四物湯類方對(duì)大鼠子宮血流作用的研究

黃培艷，盛國樓

(1.江蘇省南京市胸科醫(yī)院，江蘇南京210029;2.江蘇省南京市中醫(yī)院，江蘇南京210001)

四物湯由當(dāng)歸、川芎、白芍、熟地黃4味中藥組成，是以補(bǔ)血調(diào)血為主要功用的方劑，被譽(yù)為“一切血病的總方”、“肝經(jīng)調(diào)血之專劑”。四物湯類方功能活血調(diào)經(jīng)，主治血瘀所致月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、經(jīng)前腹痛、經(jīng)行不暢等婦科疾病［1］。四物湯對(duì)子宮動(dòng)脈血流具有明顯地抑制作用，從而可以降低血液黏度［2］。張曉紅等［3］報(bào)道，口服四物湯2 d后，動(dòng)脈血管內(nèi)紅細(xì)胞聚集率明顯減小，子宮血流量增加，子宮動(dòng)脈阻力下降。朱敏等［4］報(bào)道，四物湯及其組方對(duì)縮宮素誘導(dǎo)的小鼠離體子宮平滑肌收縮幅度、收縮頻率和平均肌張力有不同程度的抑制作用。本試驗(yàn)應(yīng)用激光多普勒［5］來監(jiān)測四物湯及類方的水提液對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜血流變化，探討各方之間的藥用強(qiáng)度和藥用趨勢，以為臨床合理用藥提供借鑒。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1 試劑 戊巴比妥鈉粉劑(中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào):F20021216)。當(dāng)歸，甘肅岷縣當(dāng)歸GAP種植基地;川芎，四川彭州川芎GAP種植基地;白芍，安徽亳州;熟地，河南懷慶;延胡索，浙江松陽;香附，廣西玉林;木香，云南麗江;其他藥材均購于南京市藥材公司。各藥材符合《中國藥典》﹙2005年版﹚標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，購于上海斯萊克動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(滬)2007－005。

1.3 器械 1 mL注射器若干，手術(shù)剪刀1把，手術(shù)鑷子2把，powerlab 8s ADinstruments公司。

1.4 方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)分組 清潔級(jí)SD大鼠，雌性，體質(zhì)量180～220 g，水提液和醇沉上清液分別隨機(jī)分為正常對(duì)照組、四物湯組、桃紅四物湯組、香附四物湯組、少腹四物湯組、芩連四物湯組，每組10只。

1.4.2 試驗(yàn)樣品制備

1.4.2.1 水提浸膏的制備 藥材按各復(fù)方臨床用量配比，見表1，經(jīng)粉碎至粒徑為40目，水提取2次，第1次加入10倍量水煎煮2 h，第2次加入8倍量水煎煮1.5 h合并2次水煎液，減壓回收溶劑至一定體積，并烘干成水提浸膏備用。給藥量按生藥量折算，使用時(shí)用重蒸水稀釋至所需濃度。

表1 四物湯及其加減方藥物組成

1.4.2.2 水提醇沉浸膏的制備 將“1.4.2.1”中水煎液減壓回收溶劑至一定體積后，加入95%乙醇調(diào)至醇濃度為80%，靜置過夜，過濾沉淀，得醇沉上清液，烘干成浸膏備用。給藥量按生藥量折算，使用使用時(shí)用重蒸水稀釋至所需濃度。正常對(duì)照組予生理鹽水0.8 mL。各復(fù)方給藥量及得率情況見表2。

表2 各處方給藥量及得率基本情況

1.4.3 子宮血流檢測 用0.3%戊巴比妥鈉1 mL/100 g麻醉大鼠并固定在鼠板上，分離大鼠子宮和十二指腸。打開Powerlab主機(jī)chart4.2軟件調(diào)整各參數(shù)并校正多普勒激光探頭，將探頭插入子宮內(nèi)固定探頭保持子宮自然位置。記錄子宮血流波形圖、背景值以及血流平均值。等系統(tǒng)穩(wěn)定后記錄給藥前子宮血流值，然后十二指腸給藥并記錄150 min。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用Microsoft Excel軟件處理，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 四物湯及其加減方水提液 各組大鼠子宮血流速度比較 正常對(duì)照組在十二指腸給生理鹽水0.8 mL以后與之前相比，大鼠子宮血流沒有顯著變化，在給生理鹽水150 min內(nèi)保持穩(wěn)定。四物湯水提液組十二指腸給四物湯水提液3倍臨床量后，子宮血流隨后升高，在70～80 min達(dá)到峰值，與給藥前相比有顯著性差異，隨后又下降。芩連四物湯水提液組十二指腸給芩連四物湯水提液3倍臨床量后，大鼠子宮血流升高，20～30 min稍微降低后又升高，在50～70 min達(dá)到峰值與給藥前相比有顯著性差異，隨后逐漸下降120 min時(shí)段有所回升但無顯著性差異。香附四物湯水提液組十二指腸給香附四物湯水提液3倍臨床量后子宮血流有微弱升高，與給藥前相比無顯著性差異。少腹四物湯水提液組十二指腸給少腹四物湯水提液3倍臨床量后，大鼠子宮血流升高，除在20～40 min有小幅下降，在100～110 min達(dá)到峰值隨后又下降，但數(shù)據(jù)無顯著性差異。桃紅四物湯水提液組0 min后十二指腸給桃紅四物湯3倍臨床量后，子宮血流先下降后升高在70～80 min達(dá)到峰值隨后一直下降，但數(shù)據(jù)無顯著性差異。各方水提液對(duì)大鼠子宮血流的影響結(jié)果表明:各方水提液均有促進(jìn)子宮血流作用，作用強(qiáng)度及維持時(shí)間為芩連四物湯組＞四物湯組＞桃紅四物湯組＞香附四物湯組＞少腹四物湯組，P＜0.05為有顯著性差異。見表3。

2.2 四物湯及其加減方醇沉上清液結(jié)果如下 各組大鼠子宮血流速度比較:四物湯醇提液組0 min后十二指腸給四物湯醇提液3倍臨床量后子宮血流快速上升，在10～20 min達(dá)到峰值，隨后迅速下降逐漸趨于平緩，數(shù)據(jù)無顯著性差異。芩連四物湯醇提液組0 min后十二指腸給芩連四物湯醇提液3倍臨床量后子宮血流逐漸上升，90～100 min達(dá)到峰值，隨后逐漸下降，數(shù)據(jù)無顯著性差異。香附四物湯醇提液組0 min后十二指腸給香附四物湯醇提液3倍臨床量后子宮血流逐漸上升，在60～70 min達(dá)到峰值，隨后逐漸回落，數(shù)據(jù)無顯著性差異。少腹四物湯醇提液組0 min后十二指腸給少腹四物湯醇提液3倍臨床量后子宮血流有所下降，40～50 min下降到最低值，隨后又上升，60～70 min達(dá)到峰值，隨后逐漸平緩，數(shù)據(jù)無顯著性差異。桃紅四物湯醇提液組0 min后十二指腸給桃紅四物湯醇提液3倍臨床量后子宮血流逐漸上升，在20～30 min達(dá)到峰值有顯著性差異，隨后子宮血流又回落。各方醇溶液均有促進(jìn)子宮血流作用，桃紅四物湯組顯著促進(jìn)給藥后的子宮血流速度。見表4。

2.3 四物湯及其加減方水提液與醇提液之間的比較 分別將水提液、醇提液子宮血流的峰值減去給藥前大鼠正常子宮血流值再比上大鼠子宮血流峰值進(jìn)行比較。子宮血流變化率(%)=(子宮血流峰值－給藥前子宮血流值)/給藥前子宮血流值×%。各方水提液組和醇沉上清液組子宮血流變化率較正常對(duì)照組顯著提高，而各方水提液子宮血流變化率與各方醇沉上清液組相比雖然提高，但無顯著性差異。見圖1。

3 討 論

中醫(yī)認(rèn)為“不通則痛”可以引發(fā)多種婦科疾病，現(xiàn)采用活血化瘀方劑促進(jìn)子宮血流速度可以治療多種婦科血瘀證。四物湯及類方以補(bǔ)血調(diào)血為主要功用，已廣泛用于臨床。

本研究發(fā)現(xiàn)，與給藥前相比，給予四物湯和芩連四物湯水提液后，顯著促進(jìn)子宮血流速度:給予桃紅四物湯醇沉上清后，顯著促進(jìn)子宮血流速度。與正常對(duì)照組相比，水提液與醇提液各組均對(duì)大鼠子宮血流變化率有增強(qiáng)作用。除桃紅四物湯增加子宮血流變化率與水提液作用強(qiáng)度相似外，其余各組醇提液子宮血流變化率均小于其水提液。從結(jié)果可以看出，由水提液到醇沉上清中可能丟失了某些促進(jìn)子宮血流速度的活性物質(zhì)。因此，四物湯類方可能通過促進(jìn)子宮血流速度，改善子宮缺氧缺血狀態(tài)，發(fā)揮治療痛經(jīng)的作用。

表3 四物湯及其加減方水提液各組各時(shí)段大鼠子宮血流速度比較(±s，mL/s)

表3 四物湯及其加減方水提液各組各時(shí)段大鼠子宮血流速度比較(±s，mL/s)

給藥后時(shí)間 正常對(duì)照組 四物湯組 芩連四物湯組 香附四物湯組 少腹四物湯組 桃紅四物湯組0 min 0.428 2 ±0.057 0.398 4 ±0.069 9 0.419 3 ±0.056 0 0.431 1 ±0.048 6 0.431 2 ±0.071 1 0.429 7 ±0.067 2 10 min 0.485 7 ±0.069 0.472 8 ±0.075 7 0.476 0 ±0.073 7 0.447 5 ±0.059 9 0.462 9 ±0.075 2 0.372 0 ±0.066 1 20 min 0.553 4 ±0.072 0.518 3 ±0.085 8 0.538 8 ±0.081 1 0.485 2 ±0.070 7 0.492 3 ±0.076 5 0.436 1 ±0.067 7 30 min 0.490 0 ±0.059 0.580 0 ±0.109 3 0.443 1 ±0.073 5 0.448 8 ±0.057 5 0.429 2 ±0.039 4 0.524 8 ±0.088 1 40 min 0.513 3 ±0.035 0.583 5 ±0.121 2 0.514 5 ±0.072 0 0.505 6 ±0.080 5 0.429 8 ±0.054 8 0.494 8 ±0.112 9 50 min 0.545 1 ±0.037 0.588 6 ±0.1032 0.529 8 ±0.066 0 0.502 4 ±0.070 1 0.563 2 ±0.094 8 0.559 3 ±0.098 8 60 min 0.522 5 ±0.042 0.550 1 ±0.083 5 0.645 9 ±0.100 0① 0.557 6 ±0.099 0 0.604 8 ±0.123 6 0.579 6 ±0.095 8 70 min 0.536 9 ±0.039 0.545 6 ±0.094 2 0.650 0 ±0.085 2① 0.475 8 ±0.062 2 0.565 8 ±0.079 1 0.643 0 ±0.115 3 80 min 0.608 8 ±0.068 0.616 4 ±0.070 9① 0.568 8 ±0.076 1 0.439 1 ±0.039 2 0.602 2 ±0.114 8 0.556 6 ±0.089 1 90 min 0.503 8 ±0.017 0.470 7 ±0.080 4 0.566 3 ±0.100 2 0.452 7 ±0.079 2 0.607 4 ±0.072 7 0.560 2 ±0.095 0 100 min 0.476 5 ±0.032 0.485 9 ±0.092 2 0.511 6 ±0.040 5 0.410 4 ±0.034 4 0.617 8 ±0.086 3 0.488 3 ±0.078 0 110 min 0.460 4 ±0.034 0.452 9 ±0.069 6 0.512 5 ±0.050 3 0.416 2 ±0.031 9 0.642 6 ±0.092 1 0.499 6 ±0.065 4 120 min 0.489 5 ±0.026 0.556 9 ±0.081 6 0.577 1 ±0.058 7 0.574 8 ±0.070 3 0.526 4 ±0.080 2 0.536 5 ±0.074 0 130 min 0.504 7 ±0.042 0.484 7 ±0.079 7 0.482 2 ±0.049 0 0.595 7 ±0.072 8 0.638 6 ±0.090 6 0.565 4 ±0.052 6 140 min 0.529 0 ±0.030 0.458 5 ±0.071 3 0.542 2 ±0.079 2 0.538 1 ±0.037 0 0.530 0 ±0.084 0 0.499 6 ±0.050 0 150 min 0.529 5 ±0.079 0.523 4 ±0.077 7 0.571 7 ±0.082 3 0.595 8 ±0.067 9 0.503 4 ±0.064 4 0.492 7 ±0.043 8

表4 四物湯及其加減方醇沉上清液各組各時(shí)段大鼠子宮血流速度比較(±s，mL/s)

表4 四物湯及其加減方醇沉上清液各組各時(shí)段大鼠子宮血流速度比較(±s，mL/s)

給藥后時(shí)間 正常對(duì)照組 四物湯組 芩連四物湯組 香附四物湯組 少腹四物湯組 桃紅四物湯組0 min 0.428 2 ±0.057 0.280 7 ±0.043 5 0.275 2 ±0.021 0.322 7 ±0.060 0.419 4 ±0.055 0.235 4 ±0.030 10 min 0.485 7 ±0.069 0.327 2 ±0.063 5 0.297 6 ±0.051 0.347 7 ±0.049 0.471 9 ±0.046 0.301 8 ±0.017 20 min 0.553 4 ±0.072 0.411 3 ±0.119 7 0.329 8 ±0.098 0.360 2 ±0.057 0.433 9 ±0.074 0.333 9 ±0.041 30 min 0.490 0 ±0.059 0.340 9 ±0.052 7 0.280 5 ±0.061 0.380 1 ±0.033 0.432 1 ±0.052 0.415 4 ±0.053①40 min 0.513 3 ±0.035 0.375 8 ±0.077 1 0.318 4 ±0.027 0.401 1 ±0.056 0.357 3 ±0.081 0.376 2 ±0.054 50 min 0.545 1 ±0.037 0.352 5 ±0.075 4 0.388 7 ±0.080 0.415 9 ±0.059 0.291 7 ±0.050 0.342 4 ±0.056 60 min 0.522 5 ±0.042 0.383 8 ±0.071 5 0.371 5 ±0.094 0.460 4 ±0.064 0.385 8 ±0.084 0.340 3 ±0.063 70 min 0.536 9 ±0.039 0.371 4 ±0.087 7 0.380 4 ±0.093 0.512 8 ±0.030 0.462 7 ±0.088 0.392 1 ±0.080 80 min 0.608 8 ±0.068① 0.303 8 ±0.082 2 0.300 5 ±0.051 0.448 2 ±0.068 0.432 5 ±0.056 0.412 9 ±0.104 90 min 0.503 8 ±0.017 0.316 5 ±0.088 5 0.294 8 ±0.066 0.475 9 ±0.080 0.488 3 ±0.041 0.371 9 ±0.101 100 min 0.476 5 ±0.032 0.472 6 ±0.070 2 0.398 1 ±0.126 0.486 0 ±0.091 0.461 0 ±0.051 0.351 6 ±0.075 110 min 0.460 4 ±0.034 0.377 7 ±0.037 0 0.300 6 ±0.076 0.437 0 ±0.051 0.469 6 ±0.083 0.311 3 ±0.058 120 min 0.489 5 ±0.026 0.368 4 ±0.051 6 0.291 3 ±0.060 0.489 9 ±0.066 0.393 6 ±0.038 0.311 9 ±0.048 130 min 0.504 7 ±0.042① 0.435 6 ±0.072 4 0.212 8 ±0.032 0.483 8 ±0.067 0.502 7 ±0.083 0.305 2 ±0.041 140 min 0.529 0 ±0.030 0.423 1 ±0.080 6 0.230 3 ±0.03 1 150 min 0.529 5 ±0.079 0.341 7 ±0.055 6 0.316 9 ±0.02 7

圖1 水提液與醇提液間大鼠子宮血流變化率比較

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