輸血前后子宮肌瘤患者淋巴細胞及體液免疫功能測定

劉波 裴銀輝 于丹軍 周明璐 王維維 張洪東 林翠

(河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，232002)

子宮肌瘤，又稱子宮平滑肌瘤，是女性生殖器最常見的一種良性腫瘤。通常可分為漿膜下肌瘤、肌壁間肌瘤、黏膜下肌瘤或?qū)m頸肌瘤、闊韌帶肌瘤等，多無癥狀，少數(shù)表現(xiàn)為陰道出血，腹部觸及腫物以及壓迫癥狀等。如發(fā)生蒂扭轉(zhuǎn)或其他情況時可引起疼痛。以多發(fā)性子宮肌瘤常見。當(dāng)子宮肌瘤導(dǎo)致出血，卻沒有及時采取積極的治療，會引起貧血的發(fā)生。輸血是糾正低血容量和貧血的有效措施，是外科治療的重要手段。懸浮紅細胞是成分輸血中最常用的紅細胞制劑之一，由于其輸注既能糾正貧血，又能減少輸血不良反應(yīng)的發(fā)生率，因此在臨床應(yīng)用中所占比例越來越大。

然而輸血在作為一種積極治療手段的同時，也會引起副作用，約3%受血者輸血時發(fā)生嚴(yán)重程度不同的副作用，甚至致命。隨著研究的深入，輸注同種異體血液的諸多危險開始被認(rèn)識，這其中包括機體免疫功能的異常。

根據(jù)近年來的報道看，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為輸血引起的免疫調(diào)節(jié)主要是免疫抑制，尤其對腫瘤病人圍手術(shù)期輸血更可造成術(shù)后感染率和腫瘤復(fù)發(fā)率增加，直接影響病人的預(yù)后[1]。1999年靳艷華等學(xué)者對子宮肌瘤患者手術(shù)前后部分免疫指標(biāo)進行觀察，結(jié)果表明患者輸用異體血后CD3，CD4，CD4/CD8，RBC-CR3，RBC-IAP值下降，RBC-IAR值上升并具有顯著性差異，提示輸用異體血可能降低機體的免疫功能[2]。

本研究主要是進一步探討輸血對子宮肌瘤患者的免疫功能是否有影響，通過對淋巴細胞數(shù)、免疫球蛋白及補體的檢測，總結(jié)輸血對子宮肌瘤患者的機體免疫功能的影響，從而為臨床合理用血，預(yù)防術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生，提高治愈率提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗對象 對秦皇島市第一醫(yī)院婦科2008-01—2013-01收治的子宮肌瘤手術(shù)病人120例，術(shù)前Hb為70～90 g/L，無內(nèi)外科合并癥及并發(fā)癥，年齡43～56歲，平均48.6歲，術(shù)中均有輸注紅細胞2 U。輸血前后均未使用影響免疫功能的藥物。每例病人輸血前取外周血5 mL，輸血后第2天、第5天以及第10天各取外周血5 mL。

1.2 主要儀器及試劑

1.2.1 主要儀器 全自動血細胞分析儀Sysmex XE-2100，貝克曼·庫爾特IMMAGE全自動特種蛋白分析儀。

1.2.2 主要試劑 IgA檢測試劑盒(免疫比濁法，Beckman Coulter，Inc)，IgM檢測試劑盒(免疫比濁法，Beckman Coulter，Inc)，IgG檢測試劑盒(免疫比濁法，Beckman Coulter，Inc)，補體C3檢測試劑盒(免疫比濁法，Beckman Coulter，Inc)，補體C4檢測試劑盒(免疫比濁法，Beckman Coulter，Inc)。

2 方法

2.1 血常規(guī)檢測 ①無菌采集肘正中靜脈血2 mL。②開啟儀器，準(zhǔn)備就緒發(fā)光二極管發(fā)亮響應(yīng)。③顛倒試管，將樣品管徹底混合，取下樣品蓋，將樣品管置于取樣針中，然后按開始開關(guān)。準(zhǔn)備就緒發(fā)光二極管熄滅，并且連續(xù)兩次發(fā)出短促的蜂鳴聲后，取下樣品管。當(dāng)準(zhǔn)備就緒發(fā)光二極管重新發(fā)亮?xí)r，準(zhǔn)備下一個樣品，并重復(fù)上述步驟。④標(biāo)本分析。按終止鍵終止進樣器運行，輸入標(biāo)本號，手工模式分析樣本。

2.2 免疫球蛋白IgA含量測定 ①無菌采空腹靜脈血2 mL，以999 g離心力離心10 min，分離血清。②準(zhǔn)備試劑。使用IgA檢測試劑盒。③標(biāo)本檢測：裝載樣品后運行監(jiān)測。④檢驗后保存標(biāo)本。⑤IMMAGE免疫化學(xué)系統(tǒng)將自動計算結(jié)果。

2.3 免疫球蛋白IgM含量的測定(同2.2)

2.4 免疫球蛋白IgG含量測定(同2.2)

2.5 補體C3的測定 ①無菌采集空腹靜脈血2 mL，以999 g離心10 min，分離血清上機測定。②試劑準(zhǔn)備：使用補體C3檢測試劑盒。③標(biāo)本上機檢測：裝載樣品后運行監(jiān)測。④檢驗后保存標(biāo)本。⑤IMMAGE免疫化學(xué)系統(tǒng)將自動計算結(jié)果。

2.6 補體C4的測定 步驟同上補體C3檢測，使用補體C4檢測試劑盒。執(zhí)行簽收標(biāo)本→離心→上機檢測→審核報告→簽發(fā)報告→標(biāo)本保存。IMMAGE免疫化學(xué)系統(tǒng)將自動計算結(jié)果。

3 結(jié)果

3.1 輸血前后子宮肌瘤患者血清中紅細胞及血紅蛋白測定結(jié)果 應(yīng)用全自動血細胞分析儀測定120例子宮肌瘤手術(shù)患者輸血前及輸血第2天血液中紅細胞及血紅蛋白含量，各組數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，應(yīng)用配對比較的t檢驗對資料進行統(tǒng)計學(xué)處理。輸血后子宮肌瘤患者血液中紅細胞及血紅蛋白含量均高于輸血前，差異均具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01，表1)。

3.2 輸血前后子宮肌瘤患者外周血中淋巴細胞和單核細胞數(shù)量測定結(jié)果 應(yīng)用全自動血細胞分析儀測定120例子宮肌瘤手術(shù)患者輸血前及輸血第2天血液中淋巴細胞和單核細胞含量，各組數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，應(yīng)用配對比較的t檢驗對資料進行統(tǒng)計學(xué)處理，輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血液中淋巴細胞和單核細胞含量差異均有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01，表2)。

3.3 輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血清中免疫球蛋白含量測定結(jié)果 應(yīng)用免疫比濁法測定120例子宮肌瘤手術(shù)患者輸血前及輸血后第5天、第10天血清中IgA、IgM、IgG含量，各組數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，應(yīng)用方差分析對資料進行統(tǒng)計學(xué)處理，輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血清中免疫球蛋白IgA、IgM及IgG含量差異均具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01，表3～4)。

3.4 輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血清中補體C3和C4含量測定結(jié)果 應(yīng)用免疫比濁法測定120例子宮肌瘤手術(shù)患者輸血前及輸血后第5天、第10天血清中補體C3和C4含量，各組數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，應(yīng)用方差分析對資料進行統(tǒng)計學(xué)處理，輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血清中補體C3、C4含量差異均具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01，表5～6)。

表1 輸血前后子宮肌瘤患者紅細胞及血紅蛋白含量比較(n＝120)

表2 輸血前后不同時間子宮肌瘤患者外周血中淋巴細胞和單核細胞數(shù)量比較(n＝120)

表3 輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血清中免疫球蛋白含量比較(n＝120)

表4 輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血清中免疫球蛋白含量組間兩兩比較

表5 輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血清中補體C3和C4含量比較(n＝120)

4 討論

實驗中子宮肌瘤患者輸血后淋巴細胞和單核細胞數(shù)量明顯低于輸血前，這是由于輸血導(dǎo)致了子宮肌瘤患者細胞免疫功能的下調(diào)，即T細胞和抗原提呈細胞功能下調(diào)，而細胞免疫功能的下調(diào)又主要表現(xiàn)為機體外周的免疫耐受和無能應(yīng)答。它們在輸血免疫的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵的作用。如果缺乏適當(dāng)刺激信號或抗原提呈細胞表面的調(diào)節(jié)因子，T細胞對這種抗原一般無反應(yīng)。細胞免疫功能的下調(diào)可能包括以下幾個方面：輸血引起了子宮肌瘤患者T淋巴細胞的改變；輸血引起子宮肌瘤患者體內(nèi)B淋巴細胞的變化；輸血引起子宮肌瘤患者體內(nèi)NK細胞的變化；輸血引起子宮肌瘤患者體內(nèi)紅細胞免疫系統(tǒng)的變化；輸血引起子宮肌瘤患者體內(nèi)其他細胞的變化。

程衛(wèi)平等[3]研究表明惡性腫瘤患者輸血后血清IgA，IgM和IgG含量發(fā)生改變是暫時的，這是由于血液作為異物成分進入機體后刺激所造成的，本研究中IgA、IgG輸血后第5天增高，這是由于血液作為異物成分進入機體后刺激所造成的，盡管輸血可以暫時緩解機體由于貧血所出現(xiàn)的一系列癥狀，但是輸血后第10天其水平又下降至比輸血前低的水平，IgM含量輸血后一直下降，這說明輸血對子宮肌瘤患者免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了影響，而這種影響主要是免疫抑制。同樣在對惡性腫瘤患者輸血前后免疫球蛋白的研究中，畢琳等[4]研究的實驗結(jié)果表明輸血使患者的體液免疫功能發(fā)生改變。2007年嚴(yán)建新等[5]對103例手術(shù)患者輸血前后的免疫球蛋白測定結(jié)果顯示輸血后第5天IgG升高，與輸血前比較有顯著性差異，嚴(yán)建新等認(rèn)為這說明了輸血后患者體液免疫功能增加，這是血液進入人體后作為異物刺激機體引起的，他的研究中輸血后第10天IgA、IgM和IgG與輸血前相比有顯著地下降，說明輸血對體液免疫產(chǎn)生了抑制作用。同年，嚴(yán)建新等[6]在對急診外傷手術(shù)患者輸血前后的免疫球蛋白的研究中表明輸血后體液免疫功能增加只是暫時改變。此外，在同一研究領(lǐng)域劉靜[7]對手術(shù)患者輸血前后淋巴細胞及體液免疫功能的研究表明手術(shù)患者輸血后淋巴細胞和單核細胞數(shù)量下降，且輸血后第10天IgA、IgM和IgG與輸血前比有顯著性差異，這是因為輸血對手術(shù)患者免疫功能產(chǎn)生了抑制。20世紀(jì)初楊鮮平等[8]對腫瘤患者輸血前后的免疫球蛋白測定分析表明腫瘤患者輸血后血清中IgA、IgM和IgG的含量發(fā)生改變只是短暫性的，輸血會影響腫瘤患者的體液免疫功能。2011年李東杰等[9]對骨折手術(shù)患者輸血前后免疫球蛋白的測定分析表明輸血對骨折手術(shù)患者的體液免疫產(chǎn)生了抑制作用。輸血對免疫系統(tǒng)的效應(yīng)被稱為免疫調(diào)制，因為它可能包含免疫反應(yīng)增強或抑制。以往絕大多數(shù)的學(xué)者經(jīng)過研究認(rèn)為免疫抑制在輸血引起的免疫調(diào)節(jié)中占主要地位。1999年靳艷華等[2]學(xué)者對子宮肌瘤患者手術(shù)前后部分免疫指標(biāo)進行觀察，結(jié)果表明患者輸用異體血后CD3、CD4、CD4/CD8，RBC-CR3，RBC-IAP值下降，RBC-IAR值上升并具有顯著性差異，提示輸用異體血可能降低機體的免疫功能。而本實驗通過對子宮肌瘤患者輸血前后免疫球蛋白的測定比較，也提示輸血可能降低了子宮肌瘤患者的免疫功能。

表6 輸血前后不同時間子宮肌瘤患者血清中補體C3、C4含量組間兩兩比較

免疫球蛋白與抗原結(jié)合后，借助于補體的活化發(fā)揮溶細胞效應(yīng)。實驗數(shù)據(jù)顯示補體C3、C4數(shù)量下降，與輸血前相比差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義，這可能與血液保存過程中血細胞產(chǎn)生的條件抗原物質(zhì)及庫血老化，免疫復(fù)合物過多，紅細胞負擔(dān)過重有一定的關(guān)系?，F(xiàn)已知血液儲存過程中釋放的某些物質(zhì)包括組胺、纖維蛋白酶原、因子、過氧化物、由嗜酸粒細胞及嗜堿粒細胞釋放的陽離子蛋白等均能增加免疫抑制。盧文青等[10]對新生兒交換輸血治療后血清中補體變化的研究表明成人獻血后由于在血液保存和合成血液的過程中操作的因素可能使補體不穩(wěn)定，導(dǎo)致?lián)Q血后的患兒血清補體C3、C4含量依然比新生兒正常水平低。此外，李東杰等[9]在20世紀(jì)對骨折手術(shù)患者輸血前后的補體含量測定研究表明，實驗組輸血前血清C3、C4含量高于輸血后3 d，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，實驗組術(shù)后3 d血清中C3、C4含量比對照組術(shù)后3 d低。陳敏霞等[6]對外傷患者輸血后補體含量變化的研究發(fā)現(xiàn)輸血后補體C3、C4含量下降，并且這種改變可能是由于血細胞在血液保存過程中逐漸老化和產(chǎn)生條件抗原，免疫復(fù)合物增多以及紅細胞負擔(dān)加重。之后劉靜[7]對手術(shù)患者輸血前后補體含量的測定也證明了這一點。

綜上所述，輸血能夠抑制子宮肌瘤患者的免疫功能。所以臨床醫(yī)生在決定是否給子宮肌瘤患者輸血時要綜合考慮。

[1]耿長輝，王錫山.圍手術(shù)期輸血對惡性腫瘤患者的影響[J].國際外科學(xué)雜志，2010，37(10)：703-704.

[2]靳艷華，曹峰林.自體和異體輸血子宮肌瘤患者手術(shù)前后部分免疫指標(biāo)觀察[J].中國輸血雜志，2000，13(3)：199-200.

[3]程衛(wèi)平，王海濤.惡性腫瘤患者輸血前后免疫球蛋白測定結(jié)果分析[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，29(1)：22-23.

[4]畢琳，孫維羅.輸血對惡性腫瘤患者血清免疫球蛋白水平的影響與分析[J].中國初級衛(wèi)生保健，2010，24(3)：107-108.

[5]嚴(yán)建新，陳敏霞.輸血對病人淋巴細胞及體液免疫功能的影響[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗，2007，25(2)：170.

[6]嚴(yán)建新，陳敏霞.術(shù)中輸血對外傷病人淋巴細胞亞群及免疫球蛋白影響[J].中國實驗診斷學(xué)，2007，11(5)：697.

[7]劉靜.輸血前后患者淋巴細胞及體液免疫功能測定[J].中外醫(yī)療，2008，27(12)：45.

[8]楊鮮平，李春貴.腫瘤患者輸血前后免疫球蛋白測定分析[J].中原醫(yī)刊，2003，30(24)：2-3.

[9]李東杰，宋建生，樸文花.輸血前后骨折手術(shù)患者血清免疫球蛋白及補體的檢測分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(19)：2203-2204.

[10]盧文青，王啟新，何玲，等.新生兒交換輸血術(shù)對新生兒血清補體C3、C4的影響[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28(3)：389-392.