HPLC法測定對乙酰氨基酚泡騰片含量
2015-01-01 00:00:00宋蕊
【摘 要】對乙酰氨基酚也稱為對羥基乙酰苯胺、醋氨酚或撲熱息痛，是一種常用的退熱和止痛藥物。本實(shí)驗(yàn)建立反相高效液相色譜法測定對乙酰氨基酚泡騰片中對乙酰氨基酚的含量。方法：采用安捷倫 C18色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm），磷酸鹽緩沖液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10），檢測波長為254nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于對乙酰氨基酚泡騰片中對乙酰氨基酚的含量測定。
【關(guān)鍵詞】對乙酰氨基酚泡騰片；含量；測定
對乙酰氨基酚也稱為對羥基乙酰苯胺、醋氨酚或撲熱息痛，是一種常用的退熱和止痛藥物。對乙酰氨基酚有解熱鎮(zhèn)痛作用，用于感冒發(fā)燒、關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛、偏頭痛、癌痛及手術(shù)后止痛等。對乙酰氨基酚是非那西丁在體內(nèi)的代謝產(chǎn)生，其抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)前列腺素合成的作用與阿司匹林相似，但抑制外周前列腺素合成作用弱。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對對乙酰氨基酚泡騰片中的對乙酰氨基酚的進(jìn)行了含量測定。
1.儀器與試藥
1.1儀器
FL2200-2高效液相色譜儀（浙江福立分析儀器有限公司）；CO-1000型色譜柱溫箱（上海子期實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琦有限公司）；HQ-50高端試劑級超純水機(jī)（鄭州華新電氣公司） ；ABS220-4分析天平（德祥科技有限公司）；AP-01P無油隔膜真空泵（杭州格圖科技有限公司）；JL_720DTH超聲波清洗器（南京科捷分析儀器有限公司）；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。
1.2色譜柱
安捷倫 C18色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm）。
1.3對照品
對乙酰氨基酚 購自中國藥品生物制品檢定所。
1.4試劑
甲醇（上海譜振生物科技有限公司）、磷酸二氫鈉（撫順市新光精細(xì)化工有限責(zé)任公司）、溴化四丁基銨（北京邁瑞達(dá)科技有限公司）、乙腈（上海譜振生物科技有限公司）、冰醋酸（武漢宏信康精細(xì)化工有限公司）、三乙胺（鄭州皇朝化工產(chǎn)品有限公司）、四丁基硫酸氫銨（上海譜振生物科技有限公司）、庚烷磺酸鈉（沈陽試三生化科技開發(fā)有限公司）、四氫呋喃（武漢宏信康精細(xì)化工有限公司）。
1.5試藥
對乙酰氨基酚泡騰片。
2.測定方法確定
2.1色譜條件
依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-10]。流動相：磷酸鹽緩沖液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10），檢測波長：254nm，流速：1.0ml·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。
2.2對照品溶液的制備
精密稱取對乙酰氨基酚對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含20μg的溶液，即得。
2.3供試品溶液的制備
取對乙酰氨基酚泡騰片適量，研細(xì)，精密稱取，置50mL量瓶中，加水溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。
2.4專屬性試驗(yàn)
在處方中去對乙酰氨基酚制成陰性樣品，依上述方法測定，結(jié)果在對乙酰氨基酚出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。
2.5精密度試驗(yàn)
精密稱取對乙酰氨基酚對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.76%，表明本方法精密度良好。
2.6對照品的線性考察
精密稱取對乙酰氨基酚對照品15mg，置250ml容量瓶中，加入流動相溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，對乙酰氨基酚在18～60μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)
稱取同一批的對乙酰氨基酚泡騰片樣品6份，按測定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.83%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。
2.8準(zhǔn)確度試驗(yàn)
精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的對乙酰氨基酚對照品，上述方法進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.2%，RSD=0.86%。結(jié)果表明此方法的回收率良好。
2.9樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一批對乙酰氨基酚泡騰片樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、2、4、6、8小時，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定對乙酰氨基酚泡騰片中對乙酰氨基酚的RSD=0.72%。結(jié)果表明供試品8小時內(nèi)穩(wěn)定。
3.結(jié)論
分別考察磷酸鹽緩沖液（pH4.5）-甲醇-乙腈（80：10：10），甲醇-0.01mmol·L-1三乙胺水溶液（70∶30，冰醋酸調(diào)pH7.0），甲醇-0.3%磷酸（37∶63），2%庚烷磺酸鈉溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：30：0.1），乙腈-四氫呋喃-三乙胺磷酸緩沖液（25：15：60），磷酸鹽緩沖液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10），0.34%四丁基硫酸氫銨溶液-乙腈（75∶25）不同比例的流動相，結(jié)果以磷酸鹽緩沖液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用磷酸鹽緩沖液（pH4.5）-甲醇-乙腈（85：5：10）為流動相。本實(shí)驗(yàn)表明此方法可用于對乙酰氨基酚泡騰片中對乙酰氨基酚的含量測定。對乙酰氨基酚泡騰片中對乙酰氨基酚的含量為標(biāo)示量的95-105%。
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