內(nèi)皮素－1在肝纖維化和肝硬化中的變化及意義

張小華

（武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢430071；公安縣人民醫(yī)院普外科，湖北 公安434300）

黃玉榮，楊娟

（公安縣人民醫(yī)院普外科，湖北 公安434300）

內(nèi)皮素（ET）是近年來發(fā)現(xiàn)的重要血管活性物質(zhì)，其對肝硬化患者肝損害和門脈血流動力學(xué)的影響受到廣泛關(guān)注［1－3］。我們通過檢測患者血清ET－1、透明質(zhì)酸酶（HA）、Ⅲ型前膠原（PⅢP）、Ⅳ型膠原（Ⅳ－C）、層粘連蛋白（LN）水平，探討ET－1在肝硬化形成中的意義，并分析ET－1與門脈血流動力學(xué)的關(guān)系，為疾病的治療提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 對象

選取我院2013年1月至2014年1月收治的肝炎肝硬化患者60例（觀察組）和慢性肝炎患者20例（對照組）。觀察組中男36例、女24例，年齡19～71（42±11）歲。均符合2000年西安第10次全國傳染病與寄生蟲病會議修訂的 《病毒性肝炎防治方案》中肝硬化診斷標準，肝功能Child－Pugh分級A級20例、B級22例、C級18例。對照組中男13例、女7例，年齡21～68（36±12）歲。所有患者均無原發(fā)性心、肺、腎疾病和糖尿病、高血壓等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病及其他炎性疾病。觀察組與對照組一般情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

所有患者采血前3d停用血管活性劑、利尿劑等，禁食12h后自肘靜脈采血3ml注入裝有10g／dl EDTA－Na2和抑肽酶的聚苯乙烯試管中混勻，4℃離心，分離血漿－20℃保存待測；進行彩色多普勒超聲檢查，觀察門靜脈主干血流方向，用脈沖多普勒在門靜脈官腔中取樣，取樣角度＜60°，并測量門靜脈寬度（Dpv）、門靜脈血流速度（Vpv），根據(jù)血管面積和流速計算門靜脈血流量（Qpv）。

主要儀器：GC－1500型γ放射免疫計數(shù)器（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）、EOS－880半自動生化分析儀（意大利）、HP－M2410型彩色多普勒超聲儀（日本）。主要試劑及藥盒：北京東亞免疫技術(shù)研究所制造的ET測定試劑盒、10g／dl EDTA－Na2、抑肽酶，上海海軍醫(yī)學(xué)生物技術(shù)中心制造的 HA、Ⅳ－C、LN試劑盒，芬蘭Orion Diagnostica公司制造PⅢP試劑盒。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料均以（±s）表示，計量資料組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗及直線相關(guān)分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝硬化患者血清ET－1和HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN水平及其與肝功能分級的關(guān)系

觀察組患者血清ET－1和HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN水平均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；血清ET－1、HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN水平呈現(xiàn)出肝功能C級＞B級＞A級，且均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 肝硬化患者血清ET－1和HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN水平及其與肝功能分級的關(guān)系

2.2 肝硬化患者血清ET－1與HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN的相關(guān)性分析

肝硬化患者血清ET－1與HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN呈現(xiàn)明顯正相關(guān)。見表2。

表2 肝硬化患者血清ET－1與HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN的相關(guān)性

2.3 不同肝功能狀態(tài)下血清ET－1與Dpv、Vpv、Qpv的關(guān)系

觀察組患者血清ET－1、Dpv、Vpv、Qpv均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與肝功能分級同步，Dpv呈現(xiàn)C級＞B級＞A級，且與A級比較，B級明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與B級比較，C級明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Vpv、Qpv均呈現(xiàn)A級＞B級＞C級，且與A級比較，B級明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與B級比較，C級明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同肝功能狀態(tài)下血清ET－1與Dpv、Vpv、Qpv的關(guān)系

由表3知，患者血清ET－1與Dpv呈現(xiàn)強正相關(guān)（r＝0.837，P＜0.05），與Vpv、Qpv呈明顯負相關(guān)（r＝－0.752、－0.714，P＜0.05）。

3 討論

肝硬化是臨床上常見的慢性肝病，肝功能損害、門脈高壓是其突出表現(xiàn)［4］。內(nèi)皮素（ET）來源于內(nèi)皮細胞，由21個氨基酸殘基構(gòu)成，具有廣泛的病理生理作用，對機體多種組織、器官產(chǎn)生復(fù)雜的生物學(xué)效應(yīng)［5－8］。ET家族認為由3個血管活性肽構(gòu)成，在ET－1、ET－2、ET－3中，ET－1具有最強的縮血管作用［9－10］，肝臟為機體ET來源的主要場所之一，而ET－1和其受體作為病原因素和誘發(fā)因子在肝臟疾病中被廣泛研究［11－12］。

肝硬化時ET－1水平表現(xiàn)為肝功能C級＞B級＞A級＞對照組，表明肝硬化患者血清ET－1升高與肝功能損害程度有關(guān)。肝功能越差，ET－1升高越明顯，提示ET－1對肝硬化形成和發(fā)展起重要作用。肝臟合成ET－1部位主要在間質(zhì)細胞及膽道上皮細胞［13－14］。正常人肝臟間質(zhì)細胞及膽道上皮細胞ET－1弱表達，ET－1受體在肝內(nèi)廣泛分布于肝細胞、竇狀隙內(nèi)皮細胞、門靜脈、中央靜脈，故肝硬化內(nèi)皮細胞、膽道上皮細胞ET－1合成明顯升高［15－16］。ET－1能調(diào)節(jié)肝臟微循環(huán)，促使肝血竇收縮，導(dǎo)致肝血竇血流減少甚至完全停止，細胞供氧減少，從而發(fā)生缺血、缺氧性損傷及慢性纖維化等［17－19］。同時肝臟是ET－1清除場所之一，肝硬化患者清除ET－1能力下降，血清ET－1會明顯升高。肝硬化時肝細胞變性壞死外，同時部分肝細胞增生，肝內(nèi)血管重建，增生的血管內(nèi)皮合成分泌ET－1，肝功能減退對ET－1滅活能力降低［20］。隨著ET－1水平增高，引起肝內(nèi)小血管、肝竇、門靜脈收縮而導(dǎo)致門脈血流動力學(xué)改變，血管壁對切應(yīng)力的感應(yīng)變化進一步刺激ET－1釋放增加，加重門脈高壓，構(gòu)成惡性循環(huán)［21］。

HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN可以反映膠原生成及纖維化情況。本研究中患者血清ET－1和HA、PⅢP、Ⅳ－C、LN均明顯高于對照組，并且肝硬化患者血漿中ET－1水平隨Child－PughA、B、C級呈遞增變化，B級與A級、C級與B級ET－1水平差異明顯，表明ET－1與肝硬化的嚴重程度呈明顯正相關(guān)性。

門靜脈寬度（Dpv）、門靜脈血流速度（Vpv）和門靜脈血流量（Qpv）反映了門脈血流動力學(xué)的變化。本研究中比較了不同肝功能狀態(tài)下門靜脈寬度（Dpv）、門靜脈血流速度（Vpv）和門靜脈血流量（Qpv）水平與血清ET－1水平相關(guān)性，呈現(xiàn)血清ET－1與Dpv呈現(xiàn)強正相關(guān)，與Vpv、Qpv呈明顯負相關(guān)，反映了ET－1對門脈血流動力學(xué)的影響。

綜上所述，肝硬化者血漿ET－1水平反映了肝硬化的嚴重程度，并對肝硬化門脈血流動力學(xué)造成紊亂，在門脈高壓的形成及發(fā)展中起重要作用。

［1］魏常勝，王宇，張忠濤，等.內(nèi)皮素－1受體拮抗劑PD142893對肝硬化大鼠肝臟Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原表達的影響以及和肝纖維化關(guān)系 ［J］.中華肝膽外科雜志，2007，13（5）：335－336.

［2］Michalski L，Kleniewska P，Goraca A，et al.The role of endothelin－1and its receptor bilckers on the liver function ［J］.Gen Physiol Biophys，2012，31（4）：383－388.

［3］林菊生，程元橋，廖家智.內(nèi)皮素－1基因Tag1多態(tài)性與肝硬化門靜脈高壓的相關(guān)性研究 ［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2003，83（6）：463－466.

［4］Kardum D，F(xiàn)abijanic D，Lukic A，et al.Correlation of endothelin－1concentration and angiotensin－converting enzyme activity with the staging of liver fibrosis ［J］.Coll Antropol，2012，36（2）：413－418.

［5］Ling L，Kuc RE，Maguire JJ，et al.Comparison of endothelin receptors in normal versus cirrhotic human liver and in the liver from endothelial cell－specific ETB knockout mice ［J］.Life Sci，2012，91（13／14）：716－722.

［6］Hocher B，Heiden S，Rahnenfuhre J，et al.Dual endothelin－converting enzyme／neutral endopeptidase blockade in rats with D－galactosamine－induced liver failure ［J］.Eur J Med Res，2011，16（6）：275－279.

［7］Hoepermm.Liver toxicity：the Achilles'heel of endothelin receptor antagonist therapy？［J］.Eur Respir J，2009，34（3）：529－530.

［8］Lanchuk PI，Rusinchuk Lal，Tieriekhov AA.Effect of endothelin－1on the liver oxygen balance and heat production ［J］.Fiziol Zh，2008，54（6）：38－41.

［9］Heiden S，Pfab T，von Websky K，et al.Tissue specific activation of the endothelin system in severe acute liver failure［J］.Eur J Med Res，2008，13（7）：327－329.

［10］Fukui R，Nishimori H，Hata F.Inhibitory effect of endothelin A receptor blockade on tumor growth and liver metastasis of a human gastric cancer cell line［J］.Gastric Cancer，2007，10（2）：123－128.

［11］Kitamura Y，Hayashi K.Imbalance between expression of endothelin receptors A and B in terminal liver cirrhosis due to hepatitis C viral infection：immunohistochemical study of autopsy cases［J］.J Gastroenterol Hepatol，2008，23（82）：451－456.

［12］Yokomori H，Yoshimura K，Ohshima S，et al.The endothelin－1receptor－mediated pathway is not involved in the endothelin－1－induced defenestration of liver sinusoidal endothelial cells ［J］.Liver Int，2006，26（10）：1268－1276.

［13］Zhang WH，Li JY，Zhou Y.Melatonin abates liver ischemia／reperfusion injury by improving the balance between nitric oxide and endothelin ［J］.Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2006，5（4）：574－579.

［14］Lattmann T，Ortmann J，Horber S，et al.Upregulation of endothelin converting enzyme－1in host liver during chronic cardiac allograft rejection［J］.Exp Biol Med（Maywood），2006，231（6）：899－901.

［15］Hei ZQ，Luo CF，Li SR，et al.Changes in hemodynamics and nitric oxide／endothelin－1during liver transplantation in patients with cirrhosis［J］.Zhongguo Weizhongbing Jijiu Yixue，2005，17（10）：592－594.

［16］Hetz H，Bauer M，Lahner D，et al.Endothelin activation and postoperative renal failure after human liver transplantation［J］.Liver Transpl，2005，11（10）：1201－1206.

［17］Nagata T，Kudo H，Nishino T，et al.Increased immunoreactivities against endothelin－converting enzyme－1and monocyte chemotactic protein－1in hepatic stellate cells of rat fibrous liver induced by thioacetamide ［J］.Med Mol Morphol，2005，38（3）：161－172.

［18］Tang C，Ma B.Glycosidation of an endothelin ET（A）receptor antagonist and diclofenac in human liver microsomes：aglycone－dependent UDP－sugar selectivity［J］.Drug Metab Dispos，2005，33（12）：1796－1802.

［19］van Giersbergen PL，Popescu G，Bodin F，et al.Influence of mild liver impairment on the pharmacokinetics and metabolism of bosentan，a dual endothelin receptor antagonist ［J］.J Clin Pharmacol，2003，43（1）：15－22.

［20］Gao M，Guan Y，Zhong D，et al.Activation of liver X receptor attenuates endothelin－1expression in vascular endothelial cells［J］.Int J Biochem Cell Biol，2012，44（12）：2299－2307.

［21］Bahde R，Kapoor S，Bandi S，et al.Directly acting drugs prostacyclin or nitroglycerine and endothelin receptor biocker bosentan improve cell engraftment in rodent liver ［J］.Hepatology，2013，57（1）：320－330.