竹林土壤中纖維素降解菌的篩選及產(chǎn)酶條件優(yōu)化

蔣玉儉，李新鑫，孫飛飛，余學(xué)軍

（浙江農(nóng)林大學(xué) 亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，浙江 臨安 311300）

竹林土壤中纖維素降解菌的篩選及產(chǎn)酶條件優(yōu)化

蔣玉儉，李新鑫，孫飛飛，余學(xué)軍

（浙江農(nóng)林大學(xué) 亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，浙江 臨安 311300）

為了尋找較為高效的纖維素降解菌，以便更好利用纖維素資源，結(jié)合分析被剛果紅染色后形成的透明圈大小以及羧甲基纖維素酶活力強(qiáng)弱，從浙江省臨安市竹林土壤中分離篩選出1株高效纖維素降解菌J6-1。經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察初步鑒定該菌株屬于青霉屬Penicillium。對(duì)該菌株的液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶條件和產(chǎn)酶穩(wěn)定性進(jìn)行研究。結(jié)果表明：最佳產(chǎn)酶條件是以15.0 g·L-1稻草粉作碳源、以3.0 g·L-1酵母膏為氮源，10%接種量，pH 5.0，40℃發(fā)酵培養(yǎng)5 d。經(jīng)優(yōu)化后菌株J6-1最高羧甲基纖維素鈉酶活和濾紙酶活分別達(dá)到了41.82×16.67 μkat·L-1和17.26×16.67 μkat·L-1，并且經(jīng)5次傳代培養(yǎng)，酶活力仍得到保持。青霉J6-1可用作進(jìn)一步實(shí)際應(yīng)用研究的試驗(yàn)菌株。圖3表3參34

森林微生物學(xué)；纖維素降解菌；篩選；產(chǎn)酶條件；優(yōu)化

纖維素是自然界中分布最廣、儲(chǔ)量最豐富的可再生有機(jī)資源［1］，占植物干質(zhì)量的35%～50%［2］，在碳循環(huán)中有著重要作用［3］，其全球累積量為1012t·a-1以上［4-5］。然而，纖維素具有不溶于水和難以降解的特性，使得如此龐大的纖維素類資源并未被充分利用。目前，中國(guó)的纖維素類資源主要用于燃燒，能量利用率非常低（10%左右）［6］。另外，一些未及時(shí)處理的纖維類資源則變成固體垃圾，造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。所以，如果使用適當(dāng)處理方法將這些可再生的纖維素降解為便于利用的糖液，再進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為具有商業(yè)價(jià)值的產(chǎn)品，如乙醇［7］、單體蛋白［8-9］以及有機(jī)酸［10］等，這對(duì)解決人類所面臨的能源危機(jī)、食物短缺和環(huán)境污染等問(wèn)題具有重大意義［11-12］。過(guò)去處理纖維素主要采用酸［13］、堿［14］以及蒸汽加熱［15］等方法，但這些方法存在一些缺點(diǎn)，例如條件要求高、產(chǎn)物回收率不高和廢棄物存在二次污染等。目前，較有效且接近自然的纖維素處理方法就是利用微生物產(chǎn)生的纖維素酶來(lái)降解纖維素，其具有反應(yīng)條件溫和、產(chǎn)物產(chǎn)率高和無(wú)二次污染等優(yōu)點(diǎn)。纖維素酶是一種能降解纖維素生成葡萄糖的復(fù)合酶，其完整酶系主要包括內(nèi)切葡聚糖酶（EC 3.2.1.4），外切葡聚糖酶（EC 3.2.1.91），β-葡萄糖苷酶等3類酶［16］，其中，內(nèi)切葡聚糖酶用于降解纖維素分子內(nèi)部β-1,4-糖苷鍵，形成大量小分子纖維；外切葡聚糖酶用于降解纖維素分子末端β-1,4-糖苷鍵，生成纖維二糖；β-葡萄糖苷酶用于降解纖維二糖生成葡萄糖。催化纖維素水解需要一個(gè)完整的纖維素酶系相互協(xié)同作用。因此，分離和篩選出具有較完整纖維素酶系的菌株非常重要。以往許多研究篩選的纖維素降解菌來(lái)自樹(shù)林土壤和動(dòng)物腸道等，如劉清鋒等［17］從稻田腐爛秸稈中分離篩選出降解纖維素能力較強(qiáng)的青霉Penicillium T24-2；Sheng等［18］從暗黑鰓金龜Holotrichia parallela的腸道中篩選出1株高纖維素酶活力的假單胞菌Pseudomonas HP207，對(duì)從竹林土壤分離纖維素降解菌的研究較少。實(shí)際上，竹林土壤富含纖維素，生活著大量不同種類的纖維素降解菌，是高效纖維素降解菌的理想來(lái)源地。因此，本實(shí)驗(yàn)從浙江省臨安市竹林中采集土樣，利用羧甲基纖維素選擇培養(yǎng)基分離篩選出1株纖維素降解能力較強(qiáng)的菌株J6-1，并對(duì)其進(jìn)行了菌種的初步鑒定及產(chǎn)纖維素酶條件優(yōu)化。

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基

富集培養(yǎng)基（液體）：羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）15.0 g，磷酸二氫鉀（KH2PO4）1.0 g，氯化鈉（NaCl）0.1 g，硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.3 g，硝酸鈉（NaNO3）2.5 g，氯化鐵（FeCl3）0.01 g，氯化鈣（CaCl2）0.1 g；定容至1.0 L，自然pH值。

選擇培養(yǎng)基（固體）：羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）15.0 g，磷酸二氫鉀（KH2PO4）1.0 g，氯化鈉（NaCl）0.1 g，硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.3 g，硝酸鈉（NaNO3）2.5 g，氯化鐵（FeCl3）0.01 g，氯化鈣（CaCl2）0.1 g，瓊脂15 g；定容至1.0 L，自然pH值。

種子培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200.0 g，蔗糖20.0 g，瓊脂15.0 g，水1 000.0 mL，自然pH值）。

液體發(fā)酵培養(yǎng)基：羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）15.0 g，磷酸二氫鉀（KH2PO4）1.0 g，氯化鈉（NaCl）0.1 g，硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.3 g，硝酸鈉（NaNO3）2.5 g，氯化鐵（FeCl3）0.01 g，氯化鈣（CaCl2）0.1 g；定容至1.0 L，自然pH值。

1.2 菌株的分離篩選

1.2.1 樣品采集 實(shí)驗(yàn)樣品（不同程度腐爛的礱糠、稻草、竹葉以及土壤）來(lái)自杭州市余杭區(qū)和臨安市各村的竹林（雷竹Phyllostachys violascens林和毛竹Phyllostachys edulis林）。采用5點(diǎn)取樣法［19］取0～5 cm土壤混合樣品200.0 g，將采集的樣品裝到無(wú)菌袋中并編號(hào)，放入冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室4℃保存。共采集到20個(gè)樣品。

1.2.2 富集培養(yǎng) 稱取10.0 g樣品加到90.0 mL富集培養(yǎng)基中，30℃，120 r·min-1培養(yǎng)3 d后取培養(yǎng)液以體積為5%的接種量接入新的富集培養(yǎng)基中，再反復(fù)富集2次［20］。

1.2.3 菌株的篩選分離 取1.0 mL富集菌液依次稀釋成比例梯度為10-1，10-2，10-3，10-4，10-5和10-6，再分別從中取0.1 mL涂布到羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基（CMC-Na平板）上，30℃恒溫箱培養(yǎng)3 d后，挑取單菌落分別點(diǎn)種3個(gè)CMC-Na平板上（即3次重復(fù)）于30℃恒溫箱培養(yǎng)6 d，用1.0 g·L-1剛果紅溶液對(duì)平板染色30 min，再用1.0 mol·L-1氯化鈉溶液浸洗2次（每次30 min），然后采用十字交叉法測(cè)量CMC-Na平板上透明圈直徑（D，mm）和菌落直徑（d，mm），選取Hc值（Hc=D/d，即透明圈直徑與菌落直徑的比值）較大且快速生長(zhǎng)的菌落進(jìn)行劃線分離純化并保存［18-21］。

1.3 粗酶液的制備

將篩選到的菌株分別接種到種子培養(yǎng)基中，30℃，150 r·min-1培養(yǎng)3 d，再以10%的接種量接入裝有50.0 mL發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基的250.0 mL三角瓶中，30℃，150 r·min-1下培養(yǎng)，5 d后，取5.0 mL發(fā)酵液，于4℃，5 000 r·min-1離心10 min，所得的上清即為粗酶液［22］。

1.4 酶活力測(cè)定方法

1.4.1 羧甲基纖維素酶活力（CMCase）的測(cè)定 取粗酶液0.1 mL加入1.9 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%羧甲基纖維素鈉的檸檬酸緩沖液（pH 4.8，0.05 mol·L-1），以沸水浴滅活的粗酶液反應(yīng)作為對(duì)照，50℃恒溫水浴30 min后，加入2.0 mL DNS顯色液，沸水浴顯色10 min后，冷水浴快速冷卻停止反應(yīng)，然后定容至25 mL，于540 nm波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度D（λ）值。上述條件下，定義1 h 1.0 mL酶液催化底物水解生成1.0 μmol葡萄糖所需的酶量為1個(gè)酶活單位（U）［23］（1 U=16.67 nkat）。

1.4.2 濾紙酶活力 （FPAase）的測(cè)定 取粗酶液0.1 mL加入50.0 mg（1.0 cm×6.0 cm）折疊成M型的Whatman濾紙條，再加入1.9 mL檸檬酸緩沖液（pH 4.8，0.05 mol·L-1），以沸水浴滅活的粗酶液反應(yīng)作為對(duì)照，按DNS法測(cè)定還原糖。

1.5 菌株的初步鑒定

觀察菌落和菌體形態(tài)特征，參照《真菌鑒定手冊(cè)》［24］和《中國(guó)真菌志》［25］對(duì)菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.6 產(chǎn)酶條件優(yōu)化

以液體發(fā)酵培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)配方，選擇不同氮源（酵母膏、尿素、硝酸鈉、硝酸銨、蛋白胨），碳源（羧甲基纖維素鈉、竹粉、濾紙、稻草粉、蔗糖、葡萄糖），接種量（1%，5%，10%，15%，20%），初始pH值（3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0），培養(yǎng)溫度（20，25，30，35，40，45，50℃），培養(yǎng)時(shí)間（1，2，3，4，5，6，7 d）進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，進(jìn)而通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定目標(biāo)菌株的最佳產(chǎn)酶條件。

2 結(jié)果與分析

2.1 纖維素降解菌的篩選

從竹林腐殖土壤中初步篩選獲得26株經(jīng)剛果紅染色后能夠產(chǎn)生透明水解圈的菌株，再測(cè)定羧甲基纖維素酶活力進(jìn)行復(fù)篩，5株較好菌株結(jié)果見(jiàn)表1，其中菌株C2-2擁有較大Hc值為2.96，其5 d發(fā)酵培養(yǎng)后的羧甲基纖維素酶活力僅4.43×16.67 μkat·L-1明顯低于菌株J6-1的6.87×16.67 μkat·L-1，故確定最佳纖維素降解菌株為J6-1。

表1 5株菌的Hc值及羧甲基纖維素酶活力大小Table1 Hcvalues and cellulase activity of 5 strains

2.2 菌株J6-1的生物學(xué)特征

圖1 菌株J6-1的形態(tài)學(xué)特征Figure 1 Morphological characteristic of strain J6-1

菌體形態(tài)特征見(jiàn)圖1，菌株J6-1在羧甲基纖維素固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，菌落呈絮狀，中心臍狀突起邊緣整齊，初期為淺綠色，后期呈灰綠色，在40倍顯微鏡下觀察到該菌株的分生孢子近球形，分生孢子梗從菌絲垂直長(zhǎng)出，排列成掃帚狀的間枝著生于其頂端?？沙醪脚袛嘣摼隇榍嗝箤貾enicillium。

2.3 菌株J6-1發(fā)酵條件優(yōu)化

2.3.1 氮源對(duì)菌株產(chǎn)酶活力的影響 分別以酵母膏、尿素、硝酸鈉、硝酸銨、蛋白胨為氮源進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖2A所示：氮源對(duì)菌株的產(chǎn)酶能力的影響較大，使用有機(jī)氮時(shí)的酶活明顯高于使用無(wú)機(jī)氮。這表明菌株J6-1能較好利用有機(jī)氮。當(dāng)用酵母膏作氮源時(shí)，菌株J6-1纖維素酶活力最高，羧甲基纖維素酶活力達(dá)到16.62×16.67 μkat·L-1，濾紙酶活達(dá)到3.76×16.67 μkat·L-1。因此選用酵母膏作為最佳氮源。

2.3.2 碳源對(duì)菌株產(chǎn)酶活力的影響 分別以羧甲基纖維素鈉、竹粉、濾紙、稻草粉、蔗糖、葡萄糖為碳源進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖2B所示：不同碳源條件下酶活力存在較大差異，當(dāng)以稻草粉作唯一碳源時(shí)，菌株J6-1的羧甲基纖維素酶活與濾紙酶活均達(dá)到最大值，分別為20.73×16.67 μkat·L-1和8.20×16.67 μkat·L-1。當(dāng)以濾紙作為碳源時(shí)，酶活力最低。稻草主要含有纖維素、半纖維素、果膠、木質(zhì)素粗蛋白等物質(zhì)，對(duì)菌株產(chǎn)酶有較好誘導(dǎo)作用［26］。故最佳碳源為稻草粉。

2.3.3 不同接種量對(duì)菌株產(chǎn)酶活力的影響 在最優(yōu)碳源、氮源條件下，分別接種1%，5%，10%，15%和20%種子液進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖2C所示：接種量不同對(duì)酶活力有較大影響。當(dāng)接種量為10%時(shí)，羧甲基纖維素酶活力最高；當(dāng)接種量增加到20%時(shí)，酶活力明顯下降；這表明接種量過(guò)大，菌體大量生長(zhǎng)，占用更多空間和資源，導(dǎo)致菌株產(chǎn)酶減少，最終選定最適接種量為10%。

圖2 氮源（A），碳源（B），接種量（C）對(duì)菌株J6-1產(chǎn)酶活力的影響Figure 2 Effect of different nitrogen sources,carbon sources and inoculation quantity on cellulase activity of strain J6-1

2.3.4 不同pH值對(duì)菌株酶活力的影響 在最優(yōu)碳源、氮源條件下，調(diào)整初始pH值分別為pH 3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0和9.0接種10%種子液進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖3A所示：培養(yǎng)基pH值對(duì)菌株J6-1酶活力影響較大，濾紙酶活變化趨勢(shì)與羧甲基纖維素酶活變化趨勢(shì)保持一致；隨著pH值升高，菌株J6-1酶活力呈現(xiàn)先增大后減小趨勢(shì)。當(dāng)pH值從pH 3.0升高到pH 5.0時(shí)，羧甲基纖維素酶活力由8.85×16.67 μkat·L-1快速增加到最大酶活25.39×16.67 μkat·L-1，濾紙酶活從3.15×16.67 μkat·L-1增加到10.41×16.67 μkat·L-1；之后再升高pH值，羧甲基纖維素酶活和濾紙酶活力均降低。在pH 5.0時(shí)，羧甲基纖維素酶活和濾紙酶活均表現(xiàn)出最佳酶活力，說(shuō)明菌株最佳發(fā)酵培養(yǎng)的酸堿度為pH 5.0。

2.3.5 不同溫度對(duì)菌株產(chǎn)酶活力的影響 在最優(yōu)碳源、氮源、pH 5.0條件下，調(diào)整培養(yǎng)溫度分別為20，25，30，35，40，45和50℃接種10%種子液進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖3B所示：隨著溫度升高，菌株酶活力先增大后急劇下降，說(shuō)明培養(yǎng)溫度對(duì)菌株J6-1發(fā)酵產(chǎn)酶影響較大，較低或較高溫度均不利于產(chǎn)酶，在40℃的培養(yǎng)溫度下，羧甲基纖維素酶活最大為34.57×16.67 μkat·L-1；然而，當(dāng)溫度為35℃時(shí)，濾紙酶活達(dá)到最高為14.36×16.67 μkat·L-1，因此，菌株J6-1最佳培養(yǎng)溫度范圍為35～40℃。

2.3.6 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株產(chǎn)酶活力的影響 在最優(yōu)碳源、氮源、pH 5.0，40℃條件下，接種10%種子液進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，分別取1～7 d發(fā)酵液進(jìn)行酶活力測(cè)定。結(jié)果如圖3C所示：濾紙酶活變化趨勢(shì)與羧甲基纖維素酶活變化趨勢(shì)保持一致；菌株J6-1經(jīng)過(guò)2 d發(fā)酵培養(yǎng)后，酶活迅速提高；當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)5 d時(shí)，菌株J6-1的羧甲基纖維素酶活和濾紙酶活均達(dá)到最大值，分別為36.57×16.67 μkat·L-1和15.42×16.67 μkat·L-1；繼續(xù)加長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，可能由于菌株生物量達(dá)到飽和營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)不足，菌株J6-1產(chǎn)酶酶活逐漸減弱。因此，最佳取樣時(shí)間為5 d。

圖3 初始pH（A）,培養(yǎng)溫度（B）和培養(yǎng)時(shí)間（C）對(duì)菌株J6-1產(chǎn)酶活力的影響Figure 3 Effect of initial pH,temperature and time on cellulase activity of strain J6-1

2.3.7 正交優(yōu)化菌株J6-1產(chǎn)酶條件 根據(jù)以上單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用正交法去確定菌株J6-1最佳培養(yǎng)條件。選擇稻草粉量、酵母膏量、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間4個(gè)因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平進(jìn)行L9（34）正交實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)條件為10%接種量、初始pH 5.0，150 r·min-1液體搖瓶發(fā)酵。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示：各因素對(duì)菌株J6-1產(chǎn)酶影響大小依次是稻草粉量、酵母膏量、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度，在6號(hào)實(shí)驗(yàn)條件下，其羧甲基纖維素酶活力和濾紙酶活力分別為40.59×16.67 μkat·L-1和16.43×16.67 μkat·L-1。正交實(shí)驗(yàn)表明最佳培養(yǎng)條件為A2B3C2D2，即15.0 g·L-1稻草粉、3.0 g·L-1酵母膏、40℃培養(yǎng)5 d。

表2 L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及分析Table2 Design and results analysis of L9（34）orthogonal test

2.4 菌株J6-1酶活穩(wěn)定性研究

將已篩選到的菌株J6-1進(jìn)行連續(xù)5代傳代培養(yǎng)，然后最佳條件發(fā)酵培養(yǎng)測(cè)定其每代菌株羧甲基纖維素酶活力和濾紙酶活力。結(jié)果如表3所示：各子代菌株均能較好延續(xù)原代菌株酶活力，羧甲基纖維素酶活力和濾紙酶活力分別維持在41.82×16.67 μkat·L-1和17.26×16.67 μkat·L-1左右。

表3 菌株J6-1傳代酶活力Table3 Cellulase activity of Strain J6-1 passage

3 討論與結(jié)論

本研究采用透明圈初篩、酶活測(cè)定復(fù)篩的方法，從竹林土壤中分離出1株高效纖維素降解真菌，通過(guò)生物學(xué)觀察初步鑒定該菌株為青霉菌屬Penicillium。然后測(cè)定了該菌株的羧甲基纖維素酶活和濾紙酶活，并進(jìn)一步對(duì)該菌株的發(fā)酵產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化；結(jié)果表明：在添加15 g·L-1稻草粉、3 g·L-1酵母膏作碳源和氮源，10%接種量，pH 5.0，40℃，150 r·min-1發(fā)酵培養(yǎng)5 d條件下，該菌株獲得最佳羧甲基纖維素酶活和濾紙酶活，分別為41.82×16.67 μkat·L-1和17.26×16.67 μkat·L-1。

目前，已經(jīng)篩選出不同種類降解纖維素的細(xì)菌［27］、放線菌［28］和真菌［29］。這些篩選到的降解纖維素材料的活性微生物普遍被應(yīng)用于生物質(zhì)能源發(fā)酵工藝（替代能源的生產(chǎn)）［30］、飼料生產(chǎn)［31］和秸稈還田土壤培肥［32］等方面。本研究篩選到的菌株來(lái)自竹林土壤，不僅可應(yīng)用于以上研究，在竹林土壤生長(zhǎng)環(huán)境也具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)［33］，更適合用于制作促竹林有機(jī)物降解菌制劑，不會(huì)引入外來(lái)菌株而造成二次污染。

在纖維素酶活的研究中，濾紙酶活通常被用來(lái)表征3種酶組分協(xié)同作用后的總酶活［34］。本實(shí)驗(yàn)篩選到的青霉菌J6-1經(jīng)優(yōu)化后其濾紙酶活力可到達(dá)17.26×16.67 μkat·L-1，高于可曉等［22］從雷竹林土壤中篩選到的青霉菌2.1（濾紙酶活為11.19×16.67 μkat·L-1），對(duì)纖維素降解效果更好。其次，該菌株最佳產(chǎn)酶pH 5.0，溫度為40℃，表現(xiàn)出一定的耐酸能力，能適應(yīng)自然界高溫環(huán)境，這對(duì)于其實(shí)際應(yīng)用具有重大意義。

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Screening of a cellulose-decomposing strain from bamboo stand soils and optimization of its cellulase production

JIANG Yujian,LI Xinxin,SUN Feifei,YU Xuejun
（The Nurturing Station for the State Key Laboratory of Subtropical Silviculture,Zhejiang A&F University,Lin’an 311300,Zhejiang,China）

Cellulose,the most extensive and abundant renewable resource in nature with an annual worldwide accumulation of photosynthetic plant cellulose materials of 1012t of which an estimate of 89%has been used unreasonably （such as in direct burning）,should be produced by more effective cellulolytic microorganisms to transform these renewable resources into available energy.At present,although important research about screening cellulolytic microorganisms has been conducted,few studies on isolating and screening cellulose-decomposing microorganisms from bamboo stand soils have been described.This research isolated and screened efficient cellulolytic microorganisms from bamboo stand soils based on the size of transparent circles and the activity of carboxymethyl-cellulase （CMCase）.An efficient cellulose-decomposing fungus,J6-1,was obtained and preliminary morphological observation identified it as Penicillium（Strain J6-1）.On the basis of single-factor experiments,the orthogonal experiment of 4 factors at 3 levels was then taken to optimize the liquid fermentation conditions conditions of cellulase production.And the hereditary stability of cellulase produced Strain J6-1 was evaluated by the cellulase activity analysis of 5 consecutive generations.Experimental results showed that the optimum conditions for cellulase production were as follows:15.0 g·L-1straw powder as carbon, 3.0 g·L-1yeast extract as a nitrogen source,a 10%inoculation quantity,fermentation at 40℃,and an initial pH of 5.0 for 5 d.After optimization of strain J6-1,the highest activity of carboxymethyl-cellulase（CMCase）was 41.82×16.67 μkat·L-1and filter paper enzyme activity（FPAase）was 17.26×16.67 μkat·L-1.Thus,these characteristics of high cellulose activity could be subcultured serially,and strain J6-1 could be used for furtherpractical application.［Ch,3 fig.3 tab.34 ref.］

forest microbiology;cellulose-decomposing microorganisms;screen;enzyme production;optimization

S718.8

A

2095-0756（2015）07-0821-08

浙 江 農(nóng) 林 大 學(xué) 學(xué) 報(bào)，2015，32（6）：821-828

Journal of Zhejiang A＆F University

10.11833/j.issn.2095-0756.2015.06.001

2015-01-08；

2015-03-09

浙江省科學(xué)技術(shù)重點(diǎn)項(xiàng)目（2012T201-05）

蔣玉儉，從事竹林培育與利用研究。E-mail：jiangyujian.2009@163.com。通信作者：余學(xué)軍，副研究員，從事竹子栽培與利用研究。E-mail：yuxj@zafu.edu.cn