nm23 和E-cadherin 在食管鱗癌中的表達及臨床意義

江 海 李 斌 魏遠(yuǎn)福 王 波

食管癌的浸潤轉(zhuǎn)移是影響術(shù)后患者預(yù)后的關(guān)鍵因素。nm23 是一種抑制腫瘤轉(zhuǎn)移基因，其主要通過促進細(xì)胞的分化、參與免疫防御，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖、分化和侵襲轉(zhuǎn)移［1］。E-cadherin 是一種細(xì)胞黏附分子，有研究表明E-cadherin 低表達與腫瘤細(xì)胞的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)［2］。

本研究采用免疫組織化學(xué)S-P 法檢測nm23 和E-cadherin蛋白的表達，探討其與食管鱗癌的發(fā)生、分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，從而進一步探討E-cadherin 蛋白與nm23 蛋白之間的相關(guān)性，為預(yù)測食管鱗癌的轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)。

1.材料與方法

1.1 材料 選取2010 年1 月～20012 年7 月期間在鄖陽醫(yī)學(xué)院附屬人民醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除且術(shù)前均未接受過放療、化療及免疫治療的食管癌標(biāo)本68 例，其中女性30 例，男性38例，年齡35～78 歲，中位年齡56.5 歲。低分化鱗癌14 例，中分化鱗癌29 例，高分化鱗癌25 例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌30例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌38 例;有纖維膜浸潤的鱗癌56 例，無纖維膜浸潤的鱗癌12 例。同時取距腫瘤5cm 的正常食管黏膜組織23 例作對照。

1.2 方法 選取的食管鱗癌組織和正常食管黏膜組織行常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，厚4μm，分別作HE 染色﹑免疫組化和陰性對照用。采用免疫組化技術(shù)(S-P 法)對各組標(biāo)本中的E-cadherin 和nm23 進行檢測，鼠抗人nm23 單克隆抗體、鼠抗人E-cadherin 單克隆抗體及鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，鼠抗人nm23 單克隆抗體和鼠抗人E-cadherin 單克隆抗體均采用微波修復(fù)抗原，操作步驟按說明書進行，用PBS 代替一抗作陰性對照，已知陽性片作陽性對照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 nm23 結(jié)果判定:根據(jù)參考文獻［3］nm23 蛋白陽性表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)和/或細(xì)胞膜上棕黃色顆?；驁F塊，結(jié)果以陽性細(xì)胞數(shù)所占百分比來表示，按照美國Sabina signiretti判斷標(biāo)準(zhǔn)，每張切片由兩名有經(jīng)驗的病理科醫(yī)生觀察10 個具有代表性的高倍視野，每個高倍視野記數(shù)200 個腫瘤細(xì)胞，按照鏡下陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分率綜合判斷，以腫瘤細(xì)胞中著色細(xì)胞的百分率來表示＜10%記為陰性(-)，＞25%記為陽性(+)。

1.3.2 E-cadherin 結(jié)果判定:根據(jù)參考文獻［4］的方法，以細(xì)胞膜呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。對每張切片隨機選取5個高倍視野，每個視野計數(shù)200 個細(xì)胞，共計1000 個，計數(shù)陽性細(xì)胞并計算其所占比例:陽性細(xì)胞＜25%，判定為陰性表達，陽性細(xì)胞＞25%，判定為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用χ2檢驗及配對χ2相關(guān)分析，t檢驗、方差分析(F 檢驗)，以a=0.05 為檢驗水準(zhǔn)，當(dāng)P ＜0.05 時表明在統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義，P ＞0.05 為差別無顯著性意義。統(tǒng)計工具應(yīng)用SAS6.12 統(tǒng)計軟件包。

2.結(jié)果

2.1 nm23 免疫組化檢測結(jié)果 免疫組化檢測結(jié)果顯示(表1):nm23 正常食管組織中和在食管鱗癌陽性表達率分別是93.3%(28/30)及75%(35/68)，兩組間具有顯著性差異(P ＜0.05)。nm23 在高、中及低分化食管鱗癌組織中陽性率分別為52%(13/25)，51.7%(15/29)和50%(7/14)，三組之間差異無顯著性意義(P ＞0.05)。nm23 在有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌組織中陽性表達率分別是52.7% (20/38)及36.7%(11/30)，兩組間具有顯著性差異(P ＜0.05)。nm23在食管鱗癌組織中有、無浸潤至纖維膜中的陽性表達率分別是75%(42/56)及41.7%(5/12)，兩組間具有顯著性差異(P ＜0.05)。

表1 nm23 在食管鱗狀細(xì)胞癌和正常食管黏膜組織中的表達

2.2 E-cadherin 免疫組化檢測結(jié)果 免疫組化檢測結(jié)果顯示(見表2):E-cadherin 蛋白在正常的食管鱗狀上皮組織中以基底層細(xì)胞和棘層細(xì)胞表達最強。E-cadherin 蛋白在食管鱗癌和正常食管組織中陽性表達率分別是69.1%(47/68)及100%(30/30)，兩組間具有顯著性差異(P ＜0.05)。E-cadherin 蛋白在高、中、低分化的癌組織的陽性表達率分別為84%(21/25)，72.4%(21/29)和51.1%(8/14)，結(jié)果顯示Ecadherin 蛋白在食管鱗癌組織的不同分化程度中的表達有明顯差異(P ＜0.05)。E-cadherin 蛋白在有、無淋巴轉(zhuǎn)移的癌組織中陽性表達率分別為57.9%(22/38)和80%(24/30)，二者的陽性表達率差別有顯著意義(P ＜0.05)。E-cadherin 蛋白在有、無纖維膜浸潤的食管鱗癌組織中的陽性表達率分別為71.4%(40/56)和66.7%(8/12)，二者的陽性表達率差別無顯著意義(P ＞0.05)。

2.3 nm23 與E-cadherin 的關(guān)系 食管癌組織中nm-23的表達與E-cadherin 的表達呈正相關(guān)(P ＜0.05，表3)，提示nm-23 與E-cadherin 在促進食管癌的分化，抑制食管癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移中，可能有正向調(diào)節(jié)的協(xié)同作用。

表2 E-Cadherin 在食管鱗狀細(xì)胞癌和正常食管黏膜組織中的表達

表3 nm23 和E-Cadherin 在食管鱗狀細(xì)胞癌中表達的相互關(guān)系

3.討論

1988 年美國國立癌癥研究所的steeg 等，應(yīng)用差異雜交(differential hybridization)等技術(shù)從小鼠黑色素瘤k-1735 細(xì)胞株中分離出腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23［5］。目前多研究表明，在乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、卵巢癌等腫瘤中nm23 的表達水平與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)密切［6，7］。Nm23 可能通過對腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白或基因的調(diào)控而抑制細(xì)胞的轉(zhuǎn)移［8］。同時也通過改變腫瘤細(xì)胞骨成分結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，從而抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［9］。

本研究研究發(fā)現(xiàn)，nm23 在食管鱗癌組織中的表達低于正常組織，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異，提示nm23 的低表達可能與食管癌的發(fā)生有關(guān)。nm23 在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的食管癌組織中的陽性表達率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示nm23 的低表達可能與食管鱗狀細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)。nm23 在無纖維膜浸潤的食管癌組織中的陽性表達率高于有纖維膜浸潤組，提示nm23 的低表達可能與食管鱗狀細(xì)胞癌的浸潤有關(guān)。其表明nm23 表達降低，機體對腫瘤細(xì)胞的抑制力減低，使其更易向周圍組織浸潤及轉(zhuǎn)移。

E-cadherin 是維持細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的完整性和極性的Ca2+依賴性跨膜糖蛋白。有研究表明，當(dāng)腫瘤細(xì)胞的E-鈣黏附素發(fā)生基因突變、轉(zhuǎn)錄受抑、啟動子區(qū)域GpG 高度甲基化或翻譯紊亂時，其功能發(fā)生障礙，而使腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲性生長，同時是腫瘤細(xì)胞分化程度降低及易脫離原發(fā)灶而發(fā)生局部或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［10］。本研究表明食管癌中存在明顯的E-cadherin 表達缺失或表達水平的降低(P ＜0.05)，從蛋白水平上證明了E-cadherin 基因的失活與食管癌的發(fā)生有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)伴無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織E-cadherin 蛋白的陽性表達率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P ＜0.05)，低分化的癌組織Ecadherin 蛋白的陽性表達率明顯低于高分化的癌組織(P ＜0.05)，這說明E-cadherin 表達的減少與食管鱗癌分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示食管鱗狀細(xì)胞癌組織中nm-23 的表達與E-cadherin 的表達呈正相關(guān)(P ＜0.05)，提示E-cadherin 與nm-23 在抑制食管癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移中，以及促進食管癌的分化中，可能有正向調(diào)節(jié)的協(xié)同作用，共同抑制食管鱗癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，兩者表達水平的增高可能共同抑制淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，但這并不能說明nm23 能夠促進E-cadherin 的表達，其具體作用機制目前尚不太清楚，nm-23 與E-cadherin 的關(guān)系還有待于進一步研究。

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