復(fù)方花生肽口服液對(duì)化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用

成 靜，袁宏麗，莫朝暉，陳棟梁

(1.武漢天天好生物制品有限公司，湖北武漢430090;2.湖北省肽類(lèi)物質(zhì)工程技術(shù)研究中心，湖北武漢430090)

花生肽是花生蛋白經(jīng)降解所得，具有良好的吸收性、溶解性、流動(dòng)性以及低致敏性。近年來(lái)，大量國(guó)內(nèi)外研究顯示花生肽具有抗氧化、抗菌、ACE抑制、抗疲勞等［1-5］生理功能。然而在護(hù)肝方面的活性報(bào)道較少，我國(guó)學(xué)者陳貴堂［6］以及彭維兵［7］等研究顯示花生肽對(duì)半乳糖以及CCl4所致急性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用。

蒲公英是我國(guó)常見(jiàn)的野生蔬菜和中草藥，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋的功能。國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究顯示蒲公英具有抗菌、抗胃損傷、保肝膽、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、降血脂、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能［8］。Domitrovi.R 等［9］對(duì)蒲公英研究顯示蒲公英根水提物可顯著減少四氫化碳肝纖維化，增強(qiáng)肝臟再生能力。任麗平［10］等研究顯示蒲公英能顯著降低乙醇引起急性肝損傷小鼠血清ALT和AST水平。

本文以花生肽和蒲公英提取物配制復(fù)方口服液并對(duì)其急性毒理及護(hù)肝功能進(jìn)行研究，探索花生肽與蒲公英提取物復(fù)配口服液的安全性及護(hù)肝效果。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

復(fù)方花生肽口服液 武漢天天好生物制品有限公司提供，其主要原料為花生肽和蒲公英提取物?？诜旱鞍踪|(zhì)含量17.92%、多肽含量13.45%、類(lèi)黃酮含量0.038%;ALT、AST、LDH、MDA、SOD、GSH-PX檢測(cè)試劑盒 南京建成生物工程研究所;實(shí)驗(yàn)室常規(guī)試劑;CCl4分析純。

AR2140電子天平 奧豪斯公司;TGL-16G離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng);FAITH-1000全自動(dòng)生化分析儀 南京勞拉電子有限公司;手術(shù)器材。

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供KM系小鼠(許可證號(hào) SCXY2004-0007)，104只，雌雄各半，體重20±2g。

表1 小鼠體增重檢測(cè)結(jié)果(±s)Table 1 The results of weight gain of mice(±s)

表1 小鼠體增重檢測(cè)結(jié)果(±s)Table 1 The results of weight gain of mice(±s)

時(shí)間(d)正常對(duì)照組 模型組 低劑量組 中劑量組 高劑量組 蒲公英提取物組 花生肽組0 20.78±1.98 21.25±2.23 21.16±0.89 21±1.14 20.76±1.32 21.06±1.78 20.89±1.12 6 28.06±2.24 25.96±1.94 26.56±1.41 27.94±1.76 27.61±1.47 28.43±3.43 27.84±2.23 12 29.04±3.46 27.02±2.69 27.96±2.67 28.26±3.43 29.64±2.32 30.02±2.04 28.41±2.79 18 31.39±1.74 28.89±3.33 29.04±5.64 31.54±4.27 31.78±2.79 29.94±1.98 30.46±3.44 24 33.18±4.27 31.12±3.47 30.64±4.23 32.79±5.12 32.37±3.81 31.04±5.67 31.87±5.16 30 34.49±5.08 32.18±6.02 32.76±4.78 34.47±4.73 33.87±3.34 32.23±4.91 33.64±4.98

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 急性毒理實(shí)驗(yàn) 按照《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序與檢驗(yàn)方法規(guī)范》，KM系小鼠20只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)室室溫適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，采用最大劑量法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，劑量為35.8mL/kg bw(干物質(zhì)劑量為10.0g/kg bw)，24h內(nèi)灌胃3次，連續(xù)觀察14d。

1.2.2 護(hù)肝功能實(shí)驗(yàn) 小鼠隨機(jī)分為7組，每組12只，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)室室溫適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)期?？瞻讓?duì)照組、模型組每天灌胃給予生理鹽水20mL/kg，低劑量組灌胃劑量為8.35mL/kg，中劑量組灌胃劑量為 16.7mL/kg，高劑量組灌胃劑量為50.1mL/kg，對(duì)照組以中劑量組灌胃計(jì)量為依據(jù)灌胃純花生肽或純蒲公英提取物，花生肽對(duì)照組灌胃計(jì)量為3.33g/kg，蒲公英提取物對(duì)照組灌胃計(jì)量為0.167g/kg;連續(xù)灌胃30d，于末次給藥禁食16h后模型組及各劑量組一次性灌胃給予1%CCl480mg/kg bw，空白對(duì)照組灌胃食用大豆油。

1.2.3 檢測(cè)方法

1.2.3.1 血清中ALT、AST、LDH活力檢測(cè) 禁食24h后，眼眶靜脈取血，3000r/min離心15min分離血清，24h內(nèi)全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中ALT、AST、LDH活力。

1.2.3.2 肝臟組織中MDA、SOD及GSH-PX活力檢測(cè) 小鼠斷頸處死，取肝臟稱(chēng)重，加入生理鹽水勻漿，離心取上清。MDA活力采用TBA法測(cè)定，按測(cè)定試劑盒操作規(guī)程進(jìn)行。SOD活力采用比色法測(cè)定，按測(cè)定試劑盒操作規(guī)程進(jìn)行。GSH-PX活力采用比色法測(cè)定，按測(cè)定試劑盒操作規(guī)程進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒理實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)期間，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未見(jiàn)明顯中毒癥狀和死亡，依據(jù)急性毒性分級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，本復(fù)方花生肽口服液屬于實(shí)際無(wú)毒物質(zhì)。

2.2 護(hù)肝功能實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)期間，空白對(duì)照組、對(duì)照組、模型組以及各劑量組體重增重基本相同，組間無(wú)顯著差異(p＞0.05)。模型組 ALT、AST、LDH、MDA 含量都明顯高于空白對(duì)照組，且差異呈現(xiàn)極顯著性(p＜0.01);SOD及GSH-PX活性明顯低于空白對(duì)照組，且差異呈現(xiàn)極顯著性(p＜0.01)。表明急性肝損傷模型造模成功。

低劑量組ALT、LDH、MDA含量顯著低于模型組(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性顯著高于模型組(p＜0.05);中劑量組ALT、AST、LDH顯著低于模型組(p＜0.05)，MDA含量極顯著低于模型組(p＜0.01)，SOD及GSH-PX活性顯著高于模型組(p＜0.05);高劑量組 ALT、AST、LDH、MDA 含量極顯著低于模型組(p＜0.01)，SOD及GSH-PX活性顯著高于模型組(p＜0.05);蒲公英提取物組各項(xiàng)指標(biāo)與模型組比較無(wú)顯著性差異，與中劑量組比較顯示ALT、AST、LDH含量顯著高于中劑量組(p＜0.05)，MDA含量極顯著高于中劑量組(p＜0.01)，SOD及GSHPX活性顯著低于中劑量組(p＜0.05);花生肽組ALT、LDH、MDA含量顯著低于模型組(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性顯著高于模型組(p＜0.05);與中劑量組比較顯示ALT、AST、LDH、MDA含量均顯著高于中劑量組組(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性顯著低于中劑量組(p＜0.05)。

復(fù)方花生肽口服液中、高2個(gè)劑量組均能抑制CCl4致小鼠急性肝損傷血清中ALT、AST、LDH升高，降低肝臟中MDA含量，提高肝臟中SOD及GSH-PX活性，對(duì)CCl4所致肝損傷有一定輔助保護(hù)作用。蒲公英提取物在此灌胃劑量條件下輔助保護(hù)肝臟損傷作用有限，花生肽組能有效降低急性肝損傷小鼠血清中ALT、AST、LDH含量，降低肝臟中MDA含量，提高肝組織中SOD及GSH-PX活性，對(duì)肝損傷有一定的保護(hù)作用，但與中劑量組相比具有顯著性差異(p＜0.05)。口服液中劑量組對(duì)CCl4所致肝損傷的輔助保護(hù)作用優(yōu)于同劑量的單純蒲公英提取物及花生肽。

3 結(jié)論

CCl4經(jīng)肝微粒體色素P450激活后生成CCl3，CCl3可攻擊肝細(xì)胞膜上磷脂分子，引起脂質(zhì)過(guò)氧化，或與肝微粒體脂質(zhì)和蛋白質(zhì)發(fā)生共價(jià)結(jié)合，損傷肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性，使胞漿內(nèi)可溶性酶如轉(zhuǎn)氨酶(AST、ALT)、乳酸脫氫酶(LDH)滲入血液中，導(dǎo)致相關(guān)酶活性降低，能量產(chǎn)生減少，影響細(xì)胞呼吸，造成細(xì)胞氣球樣變和壞死［11］。

表2 小鼠血清及肝臟組織生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果(±s)Table 2 The biochemical results of serum and liver tissue of mice(±s)

表2 小鼠血清及肝臟組織生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果(±s)Table 2 The biochemical results of serum and liver tissue of mice(±s)

注:Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01與空白組比較;*p＜0.05，＊＊p＜0.01與模型組比較;▲p＜0.05，▲▲p＜0.01與中劑量組比較。

檢測(cè)項(xiàng)目 空白對(duì)照組 模型組 低劑量組 中劑量組ALT(U/L) 6.08±1.18 367.36±27.35ΔΔ 191.37±19.97* 87.63±19.57*AST(U/L) 7.81±2.83 401.33±33.94ΔΔ 223.17±22.74 103.26±19.87*LDH(U/L) 7492.45±791.83 14974.62±1094.73ΔΔ 12914.65±733.48* 12163.59±783.64*MDA(mol/mg) 4.22±1.95 8.39±1.19ΔΔ 6.56±1.18* 6.11±0.19＊＊SOD(U/mg) 4.45±0.15 1.83±0.24ΔΔ 2.21±0.24* 2.35±0.29*GSH-PX(mol·L-1·mg-1) 88.57 ±7.11 69.78 ±5.97ΔΔ 79.53 ±6.35* 81.75 ±6.32*檢測(cè)項(xiàng)目 高劑量組 蒲公英提取物組 花生肽組ALT(U/L) 47.13±8.57＊＊ 369.57±30.13▲ 174.59±16.32*▲AST(U/L) 71.29±11.78＊＊ 389.35±34.71▲ 190.63±18.64▲LDH(U/L) 10857±658.19＊＊ 14816±968.54▲ 12891±762.53* ▲MDA(mol/mg) 5.33±0.13＊＊ 8.27±1.63▲▲ 6.46±0.74* ▲SOD(U/mg) 2.43±0.19* 1.79±0.19▲ 2.26±0.18* ▲GSH-PX(mol·L-1·mg-1) 82.08 ±4.89* 70 ±6.07▲ 80.06 ±5.27*▲

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方花生肽口服液中、高2個(gè)劑量組均能抑制CCl4致小鼠急性肝損傷模型血清中ALT、AST、LDH升高，降低肝臟中MDA含量，提高肝臟中SOD及GSH-PX活性，對(duì)CCl4所致肝損傷有一定輔助保護(hù)作用。且在劑量相同的條件下，復(fù)方花生肽口服液的輔助護(hù)肝功能優(yōu)于單純的花生肽及蒲公英提取物。提示復(fù)方花生肽口服液對(duì)于肝臟具有較好的保護(hù)作用。同時(shí)急性毒理實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方花生肽口服液屬于實(shí)際無(wú)毒物質(zhì)。

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