特發(fā)性血小板減少性紫癜患者血小板相關(guān)抗體的表達(dá)及意義

李 杪

沈陽市兒童醫(yī)院內(nèi)科，遼寧沈陽 110032

特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)是血小板減少性紫癜中的一種，也是一種常見的自身免疫性疾病，年發(fā)病率40～60/100萬，主要以皮膚黏膜或內(nèi)臟出血、血小板減少、骨髓巨噬細(xì)胞成熟障礙、血小板生存時(shí)間縮短及抗血小板自身抗體出現(xiàn)及自身抗體介導(dǎo)的破壞性血小板(platelet,PLT)減少為特征[1]。臨床研究發(fā)現(xiàn)部分ITP患者體內(nèi)可檢測(cè)到特異性抗血小板相關(guān)抗體 (platelet associated immunoglobulin，PAIg)，提示PAIg與特發(fā)性血小板減少性紫癜之間具有密切相關(guān)[2,3]，為了解ITP患者患病時(shí)PAIg的表達(dá)及其臨床意義，該院對(duì)2012年1—6月期間該院及周邊醫(yī)院診治的ITP患者PAIg進(jìn)行了測(cè)定，評(píng)價(jià)其在ITP中的臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院門診及住院ITP患兒40例，包括急性型及慢性型各20例，均為初診患者，在近期未接受過免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素治療，其中男 14例，女 26例，年齡 4～18歲，平均（8.27±3.12）歲。ITP診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)血液學(xué)組推薦的《特發(fā)性血小板減少性紫癜診療建議（修訂草案）》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷[4]。選取同期本院門診進(jìn)行體檢性別及年齡相匹配體檢無異常兒童20例作為對(duì)照人群（對(duì)照組），其中男5例，女15例，年齡 5～18 歲，平均（9.01±2.76）歲。

1.1.1 儀器及試劑 所有儀器為TECAN酶標(biāo)儀，533JZK139508全自動(dòng)血液分析儀，上海太陽生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的血小板抗體檢測(cè)試劑盒。

1.1.2 方法 抽取空腹靜脈血1 mL,分離血清后置-70℃冰箱存儲(chǔ)備用。PAIg(PAIgA、PAIgG)采取酶聯(lián)免疫吸附法（ELTSA法）測(cè)定，測(cè)定方法按照試劑盒操作說明書進(jìn)行操作，參考值PAIgA＜20ng/107PA，PAIgG＜108 ng/107PA。血小板特異性抗體抗血小板膜糖蛋白抗體（GPIIb/IIIa、GPIb/IX）采取單克隆抗體特異性俘獲血小板抗原（MAIPA法）測(cè)定，血小板計(jì)數(shù)使用全自動(dòng)血液分析儀直接測(cè)定。

1.2 統(tǒng)計(jì)方法

全部資料經(jīng)SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用 t檢驗(yàn)，方差分析，各臨床參數(shù)之間的相關(guān)性研究采用多元線性回歸分析法。

2 結(jié)果

2.1 血小板相關(guān)抗體、特異性抗體的表達(dá)及血小板計(jì)數(shù)

血小板相關(guān)抗體 PAIgA、PAIgG、特異性抗體 GPIIb/IIIa、GPIb/IX、血小板計(jì)數(shù)對(duì)照組分別為（4.22±0.78）ng/107PA、（23.17±3.46）ng/107PA、 （0.33±0.01）A 值 、 （0.31±0.01）A 值 、 （137.82±42.37）×109/L，ITP 組 分 別 為 （45.58±5.32）ng/107PA、 （243.34±12.21）ng/107PA、 （0.42±0.06）A 值 、 （0.41±0.05）A 值 、 （35.50±21.35）×109/L，兩組以上各項(xiàng)指標(biāo)之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 見表 1。

表1 血小板相關(guān)抗體的表達(dá)及血小板計(jì)數(shù)（）

表1 血小板相關(guān)抗體的表達(dá)及血小板計(jì)數(shù)（）

組別PAIgA（ng/107PA）PAIgG（ng/107PA）GPIIb/IIIa（A值）GPIb/IX（A值）血小板計(jì)數(shù)（×109/L）對(duì)照組(n=20)ITP組(n=40)t值P值4.22±0.7845.58±5.3234.44<0.0523.17±3.46243.34±12.2178.77<0.050.33±0.010.42±0.066.63<0.050.31±0.010.41±0.058.82<0.05137.82±42.3735.50±21.3512.49<0.05

2.2 相關(guān)結(jié)果分析

ITP組血小板計(jì)數(shù)與特異性抗體GPIIb/IIIa、GPIb/IX進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示血小板計(jì)數(shù)與特異性抗體GPIIb/IIIa、GPIb/IX之間具有負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.24（P<0.05）、-0.31（P<

0.05 ）。

3 討論

ITP作為免疫性疾病，其與自身血小板抗體的產(chǎn)生密切相關(guān)，在50年前Harrington就已經(jīng)研究分析ITP患者存在抗血小板膜抗體的存在。血小板表明存在多種抗原，因此抗體也表現(xiàn)較為復(fù)雜，一般來說包括血小板相關(guān)抗原及特異性抗原兩大類，因此抗體也主要有相關(guān)性抗體及特異性抗體，其中相關(guān)性抗體主要為PAIgA、PAIgG、PAIgM，特異性抗體主要有GPIIb/IIIa、GPIb/IX、IV、V等，目前臨床上對(duì)ITP患者進(jìn)行血小板抗體的檢測(cè)研究較多，各種檢測(cè)方法均有一定優(yōu)勢(shì)[5-6]。為了探討血小板抗體在ITP中的表達(dá)，該院進(jìn)行了相關(guān)研究。

血小板抗體多數(shù)是依賴于輔助性T淋巴細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，其輔助性T淋巴細(xì)胞對(duì)血小板是否產(chǎn)生抗體起到關(guān)鍵作用，其還能對(duì)抑制性T淋巴細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)和抑制性細(xì)胞因子進(jìn)行調(diào)控。血小板抗體可通過其Fab端與血小板膜糖蛋白或巨噬細(xì)胞相結(jié)合，并且激活單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)影響血小板破壞[7]。有學(xué)者試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)兒童ITP患者血漿中巨核細(xì)胞增多，并且存在血小板抗體及血小板功能抑制，而正常對(duì)照組無此種現(xiàn)象存在[8]。該院采用ELTSA法、MAIPA法分別測(cè)定了ITP患者及正常對(duì)照組血小板抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ITP患者其血小板相關(guān)抗體PAIgA、PAIgG及特異性抗體GPIIb/IIIa、GPIb/IX均明顯較對(duì)照組升高，血小板計(jì)數(shù)明顯減少，對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果在正常范圍內(nèi)，提示ITP患者血小板相關(guān)抗體及特異性抗體均有陽性表達(dá)。臨床上研究認(rèn)為ELTSA法測(cè)定血小板抗體雖然靈敏性高但是特異性較低，雖然能測(cè)定出血小板機(jī)體總量，但是無法確定是免疫性還是非免疫性因素導(dǎo)致，并且在測(cè)定結(jié)果容易受到年齡、循環(huán)免疫復(fù)合物等因素的影響導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果誤差值較大，因此臨床上更多學(xué)者傾向于測(cè)定特異性抗體GPIIb/IIIa、GPIb/IX等的表達(dá)[9]。目前對(duì)于特異性抗體GPIIb/IIIa、GPIb/IX的檢測(cè)方法以MAIPA法最為常用，并且相對(duì)是臨床上最先進(jìn)和特異性最高、靈敏度高的檢測(cè)方法，能對(duì)血小板上微量的抗原也能進(jìn)行檢測(cè)，臨床研究發(fā)現(xiàn)其特異性抗原高達(dá)97%，陽性預(yù)測(cè)值在96%[10]，因此使用MAIPA法檢測(cè)血小板特異性抗體具有很高的臨床價(jià)值。而該院采取了ELTSA法、MAIPA法兩種方法進(jìn)行了血小板相關(guān)抗體及特異性抗體檢測(cè)，均發(fā)現(xiàn)血小板抗體在ITP患兒中有異常表達(dá)，ITP組血小板計(jì)數(shù)與特異性抗體GPIIb/IIIa、GPIb/IX進(jìn)行相關(guān)性分析顯示具有負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步說明血小板計(jì)數(shù)與病情嚴(yán)重程度、特異性血小板抗體密切相關(guān)。

該研究結(jié)果顯示，在ITP患兒中血小板相關(guān)抗體及特異性抗體均有明顯升高，呈現(xiàn)陽性表達(dá)，并且聯(lián)合檢測(cè)有助于鑒別免疫性與非免疫性血小板減少型紫癜，能提高早期診斷率，并且有助于指導(dǎo)臨床治療。

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