懸浮紅細(xì)胞與去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞溶血率在貯存期的比較

劉延玲

山東省萊蕪市中心血站總務(wù)科，山東萊蕪 271100

隨著目前獻(xiàn)血宣傳工作的強(qiáng)化,人民獻(xiàn)血意識(shí)的增強(qiáng)，我國(guó)的獻(xiàn)血量在逐年的增加，為了保證這些血液能安全有效的應(yīng)用于臨床，必須對(duì)血液的貯存加強(qiáng)管理。而貯存期溶血現(xiàn)象的發(fā)生是貯存面臨的主要問(wèn)題，所謂的溶血是紅細(xì)胞膜因各種內(nèi)在或外界的原因受損使其細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白流出，導(dǎo)致血液成分破壞，血液顏色加深。當(dāng)溶血率達(dá)到一定值時(shí)嚴(yán)重的影響臨床用血，對(duì)輸血患者有潛在的隱患，依據(jù)臨床數(shù)據(jù)顯示血液貯存期越長(zhǎng)其溶血現(xiàn)象越容易發(fā)生[1]。而臨床用血主要有全血、去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞血液、懸浮紅細(xì)胞血液，血為液中的白細(xì)胞會(huì)引起很多疾病，也是多種疾病的熱源，所以國(guó)外大都采用去白細(xì)胞紅細(xì)胞懸浮液[2]，能夠進(jìn)一步的確保臨床用血的安全性，但有部分文獻(xiàn)報(bào)道[3]去白細(xì)胞的過(guò)程會(huì)增加溶血的風(fēng)險(xiǎn)，為了探討不同血液在貯存期的溶血率，為臨床貯存用血提供參考指標(biāo)，該研究于2013年3—8月該站收集的90袋每袋200 mL的血液，將同等樣本血液通過(guò)不同分離及過(guò)濾方法，分析其溶血率的變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

一次性的200 mL去白細(xì)胞過(guò)濾血袋（上海輸血技術(shù)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥管械（準(zhǔn))字：20023661071號(hào)）60套，由南京賽爾金生物醫(yī)學(xué)有限公司提供的普通血液四聯(lián)血袋（國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2004第3660460號(hào)）90套，低溫操作臺(tái)、離心機(jī)、無(wú)菌操作臺(tái)、4度血液冷藏柜（北京福意電器有限公司，型號(hào) FYL-YS-66L），紅細(xì)胞保存液，簡(jiǎn)稱MAP（主要成分包括枸櫞酸鹽、枸櫞酸、葡萄糖、腺嘌呤、磷酸鹽等）。

1.2 方法

1.2.1 去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞血液的制備I組 應(yīng)用一次性200ml普通血液四聯(lián)袋采集2012年4月—10月的全血30袋，放入4度冰箱中12 h，冰箱的溫度為（4±2）℃，12 h后在無(wú)菌環(huán)境下用離心機(jī)離心15 min，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為 2820轉(zhuǎn)/min，靜止后去除上層溶液，在低溫環(huán)境中按照白細(xì)胞過(guò)濾血袋操作，操作環(huán)境均為無(wú)菌環(huán)境，空氣經(jīng)過(guò)紫外線殺菌，地面經(jīng)過(guò)氧乙酸消毒，操作中手均用75%的酒精消毒，實(shí)驗(yàn)過(guò)濾后加入MAP保存液可得去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞液。將此方法得到的血液標(biāo)記為去白懸紅I組。

1.2.2 去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞血液制備II組 應(yīng)用一次性200 mL普通血液四聯(lián)袋采集2012年4月—10月的全血30袋，放入4度冰箱中12 h，冰箱的溫度為（4±2）℃，12 h后在低溫?zé)o菌環(huán)境中按照白細(xì)胞過(guò)濾血袋操作將全血進(jìn)行過(guò)濾，然后將溶液繼續(xù)放入離心機(jī)中離心15 min，靜止后去除上層液，加入MAP保存液，可得去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞液。將此方法得到的血液標(biāo)記為去白懸紅II組。

1.2.3 懸浮紅細(xì)胞制備 應(yīng)用一次性200 mL普通血液四聯(lián)袋采集2012年4月—10月的全血40袋，放入4℃冰箱中 12 h，冰箱的溫度為（4±2）℃，12 h后在無(wú)菌環(huán)境下用離心機(jī)離心15 min，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為2820轉(zhuǎn)/min，靜止后去除上層溶液，加入MAP保存液可得去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞液。

1.3 樣品檢測(cè)

分別在7、14、21、28 d從4℃冰箱中采取三組的血液樣本，利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定每個(gè)樣品中紅細(xì)胞比容、血紅蛋白含量，游離紅細(xì)胞蛋白的含量用鄰甲聯(lián)苯胺法測(cè)定 。計(jì)算公式：紅細(xì)胞溶血率（%）=游離紅細(xì)胞蛋白濃度 ×容量×（1－紅細(xì)胞比容）×100/血紅蛋白濃度×容量 ×100

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

統(tǒng)計(jì)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行處理，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）形式表示，計(jì)量資料采用 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.13 組樣品貯存期游離紅細(xì)胞蛋白的比較

3組經(jīng)過(guò)7、14、21、28 d后分別檢查其血液中游離紅細(xì)胞蛋白數(shù)，去白懸紅I組與去白懸紅II組的游離紅細(xì)胞蛋白數(shù)目都高于紅細(xì)胞懸浮組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,去白懸紅I組與去白懸紅II組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,見(jiàn)表1。2.23組樣品貯存期溶血率的比較

表1 紅細(xì)胞懸浮組與去白兩組游離紅細(xì)胞蛋白的比較[（），g/L]

表1 紅細(xì)胞懸浮組與去白兩組游離紅細(xì)胞蛋白的比較[（），g/L]

注：與紅細(xì)胞懸浮組比◇t=12.412,7.924,11.221,8.910,◇P<0.01;□t=10.521,8.412,13.514,9.310，□P＜0.05；與去白紅懸 II比較，*P＞0.05 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

時(shí)間 紅細(xì)胞懸浮組 去白懸紅I 去白懸紅II第7天第14天第21天第28天0.18±0.170.33±0.220.47±0.290.71±0.34（0.41±0.34）◇*（0.60±0.46）◇*（0.78±0.46）◇*（1.30±0.69）◇*（0.36±0.24）□（0.65±0.41）□（1.02±0.59）□（1.38±0.62）□

3組血液分別在7、14、21、28 d取樣計(jì)算其溶血率，去白懸紅I組與去白懸紅II組的溶血率都高于紅細(xì)胞懸浮組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,去白懸紅I組與去白懸紅II組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表 2。

表2 紅細(xì)胞懸浮組與去白兩組不同時(shí)期溶血率的比較（）

表2 紅細(xì)胞懸浮組與去白兩組不同時(shí)期溶血率的比較（）

注：P1為紅細(xì)胞懸浮組與去白懸紅I比較，P2為紅細(xì)胞懸浮組與去白懸紅II組比較，P3為去白懸紅I與去白懸紅II比較。

時(shí)間 紅細(xì)胞懸浮組 去白懸紅I 去白懸紅II P第7天0.59±0.020.14±0.090.10±0.06第14天0.11±0.070.20±0.130.21±0.10第21天0.13±0.080.24±0.140.32±0.16第28天0.21±0.110.10±0.220.41±0.18 P1=0.047 P2=0.010 P3=0.035 P1=0.022 P2=0.015 P3=0.043 P1=0.035 P2=0.039 P3=0.040 P1=0.001 P2=0.001 P3=0.042

3 討論

由于人體白細(xì)胞抗原的抗原性不強(qiáng)，特別是特殊體質(zhì)人群，如孕婦、多次輸血者、白血病、和非鐵血貧血者、臟器移植患者等體內(nèi)可產(chǎn)生一定量的白細(xì)胞凝聚素[3]，這些人群中的凝聚素具有特異性，和自己體內(nèi)的白細(xì)胞不會(huì)發(fā)生凝聚反應(yīng)，但對(duì)外界輸入體內(nèi)的血液會(huì)發(fā)生凝聚反應(yīng)，多數(shù)患者有發(fā)熱和過(guò)敏的臨床表現(xiàn)，過(guò)敏反應(yīng)多為尊麻疹或斑丘疹，為了降低輸血后的臨床不良反應(yīng)事件，臨床上有在輸血前可以靜脈注射地塞米松，但有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)輸血前注射地塞米松并不能有效的降低不良反應(yīng)，如果發(fā)生麻疹等過(guò)敏反應(yīng)可注射撲爾敏50 mg或者25 mg苯海拉明，嚴(yán)重者應(yīng)該馬上停止輸血，靜脈滴注或者肌肉注射腎上腺，但這些藥物的應(yīng)用對(duì)特殊體質(zhì)人群還需要慎重用藥，且這些藥物的注射不能直接同輸血靜脈注射，需要另一靜脈注射，也給患者再次輸血帶來(lái)很大心理障礙，所以提高血漿質(zhì)量預(yù)防不良反應(yīng)在臨床上顯得尤為重要。目前應(yīng)用最廣泛的是將血液中的白細(xì)胞過(guò)濾掉[4]，有研究報(bào)道只要將血漿中75%的白細(xì)胞去掉就可以降低不良反應(yīng)的發(fā)生[5]。但血站有報(bào)告顯示去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞血液在保存期會(huì)出現(xiàn)溶血的現(xiàn)象，可能與過(guò)濾過(guò)程造成紅細(xì)胞膜受損有關(guān)，也可能過(guò)濾儀器的型號(hào)、和操作人員的技術(shù)有影響[6-10]。有研究表明在過(guò)濾過(guò)程中一些紅細(xì)胞變形能力較差剛能通過(guò)濾膜，再通過(guò)過(guò)程中紅細(xì)胞膜就會(huì)和過(guò)濾器間產(chǎn)生較大的摩擦，使得其結(jié)構(gòu)受損，穩(wěn)定性降低在存儲(chǔ)中壽命較短，也有操作不當(dāng)，如過(guò)濾前過(guò)早的對(duì)血漿品進(jìn)行震蕩、或者劇烈搖晃導(dǎo)致部分細(xì)胞受損，容易破裂[11]。

根據(jù)該研究結(jié)果，兩組經(jīng)過(guò)去白過(guò)濾的血液（去白懸紅I、去白懸紅II）溶血率都高于未經(jīng)過(guò)去白過(guò)濾的紅細(xì)胞懸浮組，所以證明去白過(guò)程中確實(shí)可以破壞部分紅細(xì)胞，使得溶血率升高，但是去除白細(xì)胞的兩組溶血率也都低于0.8%,歐盟新標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定在貯存期血液溶血率＜0.8%作為溶液的參照指標(biāo)[12]，所以該結(jié)果符合臨床用血的要求。而不同過(guò)濾流程得到的去白懸浮紅細(xì)胞液的兩組溶血率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)合該研究結(jié)果可得出去懸浮紅細(xì)胞血漿更適合長(zhǎng)期保存，因?yàn)槠淙苎实停獫{中游離血紅蛋白少，但據(jù)臨床反應(yīng)會(huì)有一定的不良反應(yīng)[13-16]，所以此方法適合長(zhǎng)時(shí)間貯備的應(yīng)急血液，但給患者輸血時(shí)候應(yīng)該主意觀察患者反應(yīng)。去白懸浮紅細(xì)胞血漿更適于短期保存，雖然其溶血率偏高，但是卻在合理的范圍內(nèi)，切能夠減少臨床不良反應(yīng)時(shí)間的發(fā)生，可以更好的應(yīng)用臨床。所以該研究認(rèn)為可以再加強(qiáng)過(guò)濾技術(shù)后，在短期保存期內(nèi)盡早的用于輸血患者，可以更好的保證用血的安全，同時(shí)也降低了輸血患者不良反應(yīng)后再次注射藥物的傷害。

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