廣棗葉總黃酮的急性毒性作用和鎮(zhèn)靜催眠作用的初步觀察△

董永和 邱 敏 張浩楠 楊玉梅

(包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014060)

廣棗為蒙醫(yī)常用藥材之一，具有行氣活血、養(yǎng)心、安神之功效，主治氣滯血瘀、胸痹作痛、心悸氣短、心神不寧等［1］。經(jīng)初步統(tǒng)計(jì)，內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)共收載內(nèi)服藥101種，含廣棗的制劑就有11種。廣棗的傳統(tǒng)藥用部位是干燥成熟果實(shí)，其提取物廣棗總黃酮(Total Flavones of Choerospondias Axillaris Fructus，TFC)具有明顯的抗心律失常作用、耐缺氧和保護(hù)心肌缺血作用、抑制血小板聚集和改善血液流變學(xué)、并且可以增強(qiáng)小鼠的免疫功能［2－4］。研究發(fā)現(xiàn)，在廣棗葉中也含有總黃酮，即廣棗葉總黃酮(Total Flavones of Choerospondias Axillaris Folium，TFCF)。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察TFCF的急性毒性作用和對(duì)鎮(zhèn)靜催眠作用的影響，為其進(jìn)一步的研究開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑:TFCF(廣東海洋大學(xué)理學(xué)院提供，批號(hào)20070610)，提取物中總黃酮類化合物的含量≥5.00%(g/g)，臨用時(shí)用蒸餾水配成所需濃度。安定(山東省平原制藥廠，批號(hào)H37023039)，臨用時(shí)研磨后用蒸餾水配成所需濃度。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明種小鼠(體重18～22g)，雌雄各半，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào):SCXK(京)2007—0001。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)［5－6］:預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TFCF口服毒性小，無(wú)法測(cè)出半數(shù)致死量。故進(jìn)行最大給藥量實(shí)驗(yàn)。取小鼠40只，隨機(jī)分為對(duì)照組和給藥組，每組20只，雌雄各半。在實(shí)驗(yàn)條件下(恒溫恒濕)喂養(yǎng)3d，給藥前禁食不禁水一夜(12h)。給藥組以70%的TFCF混懸液按20ml·kg－1灌胃給藥，1次/8h×3;對(duì)照組給予等容量的生理鹽水。給藥后即刻觀察小鼠反應(yīng)。常規(guī)飼養(yǎng)，觀察15d。記錄小鼠體重、外觀、食欲、行為活動(dòng)、死亡等情況。

2.2 小鼠自發(fā)活動(dòng)的測(cè)定［7］:小鼠50只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、安定組(0.002g·kg－1)、TFCF 大劑量組(0.4g·Kg－1)、TFCF 中劑量組(0.2g·Kg－1)、TFCF 小劑量組(0.1g·Kg－1)，每組10只，雌雄各半。每只小鼠在程控自主活動(dòng)箱放置1 min后，記錄其2 min內(nèi)的活動(dòng)次數(shù)。小鼠灌胃前禁食不禁水16h，以0.2ml·10g－1灌胃，連續(xù)灌胃給藥7d，1 次/d，末次給藥后的20、40、60、90、120 min 同法復(fù)測(cè)每只小鼠2 min內(nèi)的活動(dòng)次數(shù)。

2.3 戊巴比妥鈉催眠作用［8］

2.3.1 單次給藥實(shí)驗(yàn):小鼠50只，分組同2.2。各實(shí)驗(yàn)組小鼠第一次給藥1h后腹腔注射閾劑量的戊巴比妥鈉50mg·kg－1(0.1mL·10g－1)，以翻正反射的消失至恢復(fù)的時(shí)間為指標(biāo)測(cè)定睡眠時(shí)間。

2.3.2 連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn):小鼠50只，分組同2.2。小鼠灌胃前禁食不禁水16h，連續(xù)灌胃給藥7d，1次/d，給藥1h后腹腔注射閾劑量的戊巴比妥鈉 50mg·kg－1(0.1mL·10g－1)，以翻正反射的消失至恢復(fù)的時(shí)間為指標(biāo)測(cè)定睡眠時(shí)間。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法:實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以(s)表示，應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 TFCF急性毒性作用:給藥后小鼠即開始進(jìn)食，無(wú)異常表現(xiàn)。15d內(nèi)，小鼠活動(dòng)自如，反應(yīng)靈敏，毛色光滑，排便及活動(dòng)均無(wú)異常;食量正常，平均每天進(jìn)食5～7g/只;體重正常增長(zhǎng)，與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，見表1;且無(wú)1例死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)束頸椎脫臼處死小鼠，肉眼觀察心、肝、腦、脾、腎、胃、腸、子宮、睪丸等重要臟器，均無(wú)異常改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算得出小鼠一日的最大給藥量為42g·kg－1。

表1 TFCF對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠體重的影響(±s，n=20)

表1 TFCF對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠體重的影響(±s，n=20)

組別 體重增長(zhǎng)百分率(%)體重(g)給藥前 給藥15d后生理鹽水組19.5 ±3.7 30.5 ±2.0 36.2 TFCF組19.0 ±3.9 29.4 ±2.6 36.0

3.2 TFCF對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響:與自身給藥前比較，TFCF各劑量組小鼠自發(fā)活動(dòng)均顯著下降(P＜0.05或P＜0.01);與同時(shí)段生理鹽水對(duì)照組比較，TFCF大劑量組和中劑量組小鼠自發(fā)活動(dòng)在不同時(shí)間均有下降(P＜0.05或 P ＜0.01)，見表2。

表2 TFCF對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響(±s，n=10)

表2 TFCF對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響(±s，n=10)

注:與同時(shí)段生理鹽水對(duì)照組同時(shí)刻比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;同組別給藥前后比較，#P ＜0.05、##P ＜0.01

組別小鼠自發(fā)活動(dòng)次數(shù)(次/2min)0min 10min 20min 40min 60min 120min生理鹽水組 7.9 ±0.9 7.6 ±2.7 8.0 ±2.2 8.8 ±1.9 8.2 ±1.8 8.0 ±1.5安定組 7.9 ±0.9 2.3 ±1.5＊＊## 2.1 ±2.0＊＊## 1.3 ±1.0＊＊## 0.5 ±0.7＊＊## 0.8 ±0.6＊＊##TFCF 大劑量組 7.7 ±1.3 3.1 ±0.7＊＊## 3.1 ±0.9＊＊## 2.0 ±0.7＊＊## 1.6 ±0.8*## 1.8 ±1.2*##TFCF 中劑量組 8.0 ±1.2 4.3 ±1.8＊＊## 3.4 ±1.5*## 3.4 ±1.6＊＊## 3.4 ±1.4＊＊## 2.9 ±1.4*##TFCF 小劑量組 8.2 ±1.0 5.6 ±1.5## 5.3 ±0.8## 5.6 ±1.7## 6.1 ±1.0## 6.8 ±1.5#

3.3 TFCF對(duì)小鼠戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響

單次給藥和連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與生理鹽水對(duì)照組比較，各劑量組TFCF對(duì)小鼠戊巴比妥鈉入睡潛伏時(shí)間均有顯著降低(P＜0.05或P＜0.01);而對(duì)小鼠戊巴比妥鈉睡眠持續(xù)時(shí)間，TFCF只有大、中劑量組才能延長(zhǎng)小鼠戊巴比妥鈉的睡眠持續(xù)時(shí)間(P ＜0.05或P ＜0.01)，見表3。

表3 TFCF對(duì)小鼠睡眠時(shí)間的影響(±s，n=10)

表3 TFCF對(duì)小鼠睡眠時(shí)間的影響(±s，n=10)

注:與同組生理鹽水對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

組別單次給藥(min) 連續(xù)給藥(min)入睡潛伏時(shí)間 睡眠持續(xù)時(shí)間 入睡潛伏時(shí)間 睡眠持續(xù)時(shí)間生理鹽水組20.8 ±4.0 188.5 ±83.3 17.4 ±1.7 95.7 ±36.7安定組 6.6 ±1.0＊＊ 307.5 ±39.1＊＊ 5.9 ±1.0＊＊ 155.5 ±30.6＊＊TFCF 大劑量組9.6 ±1.8＊＊ 273.8 ±51.7* 9.9 ±2.1＊＊ 142.3 ±45.4*TFCF 中劑量組10.5 ±2.4＊＊ 249.8 ±26.9*11.8 ±5.5＊＊ 140.5 ±37.8*TFCF 小劑量組 14.2 ±9.6* 244.8 ±49.4 12.9 ±5.5*104.9 ±78.4

4 討論

受藥物濃度和給藥體積的限制，對(duì)小鼠一次灌胃給藥無(wú)法測(cè)出半數(shù)致死量。經(jīng)最大給藥量測(cè)定，小鼠每日口服的最大給藥量為42g·kg－1，提示TFCF口服給藥急性毒性很低，但長(zhǎng)期毒性作用有待于進(jìn)一步研究。本次鎮(zhèn)靜實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)中，TFCF各組均能抑制小鼠自發(fā)活動(dòng)次數(shù);在單次給藥和連續(xù)給藥的實(shí)驗(yàn)中，TFCF均能縮短小鼠睡眠潛伏時(shí)間;只有大、中劑量組的TFCF才能延長(zhǎng)小鼠睡眠持續(xù)時(shí)間。提示廣棗葉總黃酮有鎮(zhèn)靜作用，但并無(wú)疊加性。

此前，不論是國(guó)家藥典還是內(nèi)蒙古成藥標(biāo)準(zhǔn)收載的廣棗及廣棗制劑，都是指廣棗的干燥成熟果實(shí)，即廣棗藥材，而廣棗葉長(zhǎng)期以來(lái)是棄之不用的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TFCF毒性較小，且具有不同程度的鎮(zhèn)靜和催眠作用。廣棗葉是否具有其它藥理作用還有待于進(jìn)一步研究。廣棗葉產(chǎn)量充足，如果能合理開發(fā)應(yīng)用，變廢為寶，必然會(huì)提高廣棗的綜合藥用價(jià)值。

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