艾迪注射液新組方對(duì)肝癌荷瘤小鼠扶正作用及其機(jī)制初探

孫彥昊 浦 潔 曹 莉 楊世林 崔京浩

（蘇州大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 蘇州 215123）

艾迪注射液是由人參、黃芪、刺五加、斑螯等組成的中藥復(fù)方抗腫瘤針劑，臨床上主要用于原發(fā)性肝癌、肺癌、腸癌、鼻咽癌、泌尿系統(tǒng)腫瘤、惡性淋巴瘤和婦科惡性腫瘤的輔助治療以及腫瘤術(shù)后的鞏固治療[1-2]。通過(guò)前期有效成分的藥效學(xué)篩選，我們呢保留了艾迪注射液中的人參皂苷、刺五加皂苷、黃芪皂苷和斑蝥素等成分，并通過(guò)正交試驗(yàn)進(jìn)行了成分間配比的優(yōu)化，得到了艾迪注射液新組方。

本文通過(guò)比較正常小鼠和荷瘤小鼠的耐疲勞和耐缺氧實(shí)驗(yàn)，以及荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的測(cè)定，探討了艾迪新組方對(duì)荷瘤小鼠的扶正作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞株

ICR小鼠（SPF）260只，體重23±2g，雄性，購(gòu)自蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；小鼠肝癌H22細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。

1.2 試劑

人參皂苷，黃芪皂苷，刺五加皂苷，（純度均＞80%，蘇州大學(xué)天然藥物教研室自制，批號(hào)：20110228）；斑蝥素（純度＞90%，南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：ZL20090120）；5-氟尿嘧啶（購(gòu)自上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號(hào)：H31020593）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)體瘤模型的建立 選取健康雄性ICR小鼠50只，體重23±2g，無(wú)菌抽取接種6d生長(zhǎng)良好的肝癌H22小鼠腹水，稀釋至細(xì)胞密度為1×107/mL，以每只0.2 mL無(wú)菌接種于小鼠右側(cè)腋窩皮下制造實(shí)體瘤模型。

1.3.2 正常與荷肝癌小鼠耐疲勞實(shí)驗(yàn) 將接種肝癌H22細(xì)胞后的小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。同時(shí)另外選取50只健康雄性ICR小鼠，也隨機(jī)均分為相對(duì)應(yīng)的5組。（1）模型對(duì)照組：生理鹽水10 mL·kg-1·d-1；（2）艾迪新組方低劑量組：艾迪新組方 5.5 mg·kg-1·d-1；（3）艾迪新組方中劑量組：艾迪新組方 11 mg·kg-1·d-1；（4）艾迪新組方高劑量組：艾迪新組方 22 mg·kg-1·d-1；（5）陽(yáng)性對(duì)照組：5-氟尿嘧啶 15mg·kg-1·d-1。 腫瘤接種后次日開(kāi)始腹腔注射給藥，給藥容積均為0.1mL·10g-1，連續(xù)7d。末次給藥 30min 后將各組小鼠尾部負(fù)重（2g），放入水深 20cm，水溫(20±0.5)℃的玻璃缸內(nèi)游泳。記錄小鼠從入水到沉入水底不能再游出水面的時(shí)間。

1.3.3 正常與荷肝癌小鼠耐缺氧實(shí)驗(yàn) 末次給藥30min后將各組小鼠放入容積為150mL的廣口瓶中，加入20g變色硅膠，塞緊瓶蓋，用凡士林封口后，立即計(jì)時(shí)，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察小鼠存活時(shí)間。

1.3.4 艾迪新組方對(duì)免疫器官重量的影響 設(shè)艾迪新組方低、中、高三個(gè)劑量組，并設(shè)立正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。末次給藥24h后（禁食10h）：稱(chēng)小鼠體重，處死動(dòng)物，測(cè)量和計(jì)算臟器系數(shù)。胸腺系數(shù)（%）=（胸腺重量 g/小鼠體重 g）×100%；脾臟系數(shù)（%）=（脾臟重量g/小鼠體重 g）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料均以x±SEM表示，組間比較采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 艾迪新組方對(duì)正常小鼠和肝癌H22荷瘤小鼠耐疲勞的影響

隨著艾迪新組方給藥劑量的增加，正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠的耐疲勞時(shí)間均有所延長(zhǎng)，其中高劑量組與模型對(duì)照組相比具有顯著差異。而5-FU組雖可通過(guò)對(duì)腫瘤的抑制作用，提高肝癌荷瘤小鼠的耐疲勞時(shí)間，但卻明顯縮短了正常小鼠耐疲勞時(shí)間（見(jiàn)表1）。

表1 艾迪新組方對(duì)正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐疲勞的影響(±SEM，N=10)

表1 艾迪新組方對(duì)正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐疲勞的影響(±SEM，N=10)

與模型對(duì)照組比較：*P＜0.05， **P＜0.01.

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2.2 艾迪新組方對(duì)正常小鼠和肝癌H22荷瘤小鼠耐缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果

艾迪新組方各給藥組正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠的耐缺氧時(shí)間均有所延長(zhǎng)，且呈明顯的劑量依賴(lài)性，特別是提高肝癌荷瘤小鼠的耐缺氧能力，其與模型對(duì)照組比較均顯著提高。高劑量也可顯著延長(zhǎng)正常小鼠的耐缺氧時(shí)間。而5-FU卻縮短了正常小鼠的耐缺氧時(shí)間（見(jiàn)表2）。

表2 艾迪新組方對(duì)正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐缺氧的影響(±SEM，N=10)

表2 艾迪新組方對(duì)正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐缺氧的影響(±SEM，N=10)

與模型對(duì)照組比較：*P＜0.05， **P＜0.01.

組 別 正常鼠（min） 荷H22鼠（min）模型對(duì)照組 16.99±0.90 14.20±0.68陽(yáng)性對(duì)照組（5-Fu） 14.51±0.54* 15.58±1.08艾迪新組方低劑量 17.66±1.33 16.07±0.91*艾迪新組方中劑量 18.18±1.04 19.00±0.80**艾迪新組方高劑量 22.37±1.02** 23.00±1.43**

2.3 艾迪新組方對(duì)肝癌H22荷瘤小鼠免疫器官的影響

小鼠荷肝癌實(shí)體瘤后胸腺系數(shù)明顯減小，而脾臟系數(shù)卻顯著增大。肝癌荷瘤小鼠的脾臟腫大的原因，可能是由于移植性癌腫刺激機(jī)體的免疫反應(yīng)，也可能是由于癌細(xì)胞雖淋巴轉(zhuǎn)移侵潤(rùn)脾臟[3]。陽(yáng)性對(duì)照的5-FU組小鼠表現(xiàn)胸腺和脾臟系數(shù)均顯著下降，體現(xiàn)了其對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制作用。艾迪新組方中小劑量組動(dòng)物脾臟系數(shù)接近正常對(duì)照組，而艾迪新組方高劑量下則可顯著增加肝癌荷瘤小鼠脾臟系數(shù)。艾迪新組方對(duì)肝癌荷瘤小鼠的胸腺系數(shù)影響不大。

表3 艾迪新組方對(duì)肝癌H22荷瘤小鼠抑瘤率和臟器系數(shù)的影響(±SEM，N=10)

表3 艾迪新組方對(duì)肝癌H22荷瘤小鼠抑瘤率和臟器系數(shù)的影響(±SEM，N=10)

與模型對(duì)照組比較：*P＜0.05， **P＜0.01；與正常對(duì)照組比較：#P＜0.05，##P＜0.01.

組 別 體重(g)（不含瘤）腫瘤重(g)抑瘤率%胸腺系數(shù)%脾臟系數(shù)%正常對(duì)照組 23.13±0.67 -- -- 0.246±0.021 0.628±0.022模型對(duì)照組 22.67±0.31 1.50±0.23 -- 0.128±0.013##0.838±0.042#陽(yáng)性對(duì)照組（5-FU） 22.60±0.86 0.55±0.08** 63.52 0.066±0.007**## 0.442±0.050**#艾迪新組方低劑量 21.06±0.63 1.02±0.05** 32.06 0.133±0.017##0.665±0.061*艾迪新組方中劑量 21.31±0.65 0.77±0.08** 49.13 0.131±0.017## 0.704±0.055艾迪新組方高劑量 21.20±0.52 0.67±0.11** 55.61 0.127±0.008##0.943±0.071##

2 討論

中醫(yī)認(rèn)為腫瘤的發(fā)病是由于機(jī)體的正氣不足，導(dǎo)致邪毒留聚而成，而疾病的最終轉(zhuǎn)歸由正邪交爭(zhēng)的結(jié)果而定。因此，中醫(yī)治療腫瘤，特別重視正邪之間的關(guān)系處理?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，斑蝥素可通過(guò)破壞線(xiàn)粒體膜、下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2水平、上調(diào)凋亡前蛋白Bax等機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[4]。人參皂苷對(duì)肝癌有一定的治療效果，其機(jī)制可能與抑制端粒酶、抑制自噬及誘導(dǎo)凋亡有關(guān)[5]。黃芪皂苷可下調(diào)肝癌細(xì)胞中致癌基因的高表達(dá)[6]。刺五加皂苷可抑制肝癌細(xì)胞DNA合成[7]。此外，人參皂苷、黃芪皂苷和刺五加皂苷除能直接作用于腫瘤細(xì)胞抑制其生長(zhǎng)外，均具有促進(jìn)機(jī)體免疫功能和通過(guò)提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，增強(qiáng)T細(xì)胞、NK細(xì)胞和IL-II的抗癌話(huà)性，增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力的作用[8]。

本研究結(jié)果表明，艾迪注射液新組方可顯著延長(zhǎng)正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐疲勞和耐缺氧時(shí)間，高劑量時(shí)可明顯增加肝癌H22荷瘤小鼠脾臟系數(shù)，但對(duì)胸腺系數(shù)的影響不明顯。

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