天津地區(qū)番茄病毒病發(fā)生情況調(diào)查及其毒源ELISA檢測(cè)

王勇　高葦　張春祥

摘 要：對(duì)采自天津5個(gè)區(qū)縣的255份番茄樣品進(jìn)行了雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（DAS-ELISA）檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明，在這255份樣品中，至少217份感染了所檢測(cè)病毒，其中，感染番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus， TYLCV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus， CMV）、煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus， TMV）、番茄花葉病毒（Tomato mosaic virus， ToMV）、蠶豆萎蔫病毒1、2號(hào)（Broad bean wilt virus 1、2， BBWV-1、2）、番茄斑萎病毒（TSWV）的樣品分別為53.33%，53.33%，20.39%，14.12%，9.41%，0.39%。在檢測(cè)呈陽(yáng)性的217份樣品中病毒單獨(dú)侵染率為32.15%，復(fù)合侵染率為52.94%，這些數(shù)據(jù)表明在番茄上病毒復(fù)合侵染現(xiàn)象相當(dāng)嚴(yán)重，其中受2種病毒復(fù)合侵染率高達(dá)40.39%，而受3種病毒復(fù)合侵染率達(dá)12.55%。

關(guān)鍵詞：番茄病毒病；發(fā)病情況；ELISA 檢測(cè)

中圖分類號(hào)：S436.412 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.12.001

番茄是一種具有高經(jīng)濟(jì)價(jià)值、適于廣泛栽培的作物，由于耕作栽培制度、品種變化等因素的影響，番茄的種植及病蟲害防治中仍存在著許多問(wèn)題，尤其是難于防治的病毒病。該病在我國(guó)南北種植區(qū)發(fā)生普遍，危害嚴(yán)重[1]。天津地區(qū)番茄病毒病的發(fā)生程度日趨嚴(yán)重，在一般年份其田間發(fā)病率均在25%以上，而病毒病流行年份部分地塊發(fā)病率可達(dá)100%，番茄病毒病不僅造成夏秋季番茄種植面積嚴(yán)重下降，同時(shí)極大地降低了番茄產(chǎn)量和品質(zhì)，已成為威脅夏秋季番茄生產(chǎn)的首要病害。目前國(guó)際上已報(bào)道的為害番茄的病毒達(dá)30余種[2]，我國(guó)先后檢測(cè)出13種病毒[3-7]，以往研究明確了天津地區(qū)番茄病毒主要毒源種類為TMV（煙草花葉病毒）、CMV（黃瓜花葉病毒）和TYLCV（番茄黃花曲葉病毒）[7-8]。

為了解天津地區(qū)番茄上的病毒種類及其在番茄上的危害情況，為開(kāi)展番茄病毒病的防治提供科學(xué)依據(jù)，筆者利用DAS-ELISA 技術(shù)對(duì)采自天津5個(gè)區(qū)縣種植區(qū)的番茄病毒病樣品，進(jìn)行了針對(duì)6種茄果類蔬菜常見(jiàn)病毒的血清學(xué)檢測(cè)，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增TYLCV番茄分離物CP蛋白基因，并進(jìn)行了序列變異性分析。

1 材料和方法

1.1 樣品采集

2013年4—12月在天津市武清、西青、靜海、寧河、北辰5個(gè)區(qū)縣蔬菜田調(diào)查發(fā)病情況，采集典型病毒病癥狀的番茄葉片、嫩梢或莖稈樣品，取樣時(shí)對(duì)所采集的番茄樣品進(jìn)行統(tǒng)一編號(hào)、照相、癥狀記載，將所采集的植物樣品分別裝入標(biāo)記自封袋（20 cm×25 cm）中，放入-20 ℃的冰箱中冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 準(zhǔn)備樣品

樣品采用石英砂、研缽進(jìn)行研磨，研磨后將得到的汁液用提取緩沖液1∶10稀釋，4 000 r·min-1離心5 min，取上清液備用。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)抗原及抗體

番茄TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、BBWV-2、TSWV的酶免疫試劑盒購(gòu)自AC diagnostics公司，包含標(biāo)準(zhǔn)抗原和堿性磷酸酶標(biāo)記的兔多克隆抗體。

1.4 計(jì)算結(jié)果

采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀ELx800測(cè)定405 nm的光吸收值（OD），記錄檢測(cè)結(jié)果。陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)（P/N）：（檢測(cè)樣品OD405/陰性對(duì)照OD405） ≥2.00為陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 番茄病毒病的發(fā)生情況

2013年的調(diào)查顯示，天津地區(qū)番茄病毒病目前在天津武清區(qū)南蔡鎮(zhèn)、河北屯鎮(zhèn)、東蒲洼鎮(zhèn)、大良鎮(zhèn)，西青區(qū)青凝侯鎮(zhèn)、辛口鎮(zhèn)、柳青鎮(zhèn)，北辰區(qū)雙口鎮(zhèn)、青光鎮(zhèn)、小淀鎮(zhèn)，靜?？h獨(dú)流鎮(zhèn)、良王莊鎮(zhèn)、大張屯鄉(xiāng)、東雙塘鄉(xiāng)，寧河縣造甲城鎮(zhèn)、潘莊鎮(zhèn)、俵口鄉(xiāng)等蔬菜主產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生（表1），發(fā)病癥狀主要以黃化曲葉、蕨葉、花葉為主，單獨(dú)或混合發(fā)生，一般發(fā)病率在5%～20%，嚴(yán)重的達(dá)80%以上。

其中蕨葉、花葉型病毒病周年發(fā)生，設(shè)施和露地栽培中均較為普遍。而番茄黃化曲葉病毒病，自2009年天津初次發(fā)生以來(lái)，在天津地區(qū)已經(jīng)進(jìn)入了危險(xiǎn)高發(fā)期和頻發(fā)期。目前該病在天津武清區(qū)、西青區(qū)、北辰區(qū)、靜海縣、寧河縣等蔬菜主產(chǎn)地相繼發(fā)生。經(jīng)調(diào)查，其發(fā)生特點(diǎn)是：（1）番茄黃化曲葉病毒病發(fā)生受環(huán)境條件影響較為顯著，傳毒介體煙粉虱的爆發(fā)、高溫、強(qiáng)光等均能導(dǎo)致該病害的嚴(yán)重發(fā)生；（2）該病主要以棚室夏秋季栽培番茄受害為主，目前露地番茄黃化曲葉型癥狀較少；（3）以點(diǎn)片發(fā)生為主，但發(fā)生點(diǎn)越來(lái)越多，面積越來(lái)越大。從全市范圍來(lái)看，該病已經(jīng)遍及全市各主要蔬菜產(chǎn)區(qū)，有集中連片發(fā)生的趨勢(shì)。

2.2 番茄樣品的病毒種類分析

2.2.1 番茄主要病毒種類 在255份番茄樣品中，有217份檢測(cè)到TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、2和TSWV等6種病毒中的1種或多種。如表2所示，以TYLCV和CMV的檢出率最高，均為53.33%；除此之外，ToMV、TMV和BBWV-1、2的檢出率次之，分別為20.39%，14.12%和9.41%；TSWV的檢出率最低，僅為0.39%。TYLCV和CMV是武清、北辰、西青地區(qū)番茄上的優(yōu)勢(shì)毒源，而靜海和寧河地區(qū)番茄上的優(yōu)勢(shì)毒源則是ToMV、TYLCV和CMV。西青樣品中未檢出ToMV，對(duì)于TSWV除在北辰有檢出外，其他地區(qū)樣品中均未有檢出。

2.2.2 病毒復(fù)合侵染 對(duì)采集的255份番茄樣品進(jìn)行6種主要毒源的ELISA檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表3～表6，其中38個(gè)番茄樣品呈陰性反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)其皆分布在西青、靜海、武清等3個(gè)區(qū)縣，陰性檢出率分別為26.92%，25.00%，14.71%；而北辰、寧河兩地陰性檢出率均為0，說(shuō)明在這兩個(gè)地區(qū)所采集的番茄樣品均可檢出該6種病毒中的1種或多種。

在所采集的217個(gè)陽(yáng)性樣品中，有82份樣品僅受一種病毒侵染，病毒單獨(dú)侵染率為32.15%，除TSWV外其余5種病毒均檢測(cè)獲得。其中以TYLCV分布最廣，在調(diào)查的5個(gè)區(qū)縣均檢測(cè)獲得單株侵染樣品。武清、靜海番茄樣品單株侵染率較高，以TYLCV、CMV和TMV等為主；西青、寧河次之；北辰最低，僅有TYLCV檢出單株病毒侵染，檢出率為4.26%。

經(jīng)檢測(cè)，所采集番茄樣品病毒復(fù)合侵染以兩種或3種病毒為主，復(fù)合侵染率為52.94%，表明在番茄上病毒復(fù)合侵染現(xiàn)象相當(dāng)嚴(yán)重，不同地區(qū)復(fù)合侵染類型有較大差異，受2種病毒復(fù)合侵染率為40.39%，受3種病毒復(fù)合侵染率為12.55%。

其中兩種病毒復(fù)合侵染，北辰區(qū)陽(yáng)性檢出率較高，TYLCV+CMV檢出率達(dá)59.57%，其余為CMV分別與TMV、BBWV-1、2和TSWV的復(fù)合侵染，檢出率分別為4.26%，4.26%，2.13%；西青和寧河兩種病毒復(fù)合侵染檢出率中等，其中西青主要為TYLCV、CMV和TMV等3種病毒復(fù)合侵染，而寧河主要為ToMV分別與TYLCV、CMV、TMV的復(fù)合侵染；武清區(qū)主要為TYLCV+CMV復(fù)合侵染，檢出率達(dá)32.35%；靜海縣兩種病毒復(fù)合侵染較少，主要為TYLCV分別與CMV、ToMV復(fù)合，以及CMV與TMV復(fù)合，檢出率分別為14.29%，3.57%，3.57%。

由3種病毒復(fù)合侵染的檢出結(jié)果可知，北辰區(qū)陽(yáng)性檢出率最高，其復(fù)合侵染類型為TYLCV+CMV+BBWV-1、2，TYLCV+CMV+ToMV，TYLCV+CMV+TMV，檢出率分別為17.02%，4.26%，4.26%；寧河次之，其復(fù)合侵染類型為TYLCV+CMV+ToMV、TYLCV+CMV+TMV、CMV+TMV+BBWV-1、2，檢出率均為6.25%；靜海、武清較少，復(fù)合侵染類型以TYLCV+CMV+BBWV-1、2和TYLCV+CMV+ToMV為主；西青最少，3種病毒復(fù)合侵染類型只有TYLCV+CMV+BBWV-1、2，檢出率為3.85%。

由檢測(cè)結(jié)果可知，在135份復(fù)合侵染樣品中，有103份樣品受2種病毒復(fù)合侵染，其中TYLCV和CMV 2種病毒復(fù)合是最主要的侵染類型，占復(fù)合侵染檢出類型一半以上，檢出率達(dá)27.45%；TYLCV和ToMV、CMV和TMV等2種病毒復(fù)合侵染次之，檢出率分別為3.92%和3.14%；TYLCV和TMV、CMV和ToMV、TMV和ToMV、CMV和BBWV-1、2、CMV和TSWV等較少。另有32份樣品受3種病毒復(fù)合侵染，以TYLCV+CMV+BBWV-1、2、TYLCV+CMV+ToMV病毒復(fù)合侵染類型較多，檢出率分別為5.49%和3.14%，其余則檢出較少。

3 結(jié)論與討論

針對(duì)天津蔬菜主產(chǎn)區(qū)病毒病發(fā)生情況調(diào)查，本地區(qū)番茄病毒病普遍發(fā)生，發(fā)病癥狀主要以黃化曲葉、蕨葉、花葉為主，單獨(dú)或混合發(fā)生，一般發(fā)病率在5%～20%，嚴(yán)重的達(dá)80%以上。其中，番茄黃化曲葉病毒病主要以棚室夏秋季栽培番茄受害為主，目前已進(jìn)入危險(xiǎn)高發(fā)期和頻發(fā)期，而蕨葉、花葉型番茄病毒病周年發(fā)生，設(shè)施和露地栽培均較為普遍。

針對(duì)TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、2及TSWV等茄果類蔬菜上常見(jiàn)病毒，對(duì)于天津地區(qū)采集的255份番茄病毒病樣品進(jìn)行DAS-ELISA檢測(cè)。結(jié)果表明，在這255份樣品中，至少217份感染了所檢測(cè)病毒，其中，TYLCV和CMV是天津地區(qū)番茄上的優(yōu)勢(shì)毒源，檢出率均為53.33%。在檢測(cè)樣品中，病毒單獨(dú)侵染率為32.15%，TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、2等5種病毒均發(fā)現(xiàn)有單獨(dú)侵染，且以TYLCV為主。病毒復(fù)合侵染率為52.94%，有52.94%的樣品檢測(cè)到2種或3種病毒的復(fù)合侵染，其中受2種病毒復(fù)合侵染率高達(dá)40.39%，而受3種病毒復(fù)合侵染率達(dá)12.55%。田間病毒侵染的情況通常比較復(fù)雜，一種可能是自然界確實(shí)存在如此嚴(yán)重的復(fù)合侵染現(xiàn)象；另一方面，檢測(cè)過(guò)程中可能存在的假陽(yáng)性也是復(fù)合侵染率偏高的一個(gè)重要原因。鑒于病毒在番茄上的復(fù)合侵染現(xiàn)象很嚴(yán)重，因此，在制定病毒防治策略時(shí)，在以主要病毒防治為主的前提下，還應(yīng)兼顧其它病毒。

已有研究表明，番茄上的病毒種類很多[2-8]，由于本試驗(yàn)受到采集樣品數(shù)量及地域的限制，且僅對(duì) 6 種植物病毒進(jìn)行了檢測(cè)，因而無(wú)法涵蓋引起本地區(qū)番茄病毒病的所有毒源。此外，有38份樣品檢測(cè)呈陰性，但該樣品病毒病的癥狀明顯，不能排除感染其他種類病毒的可能，但這需進(jìn)一步的鑒定。

參考文獻(xiàn)：

[1] 楊寧. 設(shè)施番茄病毒病的發(fā)生規(guī)律及綜合防治技術(shù)[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， 2013（4）：143-144.

[2] Martelli G P， Quacquarelli A.The present status of tomato and pepper viruses [J]. Acta Horticulturae，1983，127：39-64.

[3]楊悅儉，馬忠翼，姚建明. 我國(guó)番茄病毒病主要毒源種類研究及抗病育種的進(jìn)展[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)， 1992（ 4）：183-185.

[4]李飛，吳青君，徐寶云，等. 北京地區(qū)發(fā)現(xiàn)番茄斑萎病毒[J].植物保護(hù)，2012，38（6）：186-188.

[5] Xue Chaoyang，Zhou Xueping，Qing Ling， et al. Characterization of tomato mosaic virus Chinese isolate and its nucleotide sequence of the 30kD and the coat protein genes[J]. Journal of Zhejiang Agricultural University，1998，24（6）：602.

[6]蘇海娣，梁學(xué)超，崔百明，等. 新疆加工番茄上一種類似南方番茄病毒的分子檢測(cè)[J].石河子大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2013，31（3）：271-275.

[7] 金鳳媚，薛俊，郟艷紅，等. 天津地區(qū)番茄黃化曲葉病毒DNA-A的克隆和序列分析[J].農(nóng)學(xué)報(bào)， 2011， 26（1）：58-62.

[8] 鄭燕堂，曹為玉，趙萬(wàn)英，等.天津近郊番茄病毒類型的研究[J].病毒學(xué)雜志，1990（1）：78-81.

在所采集的217個(gè)陽(yáng)性樣品中，有82份樣品僅受一種病毒侵染，病毒單獨(dú)侵染率為32.15%，除TSWV外其余5種病毒均檢測(cè)獲得。其中以TYLCV分布最廣，在調(diào)查的5個(gè)區(qū)縣均檢測(cè)獲得單株侵染樣品。武清、靜海番茄樣品單株侵染率較高，以TYLCV、CMV和TMV等為主；西青、寧河次之；北辰最低，僅有TYLCV檢出單株病毒侵染，檢出率為4.26%。

經(jīng)檢測(cè)，所采集番茄樣品病毒復(fù)合侵染以兩種或3種病毒為主，復(fù)合侵染率為52.94%，表明在番茄上病毒復(fù)合侵染現(xiàn)象相當(dāng)嚴(yán)重，不同地區(qū)復(fù)合侵染類型有較大差異，受2種病毒復(fù)合侵染率為40.39%，受3種病毒復(fù)合侵染率為12.55%。

其中兩種病毒復(fù)合侵染，北辰區(qū)陽(yáng)性檢出率較高，TYLCV+CMV檢出率達(dá)59.57%，其余為CMV分別與TMV、BBWV-1、2和TSWV的復(fù)合侵染，檢出率分別為4.26%，4.26%，2.13%；西青和寧河兩種病毒復(fù)合侵染檢出率中等，其中西青主要為TYLCV、CMV和TMV等3種病毒復(fù)合侵染，而寧河主要為ToMV分別與TYLCV、CMV、TMV的復(fù)合侵染；武清區(qū)主要為TYLCV+CMV復(fù)合侵染，檢出率達(dá)32.35%；靜?？h兩種病毒復(fù)合侵染較少，主要為TYLCV分別與CMV、ToMV復(fù)合，以及CMV與TMV復(fù)合，檢出率分別為14.29%，3.57%，3.57%。

由3種病毒復(fù)合侵染的檢出結(jié)果可知，北辰區(qū)陽(yáng)性檢出率最高，其復(fù)合侵染類型為TYLCV+CMV+BBWV-1、2，TYLCV+CMV+ToMV，TYLCV+CMV+TMV，檢出率分別為17.02%，4.26%，4.26%；寧河次之，其復(fù)合侵染類型為TYLCV+CMV+ToMV、TYLCV+CMV+TMV、CMV+TMV+BBWV-1、2，檢出率均為6.25%；靜海、武清較少，復(fù)合侵染類型以TYLCV+CMV+BBWV-1、2和TYLCV+CMV+ToMV為主；西青最少，3種病毒復(fù)合侵染類型只有TYLCV+CMV+BBWV-1、2，檢出率為3.85%。

由檢測(cè)結(jié)果可知，在135份復(fù)合侵染樣品中，有103份樣品受2種病毒復(fù)合侵染，其中TYLCV和CMV 2種病毒復(fù)合是最主要的侵染類型，占復(fù)合侵染檢出類型一半以上，檢出率達(dá)27.45%；TYLCV和ToMV、CMV和TMV等2種病毒復(fù)合侵染次之，檢出率分別為3.92%和3.14%；TYLCV和TMV、CMV和ToMV、TMV和ToMV、CMV和BBWV-1、2、CMV和TSWV等較少。另有32份樣品受3種病毒復(fù)合侵染，以TYLCV+CMV+BBWV-1、2、TYLCV+CMV+ToMV病毒復(fù)合侵染類型較多，檢出率分別為5.49%和3.14%，其余則檢出較少。

3 結(jié)論與討論

針對(duì)天津蔬菜主產(chǎn)區(qū)病毒病發(fā)生情況調(diào)查，本地區(qū)番茄病毒病普遍發(fā)生，發(fā)病癥狀主要以黃化曲葉、蕨葉、花葉為主，單獨(dú)或混合發(fā)生，一般發(fā)病率在5%～20%，嚴(yán)重的達(dá)80%以上。其中，番茄黃化曲葉病毒病主要以棚室夏秋季栽培番茄受害為主，目前已進(jìn)入危險(xiǎn)高發(fā)期和頻發(fā)期，而蕨葉、花葉型番茄病毒病周年發(fā)生，設(shè)施和露地栽培均較為普遍。

針對(duì)TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、2及TSWV等茄果類蔬菜上常見(jiàn)病毒，對(duì)于天津地區(qū)采集的255份番茄病毒病樣品進(jìn)行DAS-ELISA檢測(cè)。結(jié)果表明，在這255份樣品中，至少217份感染了所檢測(cè)病毒，其中，TYLCV和CMV是天津地區(qū)番茄上的優(yōu)勢(shì)毒源，檢出率均為53.33%。在檢測(cè)樣品中，病毒單獨(dú)侵染率為32.15%，TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、2等5種病毒均發(fā)現(xiàn)有單獨(dú)侵染，且以TYLCV為主。病毒復(fù)合侵染率為52.94%，有52.94%的樣品檢測(cè)到2種或3種病毒的復(fù)合侵染，其中受2種病毒復(fù)合侵染率高達(dá)40.39%，而受3種病毒復(fù)合侵染率達(dá)12.55%。田間病毒侵染的情況通常比較復(fù)雜，一種可能是自然界確實(shí)存在如此嚴(yán)重的復(fù)合侵染現(xiàn)象；另一方面，檢測(cè)過(guò)程中可能存在的假陽(yáng)性也是復(fù)合侵染率偏高的一個(gè)重要原因。鑒于病毒在番茄上的復(fù)合侵染現(xiàn)象很嚴(yán)重，因此，在制定病毒防治策略時(shí)，在以主要病毒防治為主的前提下，還應(yīng)兼顧其它病毒。

已有研究表明，番茄上的病毒種類很多[2-8]，由于本試驗(yàn)受到采集樣品數(shù)量及地域的限制，且僅對(duì) 6 種植物病毒進(jìn)行了檢測(cè)，因而無(wú)法涵蓋引起本地區(qū)番茄病毒病的所有毒源。此外，有38份樣品檢測(cè)呈陰性，但該樣品病毒病的癥狀明顯，不能排除感染其他種類病毒的可能，但這需進(jìn)一步的鑒定。

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[2] Martelli G P， Quacquarelli A.The present status of tomato and pepper viruses [J]. Acta Horticulturae，1983，127：39-64.

[3]楊悅儉，馬忠翼，姚建明. 我國(guó)番茄病毒病主要毒源種類研究及抗病育種的進(jìn)展[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)， 1992（ 4）：183-185.

[4]李飛，吳青君，徐寶云，等. 北京地區(qū)發(fā)現(xiàn)番茄斑萎病毒[J].植物保護(hù)，2012，38（6）：186-188.

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[6]蘇海娣，梁學(xué)超，崔百明，等. 新疆加工番茄上一種類似南方番茄病毒的分子檢測(cè)[J].石河子大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2013，31（3）：271-275.

[7] 金鳳媚，薛俊，郟艷紅，等. 天津地區(qū)番茄黃化曲葉病毒DNA-A的克隆和序列分析[J].農(nóng)學(xué)報(bào)， 2011， 26（1）：58-62.

[8] 鄭燕堂，曹為玉，趙萬(wàn)英，等.天津近郊番茄病毒類型的研究[J].病毒學(xué)雜志，1990（1）：78-81.

在所采集的217個(gè)陽(yáng)性樣品中，有82份樣品僅受一種病毒侵染，病毒單獨(dú)侵染率為32.15%，除TSWV外其余5種病毒均檢測(cè)獲得。其中以TYLCV分布最廣，在調(diào)查的5個(gè)區(qū)縣均檢測(cè)獲得單株侵染樣品。武清、靜海番茄樣品單株侵染率較高，以TYLCV、CMV和TMV等為主；西青、寧河次之；北辰最低，僅有TYLCV檢出單株病毒侵染，檢出率為4.26%。

經(jīng)檢測(cè)，所采集番茄樣品病毒復(fù)合侵染以兩種或3種病毒為主，復(fù)合侵染率為52.94%，表明在番茄上病毒復(fù)合侵染現(xiàn)象相當(dāng)嚴(yán)重，不同地區(qū)復(fù)合侵染類型有較大差異，受2種病毒復(fù)合侵染率為40.39%，受3種病毒復(fù)合侵染率為12.55%。

其中兩種病毒復(fù)合侵染，北辰區(qū)陽(yáng)性檢出率較高，TYLCV+CMV檢出率達(dá)59.57%，其余為CMV分別與TMV、BBWV-1、2和TSWV的復(fù)合侵染，檢出率分別為4.26%，4.26%，2.13%；西青和寧河兩種病毒復(fù)合侵染檢出率中等，其中西青主要為TYLCV、CMV和TMV等3種病毒復(fù)合侵染，而寧河主要為ToMV分別與TYLCV、CMV、TMV的復(fù)合侵染；武清區(qū)主要為TYLCV+CMV復(fù)合侵染，檢出率達(dá)32.35%；靜?？h兩種病毒復(fù)合侵染較少，主要為TYLCV分別與CMV、ToMV復(fù)合，以及CMV與TMV復(fù)合，檢出率分別為14.29%，3.57%，3.57%。

由3種病毒復(fù)合侵染的檢出結(jié)果可知，北辰區(qū)陽(yáng)性檢出率最高，其復(fù)合侵染類型為TYLCV+CMV+BBWV-1、2，TYLCV+CMV+ToMV，TYLCV+CMV+TMV，檢出率分別為17.02%，4.26%，4.26%；寧河次之，其復(fù)合侵染類型為TYLCV+CMV+ToMV、TYLCV+CMV+TMV、CMV+TMV+BBWV-1、2，檢出率均為6.25%；靜海、武清較少，復(fù)合侵染類型以TYLCV+CMV+BBWV-1、2和TYLCV+CMV+ToMV為主；西青最少，3種病毒復(fù)合侵染類型只有TYLCV+CMV+BBWV-1、2，檢出率為3.85%。

由檢測(cè)結(jié)果可知，在135份復(fù)合侵染樣品中，有103份樣品受2種病毒復(fù)合侵染，其中TYLCV和CMV 2種病毒復(fù)合是最主要的侵染類型，占復(fù)合侵染檢出類型一半以上，檢出率達(dá)27.45%；TYLCV和ToMV、CMV和TMV等2種病毒復(fù)合侵染次之，檢出率分別為3.92%和3.14%；TYLCV和TMV、CMV和ToMV、TMV和ToMV、CMV和BBWV-1、2、CMV和TSWV等較少。另有32份樣品受3種病毒復(fù)合侵染，以TYLCV+CMV+BBWV-1、2、TYLCV+CMV+ToMV病毒復(fù)合侵染類型較多，檢出率分別為5.49%和3.14%，其余則檢出較少。

3 結(jié)論與討論

針對(duì)天津蔬菜主產(chǎn)區(qū)病毒病發(fā)生情況調(diào)查，本地區(qū)番茄病毒病普遍發(fā)生，發(fā)病癥狀主要以黃化曲葉、蕨葉、花葉為主，單獨(dú)或混合發(fā)生，一般發(fā)病率在5%～20%，嚴(yán)重的達(dá)80%以上。其中，番茄黃化曲葉病毒病主要以棚室夏秋季栽培番茄受害為主，目前已進(jìn)入危險(xiǎn)高發(fā)期和頻發(fā)期，而蕨葉、花葉型番茄病毒病周年發(fā)生，設(shè)施和露地栽培均較為普遍。

針對(duì)TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、2及TSWV等茄果類蔬菜上常見(jiàn)病毒，對(duì)于天津地區(qū)采集的255份番茄病毒病樣品進(jìn)行DAS-ELISA檢測(cè)。結(jié)果表明，在這255份樣品中，至少217份感染了所檢測(cè)病毒，其中，TYLCV和CMV是天津地區(qū)番茄上的優(yōu)勢(shì)毒源，檢出率均為53.33%。在檢測(cè)樣品中，病毒單獨(dú)侵染率為32.15%，TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、2等5種病毒均發(fā)現(xiàn)有單獨(dú)侵染，且以TYLCV為主。病毒復(fù)合侵染率為52.94%，有52.94%的樣品檢測(cè)到2種或3種病毒的復(fù)合侵染，其中受2種病毒復(fù)合侵染率高達(dá)40.39%，而受3種病毒復(fù)合侵染率達(dá)12.55%。田間病毒侵染的情況通常比較復(fù)雜，一種可能是自然界確實(shí)存在如此嚴(yán)重的復(fù)合侵染現(xiàn)象；另一方面，檢測(cè)過(guò)程中可能存在的假陽(yáng)性也是復(fù)合侵染率偏高的一個(gè)重要原因。鑒于病毒在番茄上的復(fù)合侵染現(xiàn)象很嚴(yán)重，因此，在制定病毒防治策略時(shí)，在以主要病毒防治為主的前提下，還應(yīng)兼顧其它病毒。

已有研究表明，番茄上的病毒種類很多[2-8]，由于本試驗(yàn)受到采集樣品數(shù)量及地域的限制，且僅對(duì) 6 種植物病毒進(jìn)行了檢測(cè)，因而無(wú)法涵蓋引起本地區(qū)番茄病毒病的所有毒源。此外，有38份樣品檢測(cè)呈陰性，但該樣品病毒病的癥狀明顯，不能排除感染其他種類病毒的可能，但這需進(jìn)一步的鑒定。

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