Pearson 相關(guān)分析，以 P ＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)行為學(xué)的影響

假手術(shù)組沒(méi)有出現(xiàn)感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能受損的現(xiàn)象。 與假手術(shù)組比較，腦缺血再灌注組前期時(shí)間點(diǎn)（1～3 d）感 覺(jué) 運(yùn) 動(dòng) 功 能 明 顯 受 損 ， 差 異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 （P ＜ 0.05）；與腦缺血再灌注組比較，參芎化瘀膠囊低劑量組在對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（1～3 d）感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05），且參芎化瘀膠囊高劑量組改善更明顯（P ＜ 0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 各組大鼠橫木行走實(shí)驗(yàn)評(píng)分比較

表1 各組大鼠橫木行走實(shí)驗(yàn)評(píng)分比較

注：與假手術(shù)組比較，*P ＜ 0.05；與腦缺血再灌注組比較，△P ＜ 0.05；與參芎化瘀膠囊低劑量組比較，▲P ＜ 0.05

組別 只數(shù)1d2d3d假手 術(shù)組腦缺 血再 灌注組參芎 化瘀 膠囊低 劑 量組參芎 化瘀 膠囊高 劑 量組25 25 25 25 6.00±0.00 1.20±0.45*2.20±0.45*△3.20±0.44*△▲6.00±0.00 2.20±0.45*3.20±0.45*△4.20±0.45*△▲6.00±0.00 2.40±0.55*3.80±0.84*△5.00±0.70*△▲

2.2 對(duì)大鼠海馬 CA1 神經(jīng)元影響

假手術(shù)組海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整，數(shù)量多，核圓、大，細(xì)胞排列緊密；腦缺血再灌注組1d 細(xì)胞水腫明顯，出現(xiàn)大量紅色神經(jīng)元，染色深，核固縮，細(xì)胞變形，正常神經(jīng)元數(shù)量減少；3 d 神經(jīng)元排列紊亂，部分細(xì)胞排列疏松，細(xì)胞核皺縮，深染，周圍出現(xiàn)空泡，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)不清，正常神經(jīng)元的數(shù)量也有減少；7 d 正常神經(jīng)元數(shù)量進(jìn)一步減少，細(xì)胞間的空泡區(qū)域增多明顯；14 d見(jiàn)許多細(xì)胞溶解后殘留的痕跡，細(xì)胞稀疏，排列紊亂。與假手術(shù)組比較，腦缺血再灌注組各時(shí)間點(diǎn)存活的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）；與腦缺血再灌注組比較，參芎化瘀膠囊低劑量組神經(jīng)元變性壞死情況減輕，結(jié)構(gòu)完整的神經(jīng)元較多（P ＜ 0.05），參芎化瘀膠囊高劑量組上述變化更明顯（P ＜ 0.05）。見(jiàn)表 2。

表2 各組大鼠海馬區(qū)存活的正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)比較

表2 各組大鼠海馬區(qū)存活的正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)比較

注：與假手術(shù)組比較，*P ＜ 0.05；與腦缺血再灌注組比較，△P ＜ 0.05；與參芎化瘀膠囊低劑量組比較，▲P ＜ 0.05

組別 只數(shù)1d 2d 3d 7d 14d假手術(shù)組腦缺血再 灌注組參芎化瘀 膠囊低 劑量 組參芎化瘀 膠囊高 劑量 組25 25 25 25 189.50±1.37 23.34±4.28*28.94±3.25*△3 4.44±2.97*△▲188.90±1.36 19.34±2.14*25.82±3.01*△32.28±4.11*△▲189.46±1.28 15 .64±1 .16*20.61±3.19*△29.62±3.39*△▲188.98±1.32 15.20±1.90*18.98±4.60*△39.00±5.39*△▲189.45±1.35 18.56±1.95*24.60±4.50*△46.80±2.17*△▲

2.3 對(duì)海馬 CA1 區(qū) Notch1、GAP-43 陽(yáng)性表達(dá)的影響2.3.1 Notch1 免疫組化 Notch1 主要表達(dá)在細(xì)胞胞漿中。 假手術(shù)組海馬神經(jīng)元的 Notch1 陽(yáng)性表達(dá)不明顯。 與假手術(shù)組比較，Notch1 在腦缺血再灌注組相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的陽(yáng)性表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；與腦缺血再灌注組比較，參芎化瘀膠囊低劑量組相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn) Notch1 的陽(yáng)性表達(dá)明顯增多， 且染色更深（P ＜ 0.05），參芎化瘀膠囊高劑量組上述變化更明顯（P ＜ 0.05）。 見(jiàn)表 3、圖 1（封四）。

表3 各組大鼠海馬區(qū) Notch1 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量比較

表3 各組大鼠海馬區(qū) Notch1 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量比較

注：與假手術(shù)組比較，*P ＜ 0.05；與腦缺血再灌注組比較，△P ＜ 0.05；與參芎化瘀膠囊低劑量組比較，▲P ＜ 0.05

組別 只數(shù)1d2d3d假手 術(shù)組腦缺 血再 灌注組參芎 化瘀 膠囊低 劑 量組參芎 化瘀 膠囊高 劑 量組25 25 25 25 2.48±1.34 6.3 6±1.38*8.80±1.37*△10.23±1.36*△▲2.47±1.30 7.90±1.55*9.84±1.50*△12.48±1.58*△▲2.50±1.35 1 0.6 9±1.52*12.60±1.53*△14.72±1.52*△▲

2.3.2 GAP-43 免疫組化 GAP-43 的陽(yáng)性染色為棕黃色，陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞胞漿和胞膜。 假手術(shù)組大鼠海馬神經(jīng)元 GAP-43 染色未見(jiàn)明顯陽(yáng)性表達(dá)；與假手術(shù)組 比 較， 腦 缺血 再灌 注 組 3、7、14 d 表 達(dá) 逐漸 增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）；與腦缺血再灌注組比較，參芎化瘀膠囊低劑量組相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性表達(dá)均升高，神經(jīng)元細(xì)胞胞漿淡黃色著色加深，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，各時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。 參芎化瘀膠囊高劑量組上述變化更明顯（P ＜ 0.05）。 見(jiàn)表 4、圖 2（封四）。

表4 各組大鼠海馬區(qū) GAP-43 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量比較

表4 各組大鼠海馬區(qū) GAP-43 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量比較

注：與假手術(shù)組比較，*P ＜ 0.05；與腦缺血再灌注組比較，△P ＜ 0.05；與參芎化瘀膠囊低劑量組比較，▲P ＜ 0.05

組別 只數(shù)3d 7d 14d假手術(shù)組腦缺血再灌注組參芎化瘀膠囊低劑量組參芎化瘀膠囊高劑量組25 25 25 25 0.25±0.42 10.49±5.42*13.45±4.80*△15.37±4.63*△▲0.24±0.40 11.12±5.94*14.36±4.91*△18.00±4.27*△▲0.27±0.38 16.24±8.22*18.59±4.84*△21.90±13.28*△▲

2.4 Notch1 和 GAP-43 表達(dá)的相關(guān)分析

相關(guān)分析顯示，腦缺血再灌注組 Notch1 和 GAP-43呈正相關(guān)（r = 0.838，P ＜ 0.01）；參芎化瘀膠囊低劑量組、高劑量組 Notch1 和 GAP-43 均呈正相關(guān)（r = 0.786，P ＜ 0.01；r = 0.816，P ＜ 0.01）。

3 討論

從本研究行為學(xué)及 HE 染色形態(tài)學(xué)的觀察中發(fā)現(xiàn)參芎化瘀膠囊低劑量組行為學(xué)評(píng)分以及大鼠海馬CA1 區(qū)正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)都明顯高于腦缺血再灌注組，并且這些指標(biāo)的變化在參芎化瘀膠囊高劑量組中有突出表現(xiàn)，說(shuō)明中藥參芎化瘀膠囊在缺血性腦損傷中是有神經(jīng)保護(hù)作用的，它可以減少再灌注后神經(jīng)元的死亡數(shù)，同時(shí)促進(jìn)感覺(jué)運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。 這與劉斌等[9]研究是一致的。

哺 乳 動(dòng) 物 體 內(nèi) Notch 家 族 有 Notch1 ～4 四 種 受體。 Notch1 蛋白持續(xù)存在于成年動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)中[10]。研究表明[11]，Notch 信號(hào)通路可促進(jìn)腦缺血損傷后的血管新生和神經(jīng)修復(fù)，抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 陳麗等[12]對(duì)大鼠進(jìn)行缺血預(yù)處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺血預(yù)處理可升高Notch1 及其相關(guān)蛋白的表達(dá)，同時(shí)梗死體積百分比減少，神經(jīng)功能損傷評(píng)分降低，提示缺血預(yù)處理可能通過(guò) Notch 通路對(duì)損傷神經(jīng)有修復(fù)作用。 Felling 等[13]研究認(rèn)為圍生期缺血缺氧可造成新生兒神經(jīng)系統(tǒng)損傷，在損傷組織內(nèi) Notch1 蛋白表達(dá)水平明顯升高，此時(shí)神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）大量增加，表明 Notch1 蛋白的表達(dá)促進(jìn)了 NSCs 的增殖。 從而推測(cè) Notch1 可能為神經(jīng)系統(tǒng)損傷后促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)的主要靶蛋白。 Notch 信號(hào)通路促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)的機(jī)制涉及調(diào)控 mTOR、PI3K/Akt、ROCK2 等 29 個(gè)不同的基因功能[14]。 Notch 信號(hào)可以激活放射狀神經(jīng)膠質(zhì)和體外的多能神經(jīng)干細(xì)胞，它是星形神經(jīng)膠質(zhì)發(fā)育所必需的。 由此認(rèn)為 Notch 信號(hào)在神經(jīng)修復(fù)與再生過(guò)程中有著重要地位[15]。 生長(zhǎng)相關(guān)蛋白 43（GAP-43）在神經(jīng)組織細(xì)胞中廣泛表達(dá)，可促進(jìn)神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育、軸突再生及突觸重建，直接參與神經(jīng)的損傷后修復(fù)[16-17]。 GAP-43 被列為研究神經(jīng)可塑性的首選探針[18]，是神經(jīng)修復(fù)的重要標(biāo)志蛋白。 本研究截取 GAP-43 這一神經(jīng)修復(fù)標(biāo)志性蛋白，認(rèn)為通過(guò) Notch1 調(diào)控 GAP-43，對(duì)損傷神經(jīng)進(jìn)行修復(fù)作用。本研究結(jié)果顯示，參芎化瘀膠囊低劑量組中 Notch1、GAP-43 的陽(yáng) 性 表達(dá)數(shù)量 比 腦 缺血再 灌 注 組 有所 增加，并且在參芎化瘀膠囊高劑量組中陽(yáng)性表達(dá)數(shù)增加的幅度更加明顯。 同時(shí)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示 GAP-43 表達(dá)與 Notch1 呈正相關(guān)（r = 0.816，P ＜ 0.01）。神經(jīng)修復(fù)進(jìn)程在神經(jīng)元受到損傷各期均有，本研究分別選取缺血早期和后期對(duì)兩種蛋白進(jìn)行檢測(cè)。 各組中 Notch1 在缺血早期（1～3 d）變化，GAP-43 隨之有相應(yīng)的變化趨勢(shì)，且參芎化瘀膠囊以高低不同劑量調(diào)節(jié)著兩個(gè)因子的變化。 結(jié)合兩種劑量的參芎化瘀膠囊對(duì)缺血大鼠神經(jīng)元的調(diào)節(jié)及其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者推測(cè)參芎化瘀膠囊很可能是通過(guò) Notch1 通 路 對(duì) GAP-43 起 作 用 ， 進(jìn) 而對(duì)損傷神經(jīng)元進(jìn)行修復(fù)。

綜上所述，參芎化瘀膠囊有益氣養(yǎng)血、通絡(luò)化瘀的療效，本實(shí)驗(yàn)從激活 Notch1 信號(hào)通路、活化 GAP-43蛋白參與神經(jīng)再生和功能修復(fù)的角度闡明參芎化瘀膠囊對(duì)腦缺血的作用，但二者之間具體聯(lián)系機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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Influence on the expression of Notch1/GAP -43 after global cerebral ischemia-reperfusion in hippocampus by Shenxiong Huayu Capsules

ZHOU Na1ZHAO Y aning1LI Jianmin2
1.Institute of Nursing and Rehabilitation,North China University of Science and Technology,Hebei Province,Tangshan 063000, China; 2.Department of Neurosurgery, the Affiliated Hospital of North China University of Science and Technology,Hebei Province,Tangshan 063000,China

ObjectiveTo investigate the effect of Shenxiong Huayu Capsules on the expression of Notch1/GAP-43 after global cerebral ischemia reperfusion in hippocampus.MethodsOne hundred healthy male SD rats were randomly divided into 4 groups:sham operation group (n = 25),cerebral ischemia reperfusion group (n = 25) and Shenxiong Huayu Capsules low-dose group (n = 25) and high-dose group (n = 25). The gavage dose of Shenxiong Huayu Capsules lowdose group and high-dose group was 240, 480 mg/(kg·d), the sham operation group and cerebral ischemia reperfusion group were given distilled water according to 10 mL/kg weight, once every 8∶00 am, for 7 days. The model of global cerebral ischemia reperfusion was made by improved four-vessel occlusion according to Pulsinelli 4 vascular occlusion (4-VO) method, and the rats were sacrificed at 1, 2, 3, 7 d and 14 d respectively after injury to take the hippocampus tissues. HE staining was used to detect morphological changes in hippocampus each point in time; and the expressions of Notch1 (1, 2, 3 d) and GAP-43 (3, 7, 14 d) were measured by immunohistochemistry. The sensorimotor functions of the rats were detected by beam walking teston 1-3 days after injury.ResultsCompared with sham operation group,the neuron counts ofrats in cerebral ischemia reperfusion group was significantly decreased (P ＜ 0.05).The expressions of Notch1 (1-3 days after injury) and GAP-43 (3,7, 14 d after injury) in cerebral ischemia reperfusion group were enhanced obviously at the corresponding time (P ＜ 0.05),and the scores of beam walking test were decreased obviously in cerebral ischemia reperfusion group (P ＜ 0.05).Compared with cerebral ischemia reperfusion group,the neuron counts were decreased obviously in Shenxiong Huayu Capsule low-dose group (P ＜ 0.05),the expressions ofNotch1 and GAP-43 were further increased in Shenxiong Huayu Capsules low-dose group (P ＜ 0.05), and the scores of beam walking test improved significantly in Shenxiong Huayu Capsules low-dose group (P ＜ 0.05).The above indexes mentioned changes were more noteworthy in Shenxiong Huayu Capsules high-dose group (P ＜ 0.05). The expressions between Notch1 and GAP-43 had a positive correlation with each other in cerebral ischemia reperfusion group and Shenxiong Huayu Capsules low-dose group (r = 0.838, P ＜ 0.01; r = 0.786, P ＜ 0.01).ConclusionThe neuroprotective effect of Shenxiong Huayu Capsules on cerebral ischemia reperfusion injury rats may be related to Notch1/GAP-43 pathway.

Global cerebral ischemia;Shenxiong Huayu Capsules;Notch1;GAP-43

R743.3

A

1673-7210（2015）08（b）-0008-05

2015-03-27 本文編輯：張瑜杰）

河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（H2012401007）。

趙雅 寧 （1974-），女 ，副教 授 ，醫(yī)學(xué)博士 ；研究方向：腦保護(hù)。