經(jīng)血寧顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的篩選

許子競(jìng) 唐艷秀 龐 國(guó)

（1.廣西金秀圣堂藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西 金秀 545700；2.廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西 南寧 530006）

經(jīng)血寧顆粒由白背葉、扶芳藤二味藥材經(jīng)加工制成的中藥制劑。白背葉為大戟科植物白背葉Mallotus apelta(Lour.)Muell-Arg.的干燥葉[1]，為廣西民間常用草藥，具有清熱、利濕、止痛、解毒，止血之功效，用于淋濁、胃痛、口瘡、痔瘡、潰瘍、跌打損傷、蛇咬傷、外傷出血等癥[2]。制劑具祛瘀止血之功效，臨床上用于由胃十二指腸炎癥、潰瘍所致吐血、便血及婦女血疲之月經(jīng)過(guò)多，產(chǎn)后惡露不絕等癥，研究還發(fā)現(xiàn)白背葉所含的總黃酮和洋芹素對(duì)人肝癌和人胃癌細(xì)胞的增殖均有顯著抑制作用[3-6]。經(jīng)血寧顆粒現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中僅規(guī)定了藥材鑒別、正丁醇提取物等項(xiàng)目，尚未制定含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。為了更好地控制經(jīng)血寧顆粒的質(zhì)量，作者對(duì)配方中主藥白背葉的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從白背葉乙醇提取物的正丁醇部分分離、制備得到一供含量測(cè)定用的化合物，鑒定為傘房決明苷，并為建立以白背葉為主藥的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料和儀器

高效液相儀（美國(guó)安捷倫 Agilent Technologies）；核磁共振儀（Bruker-AVANCE 500美國(guó) Bruker 公司）；質(zhì)譜儀(LCQ ESI-MS美國(guó)Finnigan公司)；柱層析和薄層層析硅膠均為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)；乙醇為食用醇，其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，水為蒸餾水。藥材白背葉由本公司提供。

2 提取和分離

取干燥的白背葉10 kg，粉碎，用75%乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，減壓濃縮提取液，得褐色浸膏1920g。將褐色浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁酯萃取，回收溶劑后，得到石油醚部分608g、乙酸乙酯部分562g、正丁醇部分383g和水部分350g。

稱正丁醇部分（150.0g），用氯仿-甲醇溶解后，以600 g硅膠（100-200目）進(jìn)行拌樣，放烘箱烘干，然后進(jìn)行硅膠（100-200目，400g）柱層析，依次以氯仿-甲醇（100∶0～0∶100）為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng) HPLC檢測(cè)合并相同的流分，得到30個(gè)組分：Fr.B-1～Fr.B-30。將Fr.B-10（3.5g）以 600g硅膠為吸附劑，用氯仿-甲醇（90∶10～70∶30）為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng) HPLC檢測(cè)合并得到三個(gè)組分：Fr.B-10-1（650mg）、Fr.B-10-2（1875mg）、Fr.B-10-3（890mg），將Fr.B-10-2(1875 mg)進(jìn)行葡聚糖Sephadex LH-20柱層析，用 H2O∶MeOH（90∶10）進(jìn)行洗脫，得到得到三個(gè)組分 Fr.B-10-2-1（275mg）、Fr.B-10-2-2（674mg）、Fr.B-10-2-3（875mg）。將Fr.B-10-2-3（875mg）進(jìn)行制備 HPLC（C18,20.0×250mm，tR=56.8min）層析，得到化合物Ⅰ（200mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 定性鑒定

化合物Ⅰ，淡黃色粉末( MeOH-H2O)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性，三氯化鐵乙醇溶液顯暗紫色，為黃酮苷特色反應(yīng)。

3.2 純度鑒定

色譜條件。色譜柱 Agilent型號(hào)：XDB-C18(4.6mm×250 mm,5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(28∶72)；檢測(cè)波長(zhǎng)335nm；流速1.0mL/min，柱溫：30℃；進(jìn)樣量10μL。

在此色譜條件下，化合物Ⅰ色譜峰單一，均勻?qū)ΨQ，tR=33.109min，且無(wú)其它雜質(zhì)峰，歸一法表明，純度為99.5%，色譜圖如圖1所示：

3.3 化合物Ⅰ核磁共振譜(1H NMR和13C NMR)及H、C歸屬

化合物Ⅰ的1H NMR ( 500 MHZ，DMSO- d6 ) 圖譜如圖2；13C NMR圖譜如圖3；其相關(guān)數(shù)據(jù)及歸屬如表1：

表1 化合物Ⅰ的1H 和 13C 的核磁數(shù)據(jù)(氘代溶劑為DMSO)

3.4 化合物Ⅰ的MS質(zhì)譜圖及m/z豐度分布

化合物Ⅰ的ESI-MS和[M]－如圖4所示，分子量為564，[M]－為563.1：m/ z：豐度分析如表2。

表2 m/ z碎片及豐度

4 結(jié)論

從化合物Ⅰ的定性反應(yīng)可看出，該化合物為黃酮苷類化合物，高效液相檢測(cè)表明，化合物Ⅰ為單一組分，MS表明該化合物分子量564.1，從1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)歸屬分析，化合物Ⅰ的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道 Corymboside（傘房決明苷）一致，故鑒定化合物Ⅰ為 Corymboside[7-8]，分子式為C26H28O14。

[1] 南京藥學(xué)院,中草藥學(xué)編寫(xiě)組.中草藥學(xué)[M].南京:江蘇人民出版社,1976:591.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1977:731.

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