茉莉花中黃酮化合物的超聲提取與測定

楊莉莉，侯冬巖，回瑞華

(1．遼寧師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，遼寧大連116029;2．鞍山師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，遼寧鞍山114007)

茉莉，木犀科素馨屬植物，是一種聞名世界的香料植物．茉莉主要含有揮發(fā)油、脂肪酸、苷類、苯丙素類、三萜類、生物堿、黃酮苷類等化學(xué)成分［1］．黃酮類化合物是優(yōu)良的活性氧清除劑和脂質(zhì)抗氧化劑，已成為國內(nèi)外天然藥物和功能食品開發(fā)研究的熱點(diǎn)［2－3］．相關(guān)藥理和臨床試驗(yàn)證實(shí)，黃酮類化合物具有廣泛的藥理功能，如不少治療冠心病有效的中草藥或活血化瘀類中藥中均含有黃酮類化合物，蘆丁(rutin)、槲皮素(quercetin)、葛根素(puerarin)、人工合成的立可定(recordin)等均有明顯的擴(kuò)冠作用，并己用于臨床;染料木素(genistein)、金雀花異黃酮(5，7-dihydroxy-4’-methoxy-isoflavone)、大豆甙元(daidzein)等均有雌性激素作用［4－5］，還有許多黃酮類化合物被證明有抗癌和抗HIV病毒活性［6－7］．由于其具有多樣的生物活性和藥理功能，而且毒性較低，因此，黃酮類物質(zhì)備受重視，其提取工藝的研究就顯得頗為重要［8］．本文針對其黃酮類化合物，采用超聲波法從干茉莉花中提取黃酮類化合物，并得出最佳提取條件，用紫外光譜法測定黃酮化合物的含量．旨在促進(jìn)茉莉花資源能夠得到更好的開發(fā)和利用．

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

1．1．1 主要儀器 UV-036紫外分光光度計(jì)(美國Varian公司);RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮盛華儀器廠);HH-2電子恒溫水浴鍋(深圳天南海北實(shí)業(yè)有限公司);KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);AL 204電子天平(梅特勒-托利多公司(上海)有限公司);臺(tái)式離心機(jī)-80-2B(上海安亭科學(xué)儀器廠);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪予華儀器廠)．

1．1．2 試劑 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品;甲醇(分析純，天津化學(xué)試劑有限公司);無水乙醇、正己烷、乙酸乙酯、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉(均為分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)．

1．1．3 樣品處理 干茉莉花，經(jīng)研磨后備用．

1．2 溶液的制備

1．2．1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 精密稱取蘆丁對照品0．020 g，加入60%乙醇溶解并稀釋至25 mL容量瓶中，得0．8 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液．

1．2．2 樣品溶液的制備 稱量干茉莉花粉末1．00 g，置于錐形瓶中，加入25 mL體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇，30℃水浴中超聲波提取50 min，抽濾．濾渣以同法提取50 min后抽濾，2次濾液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至7 mL，將濃縮液離心10 min，得樣品液．

1．3 實(shí)驗(yàn)方法

取1．2．1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液或1．2．2樣品溶液一定量，加5%亞硝酸鈉溶液0．3 mL，搖勻，靜置4 min，加10%硝酸鋁溶液0．3 mL，搖勻，靜置4 min，再加4%氫氧化鈉溶液4．0 mL，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置10 min．以試劑空白為參比，于510 nm處測吸光度．

1．4 吸收曲線的繪制及測定波長的確定

按1．3實(shí)驗(yàn)方法，在400～800 nm范圍內(nèi)掃描標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，結(jié)果如圖1，2．

圖1 蘆丁標(biāo)品紫外吸收光譜圖

圖2 茉莉花樣品液紫外吸收光譜圖

由上可知，超聲波法提取茉莉中的總黃酮可用蘆丁做黃酮標(biāo)準(zhǔn)品，測定波長為510 nm．

1．5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別取1．2．1 制備的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0．25，0．50，0．60，0．70，0．80，0．90，1．00，1．10 mL，置于 10 mL 容量瓶中，按1．3實(shí)驗(yàn)方法，結(jié)果如表1和圖3所示．

表1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

以蘆丁質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3所示．

圖3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

求得吸光度A與蘆丁質(zhì)量濃度C關(guān)系的線性回歸方程為:A=0．956 1C －0．0051，相關(guān)系數(shù)r=0．999 0，說明對照品在0．20～0．88 mg/mL范圍內(nèi)，A與濃度C呈良好線性關(guān)系，可按標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析．

2 結(jié)果與分析

2．1 影響茉莉花中總黃酮提取率的單因素實(shí)驗(yàn)

2．1．1 不同溶劑對黃酮提取率的影響［9］分別稱取4份1 g茉莉花粉末樣品，分別以25 mL甲醇、乙醇、正己烷、和乙酸乙酯于錐形瓶中，在30℃的水浴中超聲提取50 min，抽濾．濾渣以同法提取50 min后抽濾，2次濾液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濾液，濃縮液離心10 min，得到4份樣品液．從中各取0．1 mL置于10 mL容量瓶中，按1．3實(shí)驗(yàn)方法，結(jié)果見表2．

表2 提取溶劑對提取率的影響

由表2中可看出，用乙醇作溶劑時(shí)，吸光度為最大，提取率最高，所以選擇乙醇做提取劑．

2．1．2 物料比對黃酮提取率的影響 分別稱取4份1 g茉莉花粉 末 樣品，物料比分別為1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30，1∶35，乙醇做溶劑，其它實(shí)驗(yàn)條件同 2．1．1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖 4．

圖4 物料比對黃酮提取率的影響

結(jié)果表明，在超聲作用下，溶劑量的適當(dāng)增大有利于黃酮提取率的提高，但是當(dāng)物料比超過1∶25，隨著溶劑量的增多，黃酮提取率卻下降．因此，應(yīng)選擇合適的物料比，本實(shí)驗(yàn)取物料比為1∶25．

2．1．3 乙醇濃度對黃酮提取率的影響 分別稱取5份1 g研磨后的茉莉花粉末樣品，分別以25 mL60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、無水乙醇為溶劑于錐形瓶中，其它實(shí)驗(yàn)方法同2．1．2，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖5．

由結(jié)果可知80%乙醇的提取率最高，所以選擇80%乙醇作為提取溶劑．2．1．4 超聲提取時(shí)間對黃酮提取率的影響 超聲提取時(shí)間分別為10，20，30，40，50 min，1 h，80%乙醇做溶劑，物料比1∶25，其它實(shí)驗(yàn)方法同2．1．3，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖6．

圖5 乙醇濃度對黃酮提取率的影響

圖6 超聲提取時(shí)間影響黃酮提取率

結(jié)果表明，適量增加提取時(shí)間有利于黃酮提取率的提高，但是當(dāng)提取時(shí)間超過50 min時(shí)，隨著提取時(shí)間的增加，黃酮提取率卻下降．因此，本實(shí)驗(yàn)取超聲提取時(shí)間為50 min．

綜上所述，茉莉花中黃酮的最佳提取條件為物料比為1∶25，80%乙醇做溶劑，超聲提取時(shí)間為50 min．

2．2 方法精密度

移取1．2．1中0．6 mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1．3實(shí)驗(yàn)方法，做9次，測定其吸光度，求得標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果見表3．

表3 方法精密度

2．3 方法回收率

取經(jīng) 1．2．2 處理后樣品儲(chǔ)備液 0．1 mL3 份，分別加入經(jīng)1．2．1 處理后蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 0．1，0．2，0．3 mL按1．3方法操作，測定吸光度，求得該方法的回收率，結(jié)果見表4．

表4 方法回收率

可以看出，此方法的回收率為98% ～100%，變異系數(shù)0．015%，方法的準(zhǔn)確度與精密度均較高．

2．4 方法穩(wěn)定性

取1．2．2制備的樣品儲(chǔ)備液適量，按1．3實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明:樣品放置20 min，測得其吸光度值基本不變．

2．5 茉莉花樣品中總黃酮含量測定

按確定的最佳提取條件制備樣品液．從樣品溶液中，準(zhǔn)確吸取0．1 mL于10 mL容量瓶中，按1．3實(shí)驗(yàn)方法，平行測定3次，其吸光度見表5．

表5 茉莉花樣品中黃酮的測定

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，超聲波提取方法工藝簡單，可以達(dá)到省時(shí)、高效、節(jié)能、無污染的目的，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景［9］．本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，茉莉花中含有較為豐富的黃酮，與其它花類相比較，茉莉花中黃酮含量大于合歡花［10］、雞冠花［11］，金銀花［12］、蒲公英花［13］、沙棗花［14］，佩蘭［15］、萬壽菊［16］，因此茉莉花具有廣泛開發(fā)和利用價(jià)值，值得深入研究．

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