藤茶二氫楊梅素對小鼠高尿酸血癥模型的降尿酸作用

李廣枝，盧忠英，徐敬友，郁建平

(貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

藤茶是一種代茶飲品，在我國民間飲用歷史悠久，藤茶系葡萄科蛇葡萄屬植物顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand.Mazz)W.T.Wang.莖葉的加工物，有效成分為黃酮類物質(zhì)，包括二氫楊梅素、楊梅素、藤茶苷、槲皮素等，二氫楊梅素約占黃酮的80%［1］。藤茶味甘，淡，性涼，藤茶全株入藥用于治慢性腎炎、肝炎、小便澀痛、治胃熱嘔吐、感冒、咽喉腫痛等癥［2］。高尿酸血癥是痛風(fēng)病臨床表現(xiàn)之一，近年來，據(jù)國內(nèi)外文獻報道高尿酸血癥與糖尿病、高血壓、高脂血癥、冠心病等心血管疾病發(fā)生率也有相關(guān)性。目前用于治療痛風(fēng)的藥物副作用比較大，大量研究表明:二氫楊梅素可影響高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，可做為治療痛風(fēng)藥物的備選材料［3-4］。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，飲用藤茶能降低血清尿酸含量，本試驗利用小鼠高尿酸血癥模型，探討二氫楊梅素對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響，為治療痛風(fēng)藥物的開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試材藤茶植株采自貴州省江口縣和平鎮(zhèn)，由貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物教研室廖海民教授鑒定為葡萄科蛇葡萄屬植物顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang。試驗用藤茶由貴州江口梵凈山云峰野生植物開發(fā)有限公司提供。

試驗動物昆明種小鼠，雄性，體重(20±2g)，由重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司提供［許可證號:SCXK(渝)2012-006］，實驗前在實驗室正常飼養(yǎng)一周，實驗過程中自由飲水和顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 二氫楊梅素制備 取藤茶200 g，采用沸水提取，濃縮乙醇除雜，丙酮提取，濃縮加水沉淀結(jié)晶及重結(jié)晶的方法制備二氫楊梅素(DM)［5］，用HPLC檢測純度［6］為純度89.87%。

1.2.2 小鼠分組及給藥［7］將60只昆明種小鼠隨機分為6組，分正常對照組，模型組、別嘌呤醇組、二氫楊梅素高劑量組、中劑量組、低劑量組，其中二氫楊梅素高、中、低劑量分別為0.752 g/kg、0.376 g/kg、0.187 g/kg，別嘌呤醇按 0.04 g/kg 劑量給藥。除空白對照組灌胃給予相應(yīng)體積的生理鹽水。其余各組全部建模。模型組(上午按腺嘌呤:200 mg/kg，乙胺丁醇:250 mg/kg的劑量給藥，下午灌胃等體積生理鹽水)，別嘌呤醇組、二氫楊梅素高，中，低劑量組上午建模，下午分別按劑量給藥，每天一次，直至14天。

1.2.3 檢測指標 各組給藥連續(xù)14天，分別于實驗14天后，小鼠摘除眼球取血(取血前禁食12小時)，以測定血尿酸值(尿酸酶法)、尿酸氮(脲酶法)、肌酐(苦味酸法)。靜止1 h，低溫離心，3 500 r/min離心12 min以分離血清，-20℃冰箱冷凍保存。待測。

數(shù)據(jù)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件分析，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 腎臟肉眼觀察

如圖所示;正常對照組(圖1):腎臟色澤紅潤，模型組(圖2):腎臟增大明顯，顏色蒼白，肉眼可見大量白色結(jié)晶;別嘌呤醇組(圖3):腎臟輕微增大，顏色蒼白，肉眼可見少量白色結(jié)晶;二氫楊梅素高、中劑量組(圖4-5):腎臟輕微增大，顏色微紅，肉眼可見少量白色結(jié)晶;二氫楊梅素低劑量組(圖6):腎臟增大明顯，顏色蒼白，肉眼可見大量白色結(jié)晶;對小鼠腎臟重量的變化，與正常對照組相比各組都有顯著差異，與模型組相比有顯著差異(表1)。

圖1 正常對照組Fig.1 Control group

圖2 模型組Fig.2 Model group

圖3 別嘌呤醇組Fig.3 Allopurinol group

圖4 藤茶高劑量組Fig.4 High-dose group of dihydromyricetin

圖5 藤茶中劑量組Fig.5 Medium-dose group of dihydromyricetin

圖6 藤茶低劑量組Fig.6 Low-dose group of dihydromyricetin

表1 各組小鼠腎臟重量的變化情況Tab.1 Changes in kidney weight of mice

2.2 腺嘌呤復(fù)制高尿酸血癥小鼠模型情況比較

模型組小鼠血清UA水平為(294.8±25.31)μmol/L，與正常組血清UA水平(161.7±10.53)μmol/L有顯著差異，說明成功地復(fù)制了小鼠高尿酸血癥模型(表2)。

2.3 不同劑量給藥對小鼠血清UA水平的影響

別嘌呤組、二氫楊梅素高、中劑量組的血清UA與模型組相比有明顯的降低;二氫楊梅素高、中劑量組的血清UA與別嘌呤組相比差異顯著(表2)。

2.4 不同藥物對腎功能的影響

模型組BUN及Cr比正常組升高;二氫楊梅素高、中、低劑量組BUN及Cr均低于模型組;別嘌呤組與模型組無顯著差異;二氫楊梅素高、中劑量與別嘌呤醇組相比有明顯降低(表2)。

表2 各組小鼠血清尿酸(UA)水平的變化情況Tab.2 Changes in serum uric acid(UA)of mice

3 討論

隨著人民生活水平有進一步的提高，高尿酸血癥的患病率也逐漸上升，因此，臨床上對高尿酸和痛風(fēng)病的藥物治療也倍受關(guān)注，藥物治療主要重視安全有效性，模擬與臨床上相似的高尿酸血癥動物模型是研究防治高尿酸血癥藥物藥效的基礎(chǔ)。據(jù)現(xiàn)有資料顯示，藤茶植物中化學(xué)成分豐富，研究表明，藤茶有消炎，止咳、祛痰、鎮(zhèn)痛、抗氧化、護肝、降血糖，降血脂 抗高血壓、抗菌、抗癌等藥理作用［8-14］，藤茶資源豐富，二氫楊梅素含量高，本實驗主要探討二氫楊梅素對動物模型的降尿酸作用，進一步深入對二氫楊梅素藥理的研究，可為藤茶資源的綜合開發(fā)利用提供依據(jù)。同時也為高尿酸血癥和痛風(fēng)病的新藥研發(fā)提供理論依據(jù)。

本試驗結(jié)果顯示;別嘌呤對高尿酸血癥模型雖有極明顯的降尿酸作用，但對腎臟損害的副作用較為明顯，不容忽視。而二氫楊梅素能夠有效的干預(yù)腺嘌呤+乙胺丁醇片［7］所引發(fā)的高尿酸血癥，尤其是二氫楊梅素高、中劑量具有明顯降低血尿酸的作用，同時對腎臟的損害有保護和治療作用，二氫楊梅素在預(yù)防治療高尿酸血癥上具有潛在的前景。但其作用機制如何，有待于進一步的研究。

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