2株新城疫病毒的分離與鑒定

【摘要】鹽都、建湖兩養(yǎng)殖戶雞群大批死亡，有呼吸道癥狀，拉稀。剖檢喉、氣管內(nèi)有大量黏液，盲腸扁桃體出血，腺胃乳頭出血，脂肪肝，脾臟腫大，卵子明顯變性，胰臟出血，疑似新城疫病例。采集病雞的肝，腸道等病變組織。經(jīng)處理后接種10日齡非免疫雞胚，致死雞胚。取雞胚尿囊液，做HA 試驗(yàn)，兩樣品均有血凝性，再用抗H5亞型禽流感病毒陽(yáng)性血清、抗H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性血清和抗新城疫病毒陽(yáng)性血清進(jìn)行HI試驗(yàn)，結(jié)果顯示僅抗新城疫病毒陽(yáng)性血清對(duì)兩樣品有血凝抑制作用，說(shuō)明分離到的病毒均為新城疫病毒。通過(guò)MDT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)兩地雞群感染的新城疫病毒均為強(qiáng)毒株。

【關(guān)鍵詞】雞；新城疫病毒；分離；鑒定；血凝試驗(yàn)；血凝抑制試驗(yàn)

綜述

新城疫（ND），也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由新城疫病毒引起的一種高度接觸性傳染病，常呈敗血癥經(jīng)過(guò)，主要特征是呼吸困難，下痢，神經(jīng)癥狀，黏膜和漿膜出血，腺胃黏膜出血具有診斷意義[1]。感染雞的呼吸道、循環(huán)系統(tǒng)、胃腸道紊亂及神經(jīng)癥狀都很明顯，蛋雞可有突發(fā)性產(chǎn)蛋下降、產(chǎn)薄殼蛋或雞蛋白蛋。臨床表現(xiàn)取決于宿主的年齡及其免疫狀態(tài)、感染毒株的毒力及嗜性；一般潛伏期為5天[2]。

世界范圍內(nèi)曾經(jīng)發(fā)生過(guò)4次大規(guī)模的流行。首次大爆發(fā)源于東南亞和英國(guó)，從1926年到1960年，經(jīng)過(guò)30多年的時(shí)間，從印泥和英國(guó)傳遍了全世界。第二次大流行始于20世紀(jì)60年代，從中東迅速傳播到世界大部分國(guó)家，此次流行傳播速度較快，原因是養(yǎng)禽業(yè)已經(jīng)拓展為國(guó)際貿(mào)易，空中運(yùn)輸禽類及珍禽類是此次流行的重要傳媒。第三次流行始于1974年前后，疫源地尚無(wú)定論，但由于疫苗的推廣使用，使得引起疫病流行的病毒更加復(fù)雜[3]。第四次流行始于20世紀(jì)70年代晚期，源于中東，傳染源是鴿副黏病毒I型，1981年傳至歐洲，然后迅速傳遍世界，并流傳至今[4]。特別是20世紀(jì)90年代后，該病在歐洲、亞洲許多國(guó)家發(fā)生，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的損失。

特別值得關(guān)注的是鵝的NDV感染，在1997年以前，幾乎沒(méi)有鵝感染NDV發(fā)病的報(bào)導(dǎo)，即使人工攻毒，水禽的發(fā)病率和致死率也較低。但自1997年以后，NDV對(duì)鵝的感染率、發(fā)病率及病死率明顯升高，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)于鵝NDV來(lái)源，究竟是在鵝體內(nèi)長(zhǎng)期試用的結(jié)果，還是雞源NDV的演化，目前沒(méi)有定論，但從水禽上分離的NDV毒力變化已引起人們的關(guān)注。國(guó)外學(xué)者Rosenberger和Sbortridge分別在加拿大、香港分離出了鵝副黏病毒，國(guó)內(nèi)學(xué)者王永坤1997年在江蘇的揚(yáng)州也分離到鵝副黏病毒[5]。這種最近才發(fā)生的新病，對(duì)小鵝的發(fā)病率和死亡率幾乎100%，對(duì)成年鵝的發(fā)病率也達(dá)到50%～70%，死亡率達(dá)到10%～50%。

1、病原及流行病學(xué)

新城疫病毒屬于副黏病毒科腮腺炎病毒屬，完整病毒粒子近圓形，直徑為120～130nm，有不同長(zhǎng)度的細(xì)絲。有囊膜，在囊膜的外層呈放射狀排列的突起物或稱纖突，具有能刺激宿主產(chǎn)生抑制紅細(xì)胞凝集素和病毒中和抗體的抗原成分，病毒核酸類型為單股、負(fù)鏈、不分階段的RNA。新城疫是目前我國(guó)最常見(jiàn)、最普遍、危害最嚴(yán)重的禽類傳染病，歸納本病的流行趨勢(shì)有以下特點(diǎn)：

1）主要發(fā)生于小規(guī)模、大群體、密集型的農(nóng)戶散養(yǎng)雞群，通常雞舍簡(jiǎn)陋、環(huán)境條件差，由于防疫意識(shí)不強(qiáng)、飼養(yǎng)管理不善、墊料替換不勤，在冬、春陰雨寒冷季節(jié)或夏季高溫天氣，易造成大面積流行。

2）從發(fā)病日齡來(lái)看，各種日齡的家禽都可發(fā)病，臨床病例以在15～40日齡、60～120日齡、170～330日齡等三個(gè)階段較為多見(jiàn)。

3）經(jīng)過(guò)多次免疫接種、抗體水平較高的雞群仍可發(fā)病，且發(fā)病率和死亡率與發(fā)病日期、新城疫毒力的強(qiáng)弱、飼養(yǎng)管理的優(yōu)劣、有無(wú)并發(fā)癥以及診療是否及時(shí)有關(guān)。

4）本病主要通過(guò)呼吸道和消化道感染發(fā)病，健康雞通過(guò)接觸病死雞的排泄物、分泌物、病死雞污染的飼料、飲水、墊料、空氣等傳播，病死雞是本病的主要傳染源（目前國(guó)內(nèi)大部分養(yǎng)雞場(chǎng)對(duì)病死雞不作科學(xué)處理是造成疾病不斷發(fā)生的重要因素）。

5）目前雖然我國(guó)各地所有雞群對(duì)新城疫采取了強(qiáng)化的免疫預(yù)防措施，但新城疫仍然以不同的形式在流行，因此可以說(shuō)，幾乎很難說(shuō)有哪一個(gè)雞群真正消滅了新城疫病毒的感染，然而，在不同類型的雞群，NDV感染發(fā)生和流行的特點(diǎn)各不相同。在臨床上，一般都是以非典型新城疫流行的，在成年雞群中多表現(xiàn)為一時(shí)性產(chǎn)蛋下降（特別是產(chǎn)蛋高峰期）[6]。

2、診斷

由于急性、典型新城疫的癥狀和病變與高致病性禽流感十分相似，因此，僅憑癥狀與病變很難作出準(zhǔn)確的判斷。可參考雞群的免疫程序和血凝抑制抗體滴度作出判斷，如已有明顯的新城疫臨床癥狀和病理變化。至于非典型新城疫，由于其呼吸道癥狀與傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎、支原體感染和非高致病性禽流感相似，而減蛋綜合征、禽流感等多種疾病均可引起產(chǎn)蛋下降，所以憑臨床癥狀和病理變化很難作出非典型性新城疫的初步診斷，必須進(jìn)行病毒分離鑒定和其他的實(shí)驗(yàn)室診斷才能確診。

1）病毒分離與初步鑒定：病料接種9～11日齡的非免疫雞胚，37℃恒溫箱培養(yǎng)，觀察雞胚的死亡情況。

2）病毒的進(jìn)一步鑒定：因禽流感病毒、減蛋綜合征等其他一些病毒也具有凝集雞紅細(xì)胞的活性，所以在HA呈陽(yáng)性后，還必須用新城疫抗血清對(duì)分離的病毒進(jìn)行紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI試驗(yàn)），最好同時(shí)分別用新城疫、禽流感和減蛋綜合征的抗血清與分離物做HI試驗(yàn)。如果新城疫抗血清能抑制被分離物的HA活性，而其他血清不能將其抑制，則被分離的病毒為新城疫病毒；如病毒的HA活性分別能被新城疫及禽流感的抗血清所抑制，則提示分離物中在感染了新城疫的同時(shí)還合并感染了禽流感。在確定為新城疫病毒后，還必須進(jìn)行病毒的毒力測(cè)定，以確定被分離的病毒是野外強(qiáng)毒還是疫苗株病毒。作為一般生產(chǎn)性診斷，可將分離的病毒接種非免疫雞或SPF雞，如果病毒能致死敏感雞，則可確診。必要時(shí)也可進(jìn)一步作致病指數(shù)的測(cè)定，包括雞胚平均死亡時(shí)間（MDT）、腦內(nèi)接種指數(shù)（ICPI）、靜脈接種指數(shù)（IVPI）、已凝集的紅細(xì)胞洗脫速度、蝕斑形成特點(diǎn)、病毒基因序列分析等[7]。

3）其他診斷方法：主要包括免疫熒光抗體、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、單克隆抗體技術(shù)、核酸探針等分子生物學(xué)技術(shù)等。由于目前雞群已普遍接種新城疫疫苗，血清學(xué)方法如未能區(qū)分抗體來(lái)自疫苗還是野外病毒之前，必須比較感染前后的抗體滴度是否有明顯上升，才具有診斷意義。

4）與禽流感的鑒別診斷：H5亞型高致病性禽流感很少感染30日齡以內(nèi)的雛雞，其發(fā)病急、潛伏期和病程短，頭腫、腿鱗出血，短時(shí)間內(nèi)大批死亡，但無(wú)腸道棗核樣壞死。發(fā)生H9亞型低致病性禽流感時(shí)，有頭腫、拉稀和呼吸道癥狀，但病程較ND長(zhǎng)，死亡也沒(méi)有ND集中，也無(wú)神經(jīng)癥狀和棗核樣壞死，且死亡雞通常有卵黃性腹膜炎和輸卵管內(nèi)分泌物。

3、綜合防治

新城疫常以散發(fā)存在，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害很大，必須嚴(yán)格按國(guó)家有關(guān)法令和規(guī)定，對(duì)疫情進(jìn)行嚴(yán)格處理，必須認(rèn)真地執(zhí)行預(yù)防傳染病的總體衛(wèi)生防疫措施，以便減少爆發(fā)的危險(xiǎn)，尤其是在每年的冬季，養(yǎng)雞場(chǎng)均應(yīng)采取嚴(yán)格的防范措施。

1）把好疫苗質(zhì)量關(guān)：選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的疫苗，嚴(yán)格遵守疫苗的運(yùn)輸、貯存規(guī)定，按照疫苗使用說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2）排除母源抗體的干擾：有條件的用戶（場(chǎng)）可監(jiān)測(cè)其母源抗體水平，根據(jù)母源抗體水平的高低，利用“最佳首免日齡=（1日齡測(cè)得母源抗體滴度-4）×4.5+5，如果無(wú)法測(cè)得母源抗體時(shí)，可在1日齡用新城疫油乳劑滅火苗注射，同時(shí)IV系苗點(diǎn)眼或滴鼻，即可排除母源抗體的干擾，及早產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力。

3）合理制定和調(diào)整免疫程序：根據(jù)當(dāng)?shù)匾咔?，按先主后次的原則，合理制定免疫程序，尤其感染了法氏囊病后，應(yīng)在雞群恢復(fù)后對(duì)ND進(jìn)行補(bǔ)免。

4）選擇最佳的免疫途徑：對(duì)個(gè)體免疫時(shí)，皮下注射或肌肉注射效果最好，點(diǎn)眼次之，滴鼻再次。對(duì)群體免疫而言，氣霧免疫好于飲水免疫。

5）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，飼喂優(yōu)質(zhì)全價(jià)的飼料，使其內(nèi)臟器官及免疫系統(tǒng)能正常發(fā)育。同時(shí)給雞群創(chuàng)造安定、舒適的環(huán)境，使免疫雞群處在健康狀態(tài)。

6）切忌濫用藥物：在免疫期間，禁止使用氯霉素、磺胺、呋喃、激素類藥物，在免疫前后三天內(nèi)更不可帶雞消毒，當(dāng)然也并非任何藥物都不能用，可適當(dāng)用青霉素、喹諾酮等藥物，以防繼發(fā)感染。

7）如雞群發(fā)病，要盡早隔離、并銷毀病死雞，同時(shí)對(duì)雞群進(jìn)行緊急接種。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，強(qiáng)毒污染時(shí)有發(fā)生，而疫苗接種只能減少病毒侵入雞群時(shí)帶來(lái)的損失，不能消滅雞群內(nèi)存在的強(qiáng)毒。因此，一定要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生防疫措施，嚴(yán)格消毒，切斷每個(gè)可能傳播的途徑，盡可能給雞群一個(gè)清潔、舒適的環(huán)境，以利于其生長(zhǎng)[8，9]。

4、材料與方法

4.1 試驗(yàn)材料

4.1.1 病料來(lái)源

病例一：2013年3月2日，鹽都某養(yǎng)殖場(chǎng)雞群發(fā)病，病死雞日齡為300d，共養(yǎng)殖1000只，死亡200多只，剖檢多呈現(xiàn)腹膜炎癥狀，喉、氣管內(nèi)有大量黏液，腺胃乳頭出血，拉稀，脾臟腫大，卵子變性，2月齡通過(guò)飲水的方式用過(guò)副黏病毒疫苗，呼吸道、氣管都有出血現(xiàn)象，無(wú)明顯的神經(jīng)癥狀，編號(hào)為YDND。

病例二：2013年5月20日，建湖某養(yǎng)殖場(chǎng)的2000只育成雞，18周齡突然發(fā)病，每天死亡30-40只，且死亡有日漸增多的趨勢(shì)。部分雞精神沉郁，羽毛蓬亂，擠在一起或獨(dú)處，縮于陰暗角落，極度衰弱，食欲減退或廢絕，腹瀉，排黃綠色糞便，剖檢肌胃角質(zhì)層下有點(diǎn)狀或片狀出血，腺胃乳頭出血，部分腸管出血，編號(hào)JHND。

4.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

10日齡非免疫雞胚（購(gòu)于山東家禽所SPF雞場(chǎng)）。

4.1.3 制備1%雞的紅細(xì)胞

4.1.3.1 PBS的制備：氯化鈉8g；磷酸氫二鈉3.63g；蒸餾水100ml。

4.1.3.2 抗凝劑的制備：檸檬酸三鈉5g，氯化鈉0.9g，蒸餾水100 ml。

4.1.3.3 1%雞紅細(xì)胞的制備：采集三只健康公雞的混合血，抗凝劑與雞血比為1：4。加入PBS洗滌紅細(xì)胞，每次洗滌在2000r/m離心15min，連續(xù)洗滌4～5次，最后紅血球壓積，1體積紅血球加入99體積 PBS，混勻，4℃保存?zhèn)溆?～3天。

4.1.4 普通瓊脂平板

將10g蛋白胨，3ml牛肉膏，5g氯化鈉溶解于100ml蒸餾水中，加入15%氫氧化鈉溶液約2ml調(diào)PH到7.2～7.4，加入瓊脂2g，加熱至使瓊脂完全溶解，分裝、高壓滅菌（121℃，15min），澆平板，待用。

4.1.5 陽(yáng)性血清

NDV陽(yáng)性抗血清，H9亞型禽流感病毒的陽(yáng)性抗血清，H5亞型禽流感病毒的陽(yáng)性抗血清，（均由江蘇省流行病學(xué)研究中心實(shí)驗(yàn)室提供）。

4.2 試驗(yàn)方法

4.2.1 細(xì)菌學(xué)檢查

為區(qū)分是細(xì)菌病還是病毒病進(jìn)行鑒別診斷：取肝、脾按常規(guī)觸片染色鏡檢，同時(shí)接種普通瓊脂平板，37℃培養(yǎng)48h后觀察。

4.2.2 病毒分離

以無(wú)菌法取病死雞的肝、脾、泄殖腔、氣管等臟器。將病料按1：5加入雙抗PBS（含慶大霉素與鏈霉素）于高壓過(guò)的研缽中研磨，收集研磨液，反復(fù)凍融三次。以7000r/m，離心10min，再次用雙抗PBS1：2稀釋，離心同上。置4℃冰箱，備用。

4.2.3 雞胚接種

1.用照蛋器照蛋，棄去死胚、未受精胚及不健康的雞胚。畫出氣室邊緣和無(wú)毛細(xì)血管處。

2.氣室端先用碘酊消毒，然后用75%的酒精脫碘，再用消毒過(guò)的鑷子在各雞胚上打一小孔。

3.用消毒的注射器吸取處理好的病毒樣品，按每只0.1～0.2ml，接種于雞胚的尿囊腔，用石蠟熔融封口。

4.置35～37℃恒溫箱培養(yǎng)，24h死亡雞胚棄去，收集24～96h內(nèi)死亡雞胚的尿囊液。

5.收胚前將雞胚轉(zhuǎn)移至4℃冷藏6h。用75%的酒精消毒雞胚氣室部分，用無(wú)菌鑷子將消毒過(guò)的蛋殼打碎，再用另一把無(wú)菌鑷子將殼膜和尿囊膜撕開(kāi)，并將雞胚輕輕推向一側(cè)，壓住，用吸管收取尿囊液。

4.2.4 血凝試驗(yàn)（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）

4.2.4.1 HA試驗(yàn)

按常規(guī)微量法進(jìn)行，結(jié)果以出現(xiàn)100%凝集的病毒的最大稀釋度為該樣品的HA效價(jià)。試驗(yàn)操作方法：將25μl PBS或生理鹽水加入96孔V型微量反應(yīng)板A～H行的1～12孔。被檢病毒病料各25μl分別加入A～H行的第一孔，然后倍比稀釋至第11孔，棄去25μl，12孔為陰性對(duì)照。沒(méi)空再加入25μl PBS或生理鹽水，最后懸空加入25μl的1%雞紅細(xì)胞于每一孔。混勻，室溫靜置，觀察試驗(yàn)結(jié)果，確定HA滴度。

4.2.4.2 HI試驗(yàn)

按常規(guī)微量法進(jìn)行，結(jié)果按完全抑制紅細(xì)胞凝集的血清最高稀釋度為血凝抑制價(jià)。試驗(yàn)操作方法：將25μl PBS或生理鹽水加入96孔V型微量反應(yīng)板A～H行的1～12孔；在第一行、第二行和第三行的第一孔依次加入NDV、H5亞型禽流感、H9亞型禽流感病毒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性抗血清；用移液器對(duì)血清進(jìn)行倍比稀釋至第10孔，然后每排棄去25μl；在每排1～11孔加入25μl 4單位病毒，置振蕩器上混勻，放入37℃恒溫箱中作用10min；在每排各孔加入1%雞紅細(xì)胞50μl，第12孔補(bǔ)加50μl PBS保證總體積一致，振蕩混勻后，室溫或置37℃恒溫箱中作用15～30min，觀察試驗(yàn)結(jié)果。

4.2.5 雞胚平均死亡時(shí)間（MDT）的測(cè)定

用滅菌生理鹽水連續(xù)10倍稀釋病毒（10-1….10-9），每一稀釋度接種5枚非免疫雞胚，每胚0.2ml，同時(shí)設(shè)置5枚接種生理鹽水的雞作為對(duì)照組。37℃恒溫孵育，棄取24小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚，之后每隔6小時(shí)觀察一次，直至120小時(shí)。能夠使所有雞胚致死的病毒的最大稀釋倍數(shù)即為病毒的最小致死量（MLD），MDT是MLD致死雞胚的平均死亡時(shí)間。經(jīng)試驗(yàn)得知這兩樣品的最小致死量均為10-7稀釋度，取該稀釋度接種5個(gè)10日齡的非免疫雞胚，每個(gè)尿囊腔接種0.2ml。同時(shí)設(shè)置5枚接種生理鹽水的雞作為對(duì)照組，接種后的雞胚在37℃孵育7天，每天早晚各照胚一次，記錄每組雞胚中各個(gè)胚死亡的時(shí)間。

5、結(jié)果

5.1 細(xì)菌學(xué)檢查

37℃培養(yǎng)48h后，觀察平板，瓊脂平板上無(wú)任何細(xì)菌生長(zhǎng)，表明該樣品的病原不是細(xì)菌。

5.2 病毒分離

將處理的病料接種10日齡非免疫雞胚后，于24h～96h內(nèi)死亡，雞胚呈全身出血性病變，尤其是頭部和四肢出血嚴(yán)重。取死亡的雞胚置4℃過(guò)夜（不超過(guò)24h）后無(wú)菌采集尿囊液，尿囊液清亮。

5.3 HA和HI試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)HA試驗(yàn)，可知兩樣品的血凝價(jià)分別為7log2、6log2（見(jiàn)表1）；通過(guò)血凝抑制試驗(yàn)可知：這兩病毒樣品都既不能被H5亞型禽流感抗血清抑制，也不能被H9亞型禽流感抗血清抑制，只能被NDV陽(yáng)性抗血清抑制，其HI效價(jià)分別為1：4log2、1：3log2（見(jiàn)表2），結(jié)果顯示從兩地病雞中分離出的病原都為新城疫病毒。

表1 HA試驗(yàn)結(jié)果

樣品號(hào)123456789101112

YDND#######—————

JHND######++++++———

注：#為完全凝集；++為不完全凝集；—為不凝集

表2 HI試驗(yàn)結(jié)果

樣品陽(yáng)性血清123456789101112

YDNDNDV抗血清————#######—

YDNDH5亞型禽流感抗血清###########—

YDNDH9亞型禽流感抗血清###########—

JHNDNDV抗血清———########—

JHNDH5亞型禽流感抗血清###########—

JHNDH9亞型禽流感抗血清###########—

注：# 為完全凝集；++ 為不完全凝集；— 為不凝集

5.4 MDT的測(cè)定

通過(guò)該試驗(yàn)可知，雞胚平均死亡時(shí)間（MDT）分別為 47.6 h、44.4 h（見(jiàn)表3），表明這兩個(gè)樣品中分離出來(lái)的NDV的毒力均為強(qiáng)毒。

表3 MDT實(shí)驗(yàn)結(jié)果

毒株最小致死量雞胚死亡時(shí)間（h）MDT（h）

12345

YDND10-7/0.2ml444250534747.6

JHND10-7/0.2ml424738455044.4

6、小結(jié)與討論

鹽都、建湖兩養(yǎng)殖戶的雞群大批死亡，根據(jù)臨床癥狀和病理變化，初步懷疑為新城疫病毒感染，采集病料進(jìn)行血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)，結(jié)果顯示兩地雞群感染的病原均為新城疫病毒，接著通過(guò)MDT試驗(yàn)表明這兩個(gè)樣品中分離出來(lái)的NDV的毒力均為強(qiáng)毒。

仔細(xì)分析病例，我們不難得出：盡管病例一的雞群在二月齡已注射過(guò)雞副黏病毒疫苗和禽流感疫苗，但仍發(fā)生的了新城疫，而且發(fā)病率及病死率都較高，其原因可能有：

1）首免時(shí)間不準(zhǔn)確：如果首免時(shí)間過(guò)早，則疫苗被中和；而過(guò)晚則母源抗體降低，不能保護(hù)雛雞；

2）機(jī)體免疫功能下降：傳染性法氏囊病、馬立克氏病等的病毒和球蟲(chóng)、組織滴蟲(chóng)等感染都能侵害免疫系統(tǒng)而造成免疫抑制，導(dǎo)致肌體免疫功能降低，對(duì)疫苗的應(yīng)答能力減弱，對(duì)疾病易感性增加；

3）缺乏綜合防治觀念：部分養(yǎng)雞戶認(rèn)為接種疫苗就有了保證，而忽略了平時(shí)的飼養(yǎng)管理、必需的營(yíng)養(yǎng)添加和經(jīng)常的消毒衛(wèi)生。

4）疫苗保存不當(dāng)引起失效：養(yǎng)雞戶對(duì)疫苗運(yùn)輸、保管和使用不當(dāng)，如取回疫苗后無(wú)冰箱設(shè)備、長(zhǎng)期放在高溫或直射陽(yáng)光下或稀釋后長(zhǎng)時(shí)間未用等，造成疫苗失效而使免疫失敗。

另外新城疫毒力的變異，野毒的侵襲，各種應(yīng)激因素等其他方面也可以造成新城疫的流行。

從結(jié)果上看，YDND、JHND的MDT值分別為47.6h、44.4h，即表明分離到的毒株符合強(qiáng)毒株的特征。新城疫病毒只有一個(gè)血清型，其抗原性一致，但毒力差異很大，一般認(rèn)為強(qiáng)毒株MDT為40～60小時(shí)，ICPI≥1.6。但近年來(lái)，發(fā)生更多的則是關(guān)于非典型新城疫的報(bào)導(dǎo)：它主要發(fā)生在免疫雞群中，臨床癥狀及剖檢變化都因不表現(xiàn)典型新城疫的特征而往往被忽視，發(fā)病時(shí)間多在30日齡以后，一般以呼吸道和消化道癥狀為主，病雞主要表現(xiàn)為呼吸困難、咳嗽和氣喘，采食、飲水無(wú)明顯變化或逐漸減少，嗉囊少食或空虛，初期排黃綠色稀糞，后期排黃色糞便，用藥物治療效果不明顯。

在采集病例及基層實(shí)際工作中，我們發(fā)現(xiàn)并不是所有的養(yǎng)殖戶對(duì)新城疫病毒都有清晰的理解，在不同方面還存在不少誤區(qū)，主要表現(xiàn)在：

1）雞群中出現(xiàn)綠色糞便就認(rèn)為是新城疫：雞群感染新城疫后會(huì)出現(xiàn)腹瀉，拉黃綠色或黃白色稀糞等，但禽流感、傳染性法氏囊病、傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎、禽霍亂、大腸桿菌病等都會(huì)出現(xiàn)黃白色或黃綠色糞便。

2）雞群中出現(xiàn)有神經(jīng)癥狀的雞就認(rèn)為是新城疫：雞在患慢性新城疫后會(huì)出現(xiàn)扭頭、頭向后仰、腿翅麻痹、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、抽搐、兩腳向后伸等神經(jīng)癥狀。但其他的許多疾病也可出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如神經(jīng)型馬立克氏病、禽腦脊髓炎、維生素缺乏等。

3）疫苗免疫的越早越好：雛雞出殼后體內(nèi)有來(lái)自種蛋的母源抗體，這種母源抗體可保護(hù)雛雞約1～2周，因此，沒(méi)有抗體檢測(cè)條件的養(yǎng)雞戶，可在一周齡進(jìn)行首免比較合適，有條件的最好是檢測(cè)一下母源抗體，然后再確定首免時(shí)間。

4）疫苗免疫的劑量越大越好：根據(jù)雞群的情況、疫苗的種類及免疫方法，適當(dāng)加大疫苗的劑量是可以增強(qiáng)免疫效果的，但用量過(guò)大就會(huì)造成雞群強(qiáng)烈的應(yīng)激，反而會(huì)使免疫應(yīng)答能力減弱而影響免疫效果，特別是活疫苗，用量過(guò)大還會(huì)造成嚴(yán)重的疫苗接種反應(yīng)。

5）免疫的次數(shù)越多越好：任何一種疫苗都有一定的免疫期，如果在疫苗的有效免疫期內(nèi)，免疫抗體水平較高的時(shí)候再進(jìn)行免疫，疫苗就會(huì)與原有的抗體發(fā)生中和反應(yīng)，使兩次的免疫都起不到應(yīng)有的效果，過(guò)于頻繁的免疫會(huì)使機(jī)體的免疫應(yīng)答能力降低而出現(xiàn)免疫麻痹。最好的方法是對(duì)免疫抗體水平進(jìn)行定期檢測(cè)，根據(jù)抗體水平的高低確定免疫次數(shù)和時(shí)間。

致謝

本人衷心感謝包匯慧老師的悉心指導(dǎo)。本論文從選題、課題設(shè)計(jì)、實(shí)施到論文寫作無(wú)不凝結(jié)著指導(dǎo)老師的一片心血，感謝王濤、劉金彪等老師在試驗(yàn)和論文寫作的過(guò)程中的幫助。