喉癌組織中survivin和caspase-7的表達(dá)與相關(guān)性研究

張美佳，張愛華，萬 歆，王新安，牟基偉

（佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003）

喉癌是耳鼻喉癌癥中發(fā)生率最高的一種，且喉癌的發(fā)生率還在逐年上升［1］。已有研究證實，喉癌及其他多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展都與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因存在一定的相關(guān)性［2，3］。通過對細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的檢測可以對癌癥的分期分型等工作提供指導(dǎo)和幫助。因此，通過免疫組化法對比不同分期和分級的喉癌組織中survivin與caspase-7的表達(dá)變化，總結(jié)survivin與caspase-7的表達(dá)與喉癌的關(guān)系，對喉癌的檢測和治療具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

收集2011-12～2014-01經(jīng)病理證實的喉癌標(biāo)本72例，及正常喉部黏膜組織10例。其中I期患者2例，Ⅱ期患者14例，Ⅲ期患者27例（T1N1M0患者3例、T2N1M0患者4例、T3N0M0患者20例）Ⅳ期患者29例（T4N2M0患者2例、T4N3M0患 者2例、T4N1M0患 者6例、T4N0M0患 者19例）；聲門上型22例、聲門型41例、聲門下型9例。所有病理均為行放化療治療。

1.2 試劑

Survivin和caspase-7試劑盒均由上海生工公司提供。

1.3 檢測步驟

嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，對材料進(jìn)行取材、固定、包埋及脫水脫蠟等操作；使用3%H2O2孵育樣品10min，滅活內(nèi)源性過氧化物酶；使用PBS 沖洗樣品后滴加封閉液孵育15min；滴加一抗，4℃過夜；使用PBS沖洗樣品后滴加二抗，37℃孵育15min；使用PBS沖洗樣品后滴加DAB顯色液，避光孵育5min。

1.4 結(jié)果判定

顯微鏡下觀察不同樣品的染色強(qiáng)度，survivin和caspase-7染色陽性細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)以黃色或棕黃色為主。對染色層度進(jìn)行計分：無色計0分，淡黃色計1分，黃色計2分，棕黃色計3分。每個樣品隨機(jī)選取5個不重復(fù)事業(yè)，計算陽性細(xì)胞所占比重及陽性計分，無陽性細(xì)胞計0分，0%～10%計1分，10%～50%計2分，50%～75%計3分，＞75%計4分。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析法。P＜0.05為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 survivin和caspase-7在喉癌組織及正常組織中的表達(dá)

survivin及caspase-7在喉癌組織中的陽性率均與喉正常組織存在統(tǒng)計學(xué)極顯著差異（P＜0.01），見表1。

表1 survivin及caspase-7在不同組織中表達(dá)陽性率比較

由上表可知，在兩種蛋白的表達(dá)水平比較中發(fā)現(xiàn)，在喉癌組織中，survivin及caspase-7的表達(dá)陽性率均與喉正常黏膜組織存在極顯著差異（P＜0.01），其中survivin表達(dá)量顯著增加，caspase-7 表達(dá)量顯著降低。提示，survivin 及caspase-7的表達(dá)與喉癌的發(fā)生具有相關(guān)性。

2.2 survivin及caspase-7在喉癌組織中的表達(dá)與喉癌分級分期的關(guān)系

不同的喉癌的發(fā)生部位及不同分化程度喉癌組織中survivin及caspase-7的陽性率均存在顯著差異，見表2。

表2 survivin及caspase-7在喉癌組織中的表達(dá)與病理參數(shù)關(guān)系

由上表可知，survivin及caspase-7的陽性率在不同發(fā)病部位及不同臨床分期均具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05，P＜0.01）。在不同部位的喉癌類型比較中發(fā)現(xiàn)，聲門下型的survivin陽性率最高而聲門型最低；而在caspase-7陽性率的比較發(fā)現(xiàn)，其在聲門型中的表達(dá)率最高，而聲門上型的表達(dá)率最低。在不同臨床分期的比較中發(fā)現(xiàn)，隨著臨床分期的升高，survivin的陽性率也隨之升高，而caspase-7則呈現(xiàn)相反的趨勢，隨著病情的嚴(yán)重，表達(dá)率逐漸下降。

2.3 survivin及caspase-7表達(dá)的相關(guān)性

在喉癌組織中，survivin及caspase-7的表達(dá)具有顯著相關(guān)性（r=0.631，P＜0.05），兩者呈負(fù)相關(guān)，見表3。

表3 survivin及caspase-7在喉癌組織中的表達(dá)相關(guān)性

由上表可知，survivin的表達(dá)與caspase-7的表達(dá)負(fù)相關(guān)，在喉癌組織中survivin陽性而caspase-7陰性的概率最高，說明在喉癌組織中普遍呈現(xiàn)survivin表達(dá)而caspase-7不表達(dá)的現(xiàn)象。且證實survivin的表達(dá)與caspase-7 的表達(dá)負(fù)相關(guān)。可作為臨床檢測依據(jù)。

3 討論

目前，對腫瘤的認(rèn)識已得到了巨大的發(fā)展，大部分研究者均認(rèn)為喉癌及其他種類的發(fā)生不僅是細(xì)胞的復(fù)制功能不受調(diào)控導(dǎo)致復(fù)制過快，其發(fā)生也與細(xì)胞凋亡比例降低相關(guān)［4］。Survivin是一種已知的功能最為強(qiáng)大的凋亡一直因子，與多種腫瘤的發(fā)生具有密切關(guān)系［5］。Survivin可抑制細(xì)胞凋亡途徑中的caspase-7蛋白活性發(fā)揮抗凋亡作用，其在多少惡性腫瘤組織中均有表達(dá)，而在正常組織中表達(dá)量極低或不存在表達(dá)［6］。而caspase-7蛋白則是細(xì)胞凋亡途徑中的重要蛋白之一，參與了細(xì)胞凋亡的發(fā)生，當(dāng)caspase-7蛋白的表達(dá)及活性受到抑制時，細(xì)胞凋亡的發(fā)生便會受到抑制［7～9］。目前尚無研究對喉癌組織的Survivin及caspase-7的表達(dá)關(guān)系進(jìn)行研究，僅有對喉癌組織中survivin和VEGF的表達(dá)研究，或其他癌癥中survivin和caspase-7 的研究［10，11］。因此，研究Survivin及caspase-7在喉癌組織中的表達(dá)關(guān)系，對了解喉癌、治療喉癌具有重要意義。

研究證實，喉癌組織中的survivin 蛋白表達(dá)量顯著提高，提示survivin 表達(dá)量的升高可能是喉癌發(fā)生的原因之一，且通過不同臨床分期喉癌組織中survivin表達(dá)量的對比研究發(fā)現(xiàn)，隨著臨床分期的增加，患者survivin的表達(dá)量也隨之增加，這一結(jié)果與其在其他癌癥中的表現(xiàn)相符。而caspase-7的表達(dá)量則是與survivin相反，其在健康人群的喉組織中的檢測率為100%，提示其是細(xì)胞凋亡途徑中的重要組成部分，當(dāng)caspase-7的表達(dá)受到抑制時便會導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。同時，研究對survivin以caspase-7的相關(guān)性研究證實了在喉癌組織中survivin的表達(dá)與caspase-7的表達(dá)負(fù)相關(guān)?？赡艿脑蚴莝urvivin的表達(dá)不僅抑制了caspase-7的活性，同時對caspase-7的表達(dá)產(chǎn)生了負(fù)面影響。

綜上所述，在喉癌組織中Survivin及caspase-7的表達(dá)與在正常組織細(xì)胞中存在有統(tǒng)計學(xué)極顯著差異（P＜0.05）。Survivin與caspase-7 的表達(dá)負(fù)相關(guān)，提示可能是survivin的過量表達(dá)不僅抑制了caspase-7 的活性，不同抑制了caspase-7的表達(dá)，從而導(dǎo)致了癌癥的發(fā)生。

［1］杜靈彬，毛偉敏，陳萬青，等.中國2003～2007年喉癌發(fā)病率和死亡率分析［J］.中華流行病學(xué)雜志，2012，33（4）：395-398

［2］葉飛，黃桂球，傅敏儀，等.SOX2蛋白在喉癌組織中的表達(dá)及臨床意義［J］.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013，27（3）：136-139

［3］YU S，ZHANG G，LI J.Effects of Celecoxib on COX-2Expression and Caspase-3 Activity in Laryngocarcinoma Hep-2 Cells［J］.Journal of Hubei University of Medicine，2011，1：007

［4］Liu J，Sheng W，Xie Y，et al.The in vitro and in vivo antitumor activity of adenovirus-mediated interleukin-24expression for laryngocarcinoma［J］.Cancer Biotherapy and Radiopharmaceuticals，2010，25（1）：29-38

［5］Guo Q，Li Y.Research on the expression of Survivin and PTEN in laryngeal squamous cell carcinoma transplanted on the back sides of nude mice treated by gold throat tablets［J］.Lin chuang er bi yan hou tou jing wai ke za zhi=Journal of clinical otorhinolaryngology，head，and neck surgery，2012，26（24）：1134-1137，1143

［6］Altieri D C.12Survivin［J］.Targeted Therapies in Oncology，2013，197

［7］李珂，郝艷，王建亭，等.Omi／HtrA2和caspase-7在喉癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，42（7）：583-586

［8］Brentnall M，Rodriguez-Menacol L，De Guevara R L，et al.Caspase-9，caspase-3and caspase-7have distinct roles during intrinsic apoptosis［J］.BMC cell biology，2013，14（1）：32

［9］Lamkanfi M，Kanneganti T D.Caspase-7：aprotease involved in apoptosis and inflammation［J］.The International Journal of Biochemistry ＆Cell Biology，2010，42（1）：21-24

［10］白云飛，覃潔，彭詩東.喉癌組織中Survivin和VEGF 的表達(dá)及其臨床意義［J］.中國耳鼻咽喉顱底外科雜志，2012，18（1）：5-9

［11］涂毅，姚峰，魏文，等.乳腺癌中survivin的表達(dá)及其與Caspase-7和腫瘤病理特征的關(guān)系［J］.腫瘤防治研究，2010（1）：70-73