正交試驗(yàn)優(yōu)化酒黃芩炮制工藝研究

周 霜，朱 靜

(1.重慶市江北區(qū)中醫(yī)院藥劑科 400020；2.重慶市北碚區(qū)中醫(yī)院藥劑科 400700)

論著·臨床研究

正交試驗(yàn)優(yōu)化酒黃芩炮制工藝研究

周 霜1，朱 靜2△

(1.重慶市江北區(qū)中醫(yī)院藥劑科 400020；2.重慶市北碚區(qū)中醫(yī)院藥劑科 400700)

目的 優(yōu)選酒黃芩炮制的最佳工藝。方法以黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素獲得率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)考察黃酒質(zhì)量分?jǐn)?shù)、炒制溫度、炒制時(shí)間對(duì)炮制工藝的影響。結(jié)果優(yōu)選黃酒質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%、炒制溫度為140 ℃、炒制時(shí)間為6 min，該工藝穩(wěn)定可行。結(jié)論正交設(shè)計(jì)法可用于酒黃芩炮制工藝的優(yōu)化。

黃芩；正交試驗(yàn)；炮制

黃芩功能清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎，是中醫(yī)臨床常用藥材之一，以黃酮類成分如黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、野黃芩苷等為主[1-3]。由于其味苦性寒，臨床應(yīng)用前多需炮制，如炒制、酒炒、炒炭等。酒性偏熱，酒炒后緩和了黃芩的苦寒之性，同時(shí)可以引藥上行，增強(qiáng)其清肺熱之功效[4]。目前對(duì)酒黃芩炮制工藝的研究較多，但多以黃芩苷為觀察指標(biāo)[5-7]，具有一定的局限性。因此本研究擬以炮制后含量較高的主要黃酮類成分黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素為觀察指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)綜合評(píng)分法對(duì)酒黃芩的炮制工藝進(jìn)行優(yōu)化。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 普通電炒鍋，OS423-LS型非接觸式紅外測(cè)溫儀(美國Omega公司)；HC-TPLL-10型架盤藥物天平(上海精科天平儀器廠)；2695/2996型高效液相色譜儀(美國Waters公司)。黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所)；黃芩飲片(購自安徽亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)本科周霜藥師鑒定為唇形科黃芩的干燥根所切的薄片)；黃酒(浙江紹興市古泉釀酒廠，乙醇含量9%)；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇∶水∶磷酸=47∶53∶0.2；流速：0.8 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長：279 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。

1.2.2 專屬性考察 精密稱定黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素對(duì)照品適量，用甲醇溶解，作為對(duì)照品溶液；精密稱取炮制藥材粉末約0.5 g，加入50 mL的60%乙醇(V/V)，置100 mL帶塞錐形瓶中超聲30 min，超聲結(jié)束后，加60%乙醇補(bǔ)足超聲可能損失的質(zhì)量。精密量取上清液0.5 mL，加甲醇定容至5 mL，0.45 μm有機(jī)微孔濾膜過濾即得供試品溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣，所得色譜圖如圖1所示。各峰峰形及分離度良好。

A：對(duì)照品；B：樣品(1黃芩苷，2漢黃芩苷，3黃芩素)。

圖1 HPLC色譜圖

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取定量混合對(duì)照品溶液，流動(dòng)相稀釋，制成6種不同濃度的對(duì)照品溶液，每種濃度進(jìn)樣2次，取各成分峰面積的平均值，記錄峰面積A。以峰面積A對(duì)藥物濃度C間進(jìn)行線性回歸，所得黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=3 142 C+66 192(r=0.999 7)(n=6)，線性范圍為41～820 μg/mL；漢黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=5 809 C-15 220(r=0.999 4)(n=6)，線性范圍為13～260 μg/mL；黃芩素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=4 410C+11 202(r=0.999 5)(n=6)，線性范圍為2.2～44 μg/mL。

1.2.4 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取炮制后，已知黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素含量的酒黃芩粉末樣品適量約0.25 g，加入50 mL的60%乙醇(V/V)，置100 mL帶塞錐形瓶中超聲30 min，超聲結(jié)束后，加60%乙醇補(bǔ)足超聲可能損失的質(zhì)量。按已知各樣品成分，分別精密稱取已知含量的80%、100%、120%的黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素對(duì)照品，加入已知含量的各樣品中，制備成回收率考察用低、中、高3個(gè)濃度樣品溶液各3份。分別測(cè)定含量，測(cè)得的含量減去已知含量，即為對(duì)照品加入量回收率測(cè)得的含量，所測(cè)得含量與精密加入的對(duì)照品的比值即為加入量的回收率，計(jì)算所得黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素平均回收率分別為100.5%、99.6%和99.8%，RSD分別為1.75%、1.63%和2.08%(n=9)。

1.2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取“1.2.3”中混合對(duì)照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素RSD分別為0.79%、0.88%和0.52%(n=6)。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取“1.2.3”中混合對(duì)照品溶液，分別于0、1、2、4、8、12 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積計(jì)算黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素RSD分別為1.27%、2.80%和1.84%(n=6)，表明本品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取酒黃芩粉末，精密稱取細(xì)粉適量，按“1.2.2”制備供試品溶液后進(jìn)樣，測(cè)得黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為(14.56±0.30)%、(3.71±0.05)%、(1.02±0.03)%，以含量計(jì)算RSD分別為2.06%、1.35%和2.94%(n=6)。

1.2.8 酒黃芩炒制過程 取黃芩飲片適量，加入黃酒拌勻，待黃酒吸盡后，迅速放入升溫的炒鍋內(nèi)(測(cè)溫儀測(cè)定炒鍋溫度)，不斷拌炒至所需時(shí)間后，迅速倒入晾盤內(nèi)攤開、晾涼。

2 結(jié) 果

2.1 正交試驗(yàn) 根據(jù)炮制經(jīng)驗(yàn)以及前期預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)炮制后3種黃酮類成分的含量影響因素很多，包括酒的種類、酒中乙醇含量、加酒量、炒制溫度、炒制時(shí)間等，尤以后3種因素最為顯著，故在單因素考察的基礎(chǔ)上，確定以黃酒占炮制藥材量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(A)、炒制溫度(B)、炒制時(shí)間(C)為考察對(duì)象，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)法對(duì)處方進(jìn)行優(yōu)化。試驗(yàn)因素及水平安排見表1。

表1 酒黃芩炒制過程中因素水平

對(duì)于酒黃芩而言，其所含黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素均為重要的活性物質(zhì)，因此采用多指標(biāo)綜合加權(quán)評(píng)分法對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)[8-9]，三者中黃芩苷含量最多，其余兩個(gè)成分較少，所以權(quán)重系數(shù)按黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素排列分別為60%、20%和20%。各次實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。從結(jié)果看，黃芩苷含量在5%～20%之間，設(shè)定20%為滿分60分，按(實(shí)測(cè)值/20%)×60計(jì)算黃芩苷得分；漢黃芩苷含量在0.5%～5%之間，設(shè)定5%為滿分20分，按(實(shí)測(cè)值/5%)×20計(jì)算漢黃芩苷得分；黃芩素含量在0.1%～2%之間，設(shè)定2%為滿分20分，按(實(shí)測(cè)值/2%)×20計(jì)算黃芩素得分；三者之和為總分?？偡衷礁?，表明各成分含量越高，炒制效果越好。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果

根據(jù)表2結(jié)果，由極差大小順序排列，對(duì)炒制后酒黃芩中黃芩苷、漢黃芩苷和黃芩素3個(gè)指標(biāo)的影響作用大小次序?yàn)椋築>C>A，最好的炮制條件為A2B1C2，即黃酒質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%、炒制溫度為140 ℃、炒制時(shí)間6 min。

2.2 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 為進(jìn)一步驗(yàn)證炮制工藝的可行性和穩(wěn)定性，以此工藝炒制了6批酒黃芩樣品，測(cè)得黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素含量分別為(16.1±1.8)%、(2.9±0.3)%和(1.4±0.2)%，均優(yōu)于正交設(shè)計(jì)中各次試驗(yàn)結(jié)果，表明優(yōu)化成功。

3 討 論

2010年版《中國藥典》記載的酒黃芩的炮制方法為“取黃芩片，加黃酒拌勻，悶透，置鍋內(nèi)用文火炒干，取出放涼。每100 kg 藥材加10 kg 黃酒”，沒有炒制溫度、炒制時(shí)間等指標(biāo)的量化標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致酒黃芩的炮制工藝可能因人而異，難以保證質(zhì)量。雖有少量報(bào)道采用正交試驗(yàn)等方法進(jìn)行炮制工藝的優(yōu)化，但均僅以黃芩苷為指標(biāo)[5-6]，不能全面反映炮制后的藥材品質(zhì)。

黃芩素是黃芩苷的苷元，黃芩素、黃芩苷具有較強(qiáng)抗菌功能，且能抗病毒、抗氧化、解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、降糖等，黃芩素還具有擴(kuò)張血管、保護(hù)腦神經(jīng)等作用[10-13]；漢黃芩苷具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等活性[14-15]，因此本研究以這3種成分為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)綜合評(píng)分法優(yōu)化其酒制工藝。影響酒黃芩黃酮類成分含量的因素很多，包括酒的種類、酒中乙醇含量、加酒量、炒制溫度、炒制時(shí)間等，前期預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，后3種因素對(duì)炮制后3種黃酮類成分的含量影響最顯著。本文是在單因素考察的基礎(chǔ)上，選用乙醇含量9%的紹興黃酒，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)法對(duì)炮制工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定了相對(duì)最佳的組合，即黃酒質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%、炒制溫度為140 ℃、炒制時(shí)間6 min，可以得到黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素含量較高的酒制黃芩。

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Study on processing technology optimization of wine radix scutellariae by orthogonal design

ZhouShuang1,ZhuJing2△

(1.DepartmentofPharmacy,JiangbeiDistrictHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chongqing400020,China;2.DepartmentofPharmacy,BeibeiDistrictHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chongqing400700,China)

Objective To screen the optimized processing technology of wine radix Scutellariae.Methods With the the comprehensive score of the yield rates of baicalin,wogonoside and baicalein as the index,the orthogonal design was used to investigate the mass fractions of yellow wine quantity,stir-frying temperature and frying time of wine radix Scutellariae.Results The optimum yellow wine mass fraction was 10%,the stir-frying temperature was 120℃,the frying time was 6 min,and this processing technology was stable and feasible.Conclusion The orthogonal design can be used for the optimization of processing technology of wine radix Scutellariae.

scutellariae baicalesis;orthogonal design;drug-processing

周霜(1976-)，本科，主管中藥師，主要從事中藥調(diào)劑、中藥鑒別及炮制。

△通訊作者，E-mail:zhoushuang0826@yeah.net。

:10.3969/j.issn.1671-8348.2015.15.020

R914

A

1671-8348(2015)15-2070-02

2014-12-18

2015-02-16)