紫杉醇脂質(zhì)體與注射液在大鼠體內(nèi)的血藥濃度及相關(guān)藥動學參數(shù)對比

王 杰 余 瑜 (重慶醫(yī)科大學藥學院，重慶 400016)

紫杉醇(PTX)是一種從紅豆杉屬植物中提取的具有獨特抗癌作用的天然物質(zhì)〔1〕，能夠與細胞微管蛋白結(jié)合，在癌細胞分裂時誘導和促進其聚合，抑制其解聚，阻斷細胞的有絲分裂，裝配和穩(wěn)定微管，從而限制癌細胞的生長。PTX抗腫瘤適應(yīng)證較廣，臨床上主要用于治療卵巢癌和乳腺癌〔2〕。目前臨床上使用最多為PTX注射液，但因為PTX水溶性極差，所以目前國內(nèi)外上市的PTX注射液都是以聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇作為溶媒〔3〕。然而這兩者在體內(nèi)降解時能夠刺激機體釋放組胺，從而易引起過敏反應(yīng)〔4〕，另外由于缺乏靶向性〔5〕，PTX注射液對人體的毒副作用較大〔6〕，因而限制了它的應(yīng)用。目前，以脂質(zhì)體作為載體的PTX靜脈給藥系統(tǒng)成為了研究熱點。20世紀90年代初，國內(nèi)外對PTX脂質(zhì)體的研究就取得了不錯的研究成果〔7〕，該制劑能明顯降低藥物毒性，提高機體耐受性，而且與PTX注射液相比，具有相同抗腫瘤活性。本研究比較了PTX脂質(zhì)體與PTX注射液在大鼠的血藥濃度及藥動學參數(shù)，考察兩者在大鼠體內(nèi)過程的差異。

1 資料與方法

1.1 材料與儀器 儀器:UV-2201型紫外-可見分光光度計，LC-3AT泵和SPD-10A(HPLC系統(tǒng))紫外檢測器，由日本島津公司生產(chǎn);Sage data system色譜工作站，Rheodyne 7725型液相色譜進樣器(美國)。試劑與藥品:注射用PTX脂質(zhì)體(力樸素)，南京綠葉思科藥業(yè)有限公司生產(chǎn);PTX注射液(紫素)，北京協(xié)和藥廠生產(chǎn);PTX對照品(中國食品藥品檢定研究院);地西泮對照品(中國食品藥品檢定研究院)。甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。動物:SD大鼠12只，體重(200±50)g，雌雄各半，由南京大學動物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 色 譜 條 件 流 動 相:乙 腈-甲 醇-0.2 mol/L NaH2PO4(28 ∶20 ∶52，pH4.2);色譜柱:μBondapak C18 柱(4.0 mm×250 mm，10 m);流速:1.0 ml/min;檢測波長:254 nm;內(nèi)標物:地西泮;柱溫:25℃。

1.2.2 血漿樣品的預處理 精密吸取100 μl內(nèi)標溶液(含地西泮20 mg/L)于8 ml具塞離心管中，氮氣流下?lián)]干，加入血漿樣品1.0 ml后旋混30 s，再加入氯仿-甲醇(4 ∶1)4.0 ml，機械旋混振蕩，離心10 min，吸取上層清液于5 ml尖底試管中，于水浴(45℃)通氮氣流揮干溶劑。殘渣物加入100 μl甲醇溶解混勻，離心，取上清液20～50 μl進樣測定。

1.2.3 藥動學實驗 將12只SD健康大鼠隨機分成PTX脂質(zhì)體注射液組和 PTX注射液組，每組6只，按大鼠體重(12 mg/kg)計算給藥量，經(jīng)大鼠尾靜脈緩慢推注藥品，然后分別于 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、12.0、24.0、48.0、72.0 h股動脈取血，離心5 min分離血漿。按照1.2.2項處理測定后，作高效液相色譜法(HPLC)分析，將所得數(shù)值代入標準曲線求得血漿藥物濃度。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件行t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 HPLC法的驗證

2.1.1 專屬性實驗 取空白血漿預處理后，在上述色譜條件下，用HPLC測定，PTX與內(nèi)標地西泮的分離度符合要求，內(nèi)標峰與樣品峰血漿中內(nèi)源性成分對測定無干擾。

2.1.2 標準曲線測定 以PTX注射液血藥濃度(X)為橫坐標，以PTX峰面積與內(nèi)標峰面積之比(Y)為縱坐標，進行線性回歸，得標準曲線:Y=0.089 5X+0.327 4(r=0.999 1，n=5)。

2.1.3 最低定量限(LCIQ)測定 配制系列低濃度血漿樣品，高效液相色譜法測定，紫杉醇最低定量限為2 ng/ml。

2.1.4 回收率精密度試驗 制備1.25、5、20 μg/ml PTX高、中、低濃度，帶入當日標準曲線計算含量，計算回收率。三種濃度的回收率為96.6% ～104.8%，相對標準偏差(RSD)均＜8.0%。日內(nèi)、日間精密度 RSD均＜6.0%(n=5)。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗 在-20℃的溫度下存放PTX對照品配制的血漿標準樣品，定期進行取樣處理和測定，考察血漿樣品的穩(wěn)定性，結(jié)果血漿樣品在1個月內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2 大鼠藥動學實驗

2.2.1 血藥濃度-時間曲線分析 PTX脂質(zhì)體在血漿中的濃度是PTX注射液的200倍，見圖1。

2.2.2 在血漿樣品中的平均濃度比較 PTX及其脂質(zhì)體在血漿樣品中的平均濃度分別為(0.21±0.11)、(48.12±9.42)C·mg-1· L-1，差異具有統(tǒng)計學意義(t=12.457，P＜0.001)。

圖1 PTX注射液(A)和PTX脂質(zhì)體(B)的藥-時曲線圖

2.2.3 相關(guān)藥動學參數(shù)的比較 利用3p87藥動學軟件處理血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，得到藥物動力學參數(shù)見表1。結(jié)果表明，藥-時曲線下面積(AUC)PTX脂質(zhì)體比PTX大，表觀分布容積PTX脂質(zhì)比PTX小，清除率PTX脂質(zhì)比PTX慢。

表1 脂質(zhì)體PTX和PTX注射液藥動學參數(shù)比較(s)

表1 脂質(zhì)體PTX和PTX注射液藥動學參數(shù)比較(s)

參數(shù) PTX注射液組 PTX脂質(zhì)體組 t值 P值A(chǔ)UC0～75 10.422±2.784 17.578±2.428 4.745 0.001 AUC0～∞ 10.913±2.912 17.723±2.445 4.387 0.001 T1/2(s/h)31.2±7.2 13.6±3.4 5.414 0.001 Vc(×10-3L)5.314±1.211 1.523±1.882 4.059 0.002 Cl(s)(×10-4L)1.3±2.5 7.4±1.1 5.471 0.001

3 討論

PTX是目前臨床應(yīng)用最廣泛及最有效的抗腫瘤物質(zhì)之一，主要應(yīng)用于乳腺癌、非小細胞癌、卵巢癌、前列腺癌等多種腫瘤的治療〔8〕，但由于PTX不溶于水的性質(zhì)，目前市場上的PTX注射液均采用聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇作為混合溶媒，然而其中的聚氧乙烯蓖麻油能刺激機體產(chǎn)生組胺，以引起嚴重過敏反應(yīng)〔9，10〕。臨床上在運用PTX注射液時普遍采用組胺受體拮抗劑和大劑量激素作為常規(guī)預處理，但對高血壓、糖尿病及潰瘍病的腫瘤患者不適用。以脂質(zhì)體作為載體的PTX注射液不僅能降低藥物的毒性，機體耐受性高，而且能保持與PTX注射液相同的抗腫瘤作用，因此PTX脂質(zhì)體可能改變PTX傳統(tǒng)的給藥方式，提高腫瘤患者的治療效果〔11〕。

PTX注射液一般采用先提取再測定的方法，提取溶劑有無水乙醚、叔丁基甲醚;流動相多采用甲醇、乙腈及水按不同比例組成，內(nèi)標物質(zhì)有炔諾酮或地西泮。

本研究按HPLC法〔12〕，以叔丁基甲醚為提取溶劑，以甲醇水為流動相，地西泮為內(nèi)標物質(zhì)，方法簡單可靠。另外本實驗中增加給藥劑量，從而減少由于藥物代謝使血藥濃度減低造成的誤差，增加了結(jié)果的可比性。

本研究結(jié)果表明，與PTX注射液相比，PTX脂質(zhì)體在大鼠體內(nèi)消除速度明顯減慢，而AUC大大提高，提示PTX脂質(zhì)體在一定程度上延長了PTX在體內(nèi)循環(huán)的時間，能夠在較長時間內(nèi)保持體內(nèi)血藥濃度維持較高水平，從而達到抗腫瘤的長效作用;同時，PTX脂質(zhì)體的Vc和Cl均顯著降低，提示PTX脂質(zhì)體中的藥物能更好地集中于腫瘤靶組織，具有較少的毒副作用。

綜上，PTX脂質(zhì)體不僅使藥物在體內(nèi)的濃度延長，大大改善了PTX注射液的藥動學性質(zhì)，而且還具有靶向的作用。

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