不同劑量白頭翁湯微粉對大鼠內(nèi)皮細胞NO分泌的影響

李 志，王金秋，劉 朗

（1.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院畜牧獸醫(yī)系，北京 房山 102442；2.北京伴侶動物醫(yī)院，北京 西城 100035）

白頭翁湯是中醫(yī)治療出血性胃腸炎的經(jīng)典方劑。前期研究表明，白頭翁湯對小鼠內(nèi)毒素癥有很高的保護率，白頭翁湯有效成分對內(nèi)毒素引起的微血管內(nèi)皮細胞NO分泌升高有明顯下調(diào)作用。本試驗利用中藥（生物）細胞破壁技術(shù)加工白頭翁湯微粉，研究了白頭翁湯普粉和白頭翁湯微粉對抗內(nèi)毒素作用，以期為獸醫(yī)臨床應用中藥微粉防治疾病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 DMEM培養(yǎng)基、優(yōu)級胎牛血清（購自Gibco公司）；LPS（E.coli O55:B5，購自Sigma公司）；ET-1及sICAM-1試劑盒（購自R&D公司）；NO試劑盒（購自晶美生物工程有限公司）；七葉亭（標準品，由白求恩醫(yī)科大學中藥研究室提供）。

1.2 試驗細胞準備及處理 試驗使用第5代細胞。將融合生長的內(nèi)皮細胞以0.25%胰蛋白酶消化，細胞懸液接種于96孔細胞培養(yǎng)板，細胞密度5×107cells/L，每孔 500 μL，置 5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞融合成單層細胞，開始試驗。分組：（1）對照組（加含2%血清的維持培養(yǎng)基）；（2）LPS組（1 μg/mL的LPS）；（3）LPS＋七葉亭組（分別用10 μg/mL、5 μg/mL、1 μg/mL預孵2 h后加入1 μg/mL的LPS）；（4）七葉亭組（10 μg/mL七葉亭），每組設(shè)6個重復孔，分別于培養(yǎng)12 h后收集上清液，貯存于-20℃冰箱內(nèi)待測。

1.3 試驗動物及其處理 昆明系小鼠50只，分為正常對照組、內(nèi)毒素癥組、白頭翁湯煎劑組（0.3 mL）、白頭翁湯微粉2/3劑量懸液組（0.2 mL）、白頭翁湯微粉1/3劑量懸液組（0.1 mL），每組10只。小鼠腹腔注射1 mg/mL內(nèi)毒素0.2 mL，同時腹腔注射中藥制劑，觀察死亡率，24 h后小鼠用乙醚麻醉后眼眶采血，血樣用肝素抗凝（血樣:肝素（v:v）=1∶10），4℃保存待測血漿NO水平。

1.4 血清和細胞培養(yǎng)上清液NO含量測定 NO測定采用還原酶法，測試方法均參照試劑盒說明書。

2 結(jié)果

通過SPSS統(tǒng)計軟件分析，白頭翁湯微粉2/3劑量組和1/3劑量組與內(nèi)毒素組相比，極其顯著地降低了內(nèi)毒素引起的內(nèi)皮細胞分泌NO的水平，與白頭翁湯普粉組相比無顯著差異（表1）。

3 討論

中藥制劑傳統(tǒng)粉碎方法的藥物細胞破壁率極低，超微粉碎技術(shù)是近年來剛剛興起的一項高新技術(shù)，對提高中藥藥效，提高中藥藥品質(zhì)量，降低中藥資源浪費與消耗，提高企業(yè)和社會經(jīng)濟效益，都具有十分重要的現(xiàn)實意義和應用價值[1]。已有研究表明，單味中藥和中藥復方經(jīng)超微粉碎后，能促進藥物有效成分的溶出，提高其生物利用率和藥物療效，同時節(jié)省藥材用量，使用小劑量的超微細粉就能達到大劑量傳統(tǒng)粗粉的藥效。

表1 白頭翁湯對微血管內(nèi)皮細胞分泌NO的影響（n=6，X±S）

本試驗以體外培養(yǎng)的腸黏膜微血管內(nèi)皮細胞為模型，建立了LPS損傷模型，研究了白頭翁湯微粉對內(nèi)毒素引起的內(nèi)皮細胞分泌NO增加的影響，結(jié)果白頭翁湯微粉2/3劑量組和1/3劑量組與內(nèi)毒素組相比，極其顯著地降低了內(nèi)毒素引起的內(nèi)皮細胞分泌NO升高，與白頭翁湯普粉組相比無顯著差異。

本試驗結(jié)果證實，白頭翁湯微粉提高療效，降低用量，和其他研究結(jié)果一致[2-4]。中藥超微粉可以提高中藥藥效、降低中藥資源的浪費與消耗，改善中草藥的適口性、提高中醫(yī)藥的研究水平，增加畜禽、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益和社會效益，本試驗可為臨床應用中藥超微粉提高理論依據(jù)。

[1]張瑜，范丙義，張大祿.超微粉碎技術(shù)在中藥加工中的應用與思考[J].中國藥學雜志，2002，37(11):801-802.

[2]杜曉敏，劉璐，何煜.原生藥材超細微粉制劑的藥效學研究[J].中草藥，1999，30(9):680-684.

[3]王愛武，徐濟萍，張敏.當歸散超微粉碎對養(yǎng)血安胎作用的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，11(23):2325-2326.

[4]郭琪，杜曉敏，何煜.單方、復方細胞級粉碎和普通粉碎質(zhì)量對比[J].中成藥，2001，23（1）:70-72.