乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者術(shù)后癌組織中真核翻譯起始因子4e、3h和富含亮氨酸重復(fù)序列G-蛋白耦聯(lián)受體5表達(dá)特征

范平明 (海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院乳腺胸部腫瘤外科，海南 海口 570102)

乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌是乳腺腫瘤中最常見的類型，病變發(fā)展中多種蛋白異常表達(dá)且具有復(fù)雜的關(guān)系。真核翻譯起始因子(EIF)4e是EIF家族中最重要的亞基，又稱帽結(jié)合蛋白，能特異性識(shí)別真核細(xì)胞mRNA 5＇端的7甲基鳥苷酸的帽結(jié)構(gòu)，同時(shí)有效啟動(dòng)mRNA的翻譯過程，其也可能是mRNA翻譯過程中最有效的限速因子〔1，2〕。EIF3h也是 EIF家族中的亞基，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的正常調(diào)控和蛋白質(zhì)翻譯發(fā)揮重要作用，但是其功能較EIF4e弱〔3，4〕。富含亮氨酸重復(fù)序列 G-蛋白耦聯(lián)受體(LGR)5是WNT信號(hào)通路的靶基因，有學(xué)者認(rèn)為L(zhǎng)GR5是腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物，參與多種腫瘤的生物學(xué)進(jìn)展〔5，6〕。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者術(shù)后組織EIF4e、3h和LGR5表達(dá)特征及其相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 一般資料 我院行乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌改良根治手術(shù)后的蠟塊組織132例為研究組，年齡53～79(平均65.4)歲。均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)診斷標(biāo)準(zhǔn)。我院同期行乳腺腺病手術(shù)后周圍存在正常的乳腺小葉和導(dǎo)管的蠟塊85例為對(duì)照組，年齡53～78(平均64.2)歲。兩組一般資料無明顯差別(P＞0.05)。

1.2 EIF4e、3h和LGR5蛋白檢測(cè) EIF4e、3h和LGR5抗體的濃縮液均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling公司，雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、Ki67抗體的濃縮液均購(gòu)自北京中杉金橋生物工程公司。按不同比例稀釋后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇表達(dá)最理想的配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。EIF4e、3h和LGR5檢測(cè)均應(yīng)用免疫組化SP法，選擇DAB染色。操作全過程均嚴(yán)格按說明書，并由同一技師操作，嚴(yán)格質(zhì)控，減少誤差。

1.3 蛋白表達(dá)的判斷方法 EIF4e、3h和LGR均以細(xì)胞質(zhì)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，ER、PR、Ki67均為細(xì)胞核棕黃色為陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)5個(gè)400倍視野，以陽性細(xì)胞≥5%為陽性，以陽性細(xì)胞＜5%陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或線性相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組EIF4e、3h和LGR5蛋白表達(dá)陽性率的比較 研究組EIF4e、3h和 LGR5表達(dá)陽性率明顯高于對(duì)照組(P均＜0.000 1)。見表 1。

2.2 研究組不同臨床特征患者EIF4e、3h和LGR5蛋白表達(dá)陽性率的比較 研究組EIF4e、3h和LGR5表達(dá)與腫瘤最大徑、脈管浸潤(rùn)、ER、PR和Ki67表達(dá)均相關(guān)，EIF4e表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均＜0.05)。見表2。

表1 兩組EIF4e、3h和LGR5蛋白表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

2.3 研究組EIF4e、3h和LGR5表達(dá)相關(guān)性 研究組EIF4e和3h(r=0.46，P=0.046 5)、EIF3h 和 LGR5(r=0.48，P=0.031 0)的表達(dá)均正相關(guān)。

表2 研究組不同臨床特征患者EIF4e、3h和LGR5蛋白表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

3 討論

乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌多見于中老年人，其特征為腫瘤浸潤(rùn)?quán)徑慕M織，具有明顯的轉(zhuǎn)移趨向。腫瘤的病因?qū)W是多因素的，近年學(xué)者關(guān)注腫瘤干細(xì)胞的功能與轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的作用。EIF4e基因定位于染色體4q21-25，編碼25 kD的蛋白，EIF4e在帽依賴性翻譯中起重要作用〔7，8〕。有研究認(rèn)為EIF4e過表達(dá)可以選擇性提高具有長(zhǎng)5＇非翻譯區(qū)域結(jié)構(gòu)的原癌基因及重要生長(zhǎng)因子的翻譯水平，引起腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化傾向升高〔9〕。萬婕等〔10〕應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)出甲狀腺乳頭狀癌中EIF4e過度表達(dá)，并認(rèn)為與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。EIF3h的相對(duì)分子量是40 kD，其基因定位于8q23染色體上，在正常細(xì)胞中，EIF3h活性極低，在上皮細(xì)胞惡變過程中，EIF3h表達(dá)升高，此時(shí)不僅促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，還可以有效促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，增強(qiáng)細(xì)胞增殖〔11〕。吳繼華等〔12〕觀察結(jié)直腸癌組織中 EIF3h高表達(dá)，認(rèn)為EIF3h參與腫瘤發(fā)生和發(fā)展，并認(rèn)為聯(lián)合檢測(cè)EIF3h和Ki67有助于腫瘤診斷和預(yù)后評(píng)估。LGR5是由18個(gè)富含亮氨酸的重復(fù)單位和7個(gè)跨膜區(qū)域組成的大分子蛋白，其也是G蛋白耦聯(lián)受體的重要成員之一〔13，14〕。學(xué)者認(rèn)為L(zhǎng)GR5是在WNT經(jīng)典信號(hào)途徑中發(fā)揮作用的。EIF4e作為WNT信號(hào)通路中B聯(lián)蛋白的靶向基因，對(duì)細(xì)胞的失控性增生和細(xì)胞由幼稚到成熟的過程起重要作用〔15，16〕。

乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌在發(fā)展過程中具有很強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移潛能。本研究提示EIF4e、3h和LGR5是腫瘤發(fā)生的重要促進(jìn)因素。3種蛋白均促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、參與腫瘤的脈管播散過程，也使腫瘤細(xì)胞通過血管和淋巴管插散的能力增強(qiáng)。3種蛋白可能對(duì)激素受體有一定影響，也可能對(duì)臨床針對(duì)激素受體的治療有一定指導(dǎo)作用。EIF4e、3h和LGR5均參與腫瘤細(xì)胞增殖過程，也提示三者促進(jìn)腫瘤進(jìn)展可能與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖有關(guān)〔17～19〕。本實(shí)驗(yàn)提示EIF4e的作用可能與EIF3h和LGR5不同，EIF4e可能對(duì)淋巴道播散有重要影響，EIF4e是腫瘤進(jìn)展中淋巴管生成的相關(guān)促進(jìn)因子。EIF4e和3h、LGR5可能具有一定的協(xié)同作用。聯(lián)合檢測(cè)EIF4e、3h和LGR5的表達(dá)在一定程度上可以判斷預(yù)后。EIF4e、3h和LGR5標(biāo)記導(dǎo)管癌細(xì)胞的強(qiáng)陽性，提示此類腫瘤細(xì)胞的分化低，細(xì)胞幼稚，此時(shí)腫瘤細(xì)胞的增殖潛能強(qiáng)，腫瘤的轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)〔20，21〕。

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