胰腺癌患者血清Dickkopf-1水平檢測(cè)及其臨床意義

周 穎，許琦華，康藝蘋，楊振熙

(上海市第七人民醫(yī)院，上海200137)

胰腺癌臨床表現(xiàn)隱匿，缺乏特異表現(xiàn)，多數(shù)病例 發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬晚期，僅10%～15%的患者確診時(shí)尚有手術(shù)機(jī)會(huì)，但手術(shù)難度大、根治性切除率低、復(fù)發(fā)率高，5年生存率＜5%［1］。近年來，尋找與胰腺癌相關(guān)的新的血清腫瘤標(biāo)志物成為研究熱點(diǎn)。Dickkopf-1(DKK-1)是一種分泌型糖蛋白，是Wnt/β-catenin信號(hào)通路的拮抗劑，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用［2，3］;為探討其診斷胰腺癌的價(jià)值，我們于2010年5月～2013年6月進(jìn)行了如下研究。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 我院同期收治的50例胰腺癌患者(胰腺癌組)，其中男31例，女19例，年齡34～93(65.04±13.55)歲。23例經(jīng)細(xì)胞學(xué)和(或)組織學(xué)檢查確診，27例經(jīng)影像學(xué)檢查和隨訪確診。臨床分期(UICC分期)Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期34例;均無其他臟器嚴(yán)重疾患及其它惡性腫瘤史，采血前均未接受放化療及手術(shù)治療。另取同期50例健康體檢者作為對(duì)照組，其中男27例，女23例，年齡21～69(53.42±10.66)歲。本研究方案通過上海市第七人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，所有患者受檢前簽署知情同意書。

1.2 血清DKK-1及 CA19-9表達(dá)檢測(cè) 采集兩組清晨空腹外周靜脈血10 mL，不加抗凝劑，待血液凝固后以2 000 r/min離心20 min，取上清液，置于-80℃低溫冰箱待檢，以ELISA法行血清DKK-1檢測(cè)(＞22.5 μg/L 判為陽性，≤22.5μg/L 為陰性);以電化學(xué)發(fā)光法行CA19-9檢測(cè)(＞39 U/mL判為陽性，≤39 U/L為陰性)，計(jì)算DKK-1、CA19-9陽性率及DKK-1+CA19-9陽性率。

1.3 DKK-1及CA19-9診斷胰腺癌的價(jià)值 計(jì)算DKK-1、CA19-9及DKK-1聯(lián)合CA19-9診斷胰腺癌的敏感度、特異度和準(zhǔn)確性。敏感度=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù));特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù));準(zhǔn)確性=(真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù))/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)+真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù))。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清DKK-1、CA 19-9表達(dá) 胰腺癌組及對(duì)照組血清 DKK-1 水平分別為(31.24 ±18.18)、(14.86±4.71)μg/L，P ＜ 0.05;DKK-1 陽性率分別為52%、8%、P＜0.01。胰腺癌組及對(duì)照組血清 CA 19-9水平分別為(375.28 ± 363.17)、(13.97 ±13.21)U/mL，P ＜ 0.05;CA 19-9 陽性率分別為78%、16%;P ＜0.01。DKK-1+CA 19-9陽性率分別為90%、22%。

2.2 血清DKK-1、CA 19-9對(duì)胰腺癌的診斷價(jià)值DKK-1、CA19-9、DKK-1+CA19-9診斷胰腺癌的敏感度、特異度和準(zhǔn)確性見表1。

表1 DKK-1、CA 19-9及二者聯(lián)合診斷胰腺癌的敏感度、特異度及準(zhǔn)確性

3 討論

提高早期診斷及監(jiān)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，是提高胰腺癌綜合療效的關(guān)鍵。近年來，各種血清腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用價(jià)值受到臨床關(guān)注。目前臨床上常用于胰腺癌的血清標(biāo)志物有CA19-9、CEA、CA125等，其中CA19-9是胰腺癌最為常用的標(biāo)志物，主要用于療效觀察、病情進(jìn)展判斷和復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)，但早期診斷的敏感性和特異性不高［4～6］;同時(shí)，CA19-9 的表達(dá)依靠Lewis抗原，而人群中5%～10%的個(gè)體該抗原為陰性，即使進(jìn)展期胰腺癌亦無法合成CA19-9［6］。因此尋找與胰腺癌相關(guān)的新的血清腫瘤標(biāo)志物成為目前的研究熱點(diǎn)。

DKK-1是一種分泌性蛋白，由 Glinka等［7］于1998年首次在兩棲動(dòng)物非洲蟾蜍胚胎細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。人類DKK-1基因位于染色體10q11，其編碼蛋白是一種Wnt信號(hào)通路拮抗劑。除在胚胎發(fā)育中起關(guān)鍵調(diào)控作用外，DKK-1對(duì)維持成體組織細(xì)胞增殖、分化、凋亡的動(dòng)態(tài)平衡亦至關(guān)重要，并能在一定條件下誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖、分化失控，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。既往研究表明DKK-1在胰腺癌細(xì)胞株及組織中高表達(dá)，參與了胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展并促進(jìn)其浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，可作為一種新的胰腺癌生物學(xué)標(biāo)記物［8，9］。文獻(xiàn)報(bào)道血清DKK-1水平在部分些惡性腫瘤患者血清中升高，并與不良預(yù)后相關(guān)［10～15］。

近年研究發(fā)現(xiàn)，Wnt/β-catenin信號(hào)通路和DKK-1異常參與了胰腺癌的發(fā)生和發(fā)展。Pasca等［16］應(yīng)用基因芯片技術(shù)分析了胰腺導(dǎo)管腺癌中Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因的活化情況，發(fā)現(xiàn)DKK-1表達(dá)顯著高于正常胰腺組織。Takahashi等［8］檢測(cè)了43株人惡性腫瘤細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)所有胰腺癌細(xì)胞株中DKK-1表達(dá)均持續(xù)顯著上調(diào);手術(shù)切除的胰腺癌組織中DKK-1亦呈過表達(dá)，23例胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的DKK-1 mRNA水平顯著高于相應(yīng)非癌組織;敲除DKK-1基因可減低胰腺癌細(xì)胞株SUIT-2的遷移活性及其轉(zhuǎn)移性亞株S2-CP8的生長(zhǎng)和侵襲能力。DKK-1在胰腺癌內(nèi)鏡超聲引導(dǎo)下細(xì)針抽吸(EUSFNA)標(biāo)本中的陽性表達(dá)率為70.8%，細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)聯(lián)合DKK-1檢測(cè)可提高胰腺癌診斷的敏感性和特異性［9］。由此推測(cè)DKK-1可能參與了胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展并可促進(jìn)其浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，可作為一種新的胰腺癌生物學(xué)標(biāo)記物。

本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組血清DKK-1水平及陽性率均明顯高于對(duì)照組，提示血清DKK-1水平有助于胰腺癌的診斷，可作為胰腺癌診斷的腫瘤標(biāo)志物。診斷胰腺癌時(shí)，CA19-9敏感度高于 DKK-1，DKK-1特異度和準(zhǔn)確性與CA19-9相比無明顯差異;若兩者聯(lián)合檢測(cè)，則敏感度和準(zhǔn)確性均明顯提高。

綜上所述，血清DKK-1水平可作為臨床胰腺癌的輔助診斷指標(biāo);血清DKK-1與CA 19-9聯(lián)合檢測(cè)有助于提高胰腺癌的診斷水平。但其在胰腺癌早期診斷、療效預(yù)后判斷等方面的價(jià)值還需要進(jìn)一步大樣本研究證實(shí)。

［1］Philip PA，Mooney M，Jaffe D，et al.Consensus report of the national cancer institute clinical trials planning meeting on pancreas cancer treatment［J］ .J Clin Oncol，2009，27(33):5660-5669.

［2］Niehrs C.Function and biological roles of the Dickkopf family of Wnt modulators［J］.Oncogene，2006，25(57):7469-7481.

［3］周穎，李兆申，王東.Wnt信號(hào)通路和Dickkopf-1在胰腺癌中的研究進(jìn)展［J］.胃腸病學(xué)，2010，15(12):752-754.

［4］ Locker GY，Hamilton S，Harris J，et al.ASCO 2006 Update of ASCO recommendations for the use of tumor markers in gastrointestinal cancer［J］.J Oncol Pract，2006，24(33):5313-5327.

［5］Boeck S，Stieber P，Holdenrieder S，et al.Prognostic and therapeutic significance of carbohydrate antigen 19-9 as tumor marker in patients with pancreatic cancer［J］.Oncology，2006，70(4):255-264.

［6］樓文暉.胰腺癌的診斷和臨床分期［J］.中國(guó)癌癥雜志，2009，19(8):565-569.

［7］Glinka A，Wu W，Delius H，et al.Dickkopf-1 is a member of a new family of secreted proteins and functions in head induction［J］.Nature，1998，391(6665):357-362.

［8］Takahashi N，F(xiàn)ukushima T，Yorita K，et al.Dickkopf-1 is overexpressed in human pancreatic ductal adenocarcinoma cells and is involed in invasive growth［J］.Int J Cancer，2010，126(7):1611-1620.

［9］周穎，王東，李兆申.內(nèi)鏡超聲引導(dǎo)下細(xì)針抽吸標(biāo)本Dickkopf-1檢測(cè)對(duì)胰腺癌的診斷價(jià)值［J］.胃腸病學(xué)，2011，16(1):7-10.

［10］Yamabuki T，Takano A，Hayama S，et a1.Dickkopf-1 as a novel serologic and prognostic biomarker for lung and esophageal carcinomas［J］.Cancer Res，2007，67(6):2517-2525.

［11］Jiang T，Wang S，Huang L，et al.Clinical significance of serum DKK-1 in patients with gynecological cancer［J］.Int J Gynecol Cancer，2009，19(7):1177-1181.

［12］Sheng SL，Huang G，Yu B，et al.Clinical significance and prognostic value of serum Dickkopf-1 concentrations in patients with lung cancer［J］.Clinical Chemistry，2009，55(9):1656-1664.

［13］Shen Q，F(xiàn)an J，Yang XR，et al.Serum DKK1 as a protein biomarker for the diagnosis of hepatocellular carcinoma:a large-scale multicentre study［J］.Lancet Oncol，2012，13(8):817-826.

［14］Jiang T，Huang L，Zhang S，et al.DKK-1 in serum as a clinical and prognostic factor in patients with cervical cancer［J］.Int J Biol Markers，2013，28(2):221-225.

［15］Lee HS，Lee HE，Park do J，et al.Clinical significance of serum and tissue Dickkopf-1 levels in patients with gastric cancer［J］.Clin Chim Acta，2012，413(21):1753-1760.

［16］Pasca di Magliano M，Biankin AV，Heiser PW，et al.Common activation of canonical Wnt signaling in pancreatic adenocarcinoma［J］.PLoS One，2007，2(11):1155.