• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    太平洋牡蠣酪氨酸酶基因家族的系統(tǒng)發(fā)生分析

    2014-11-17 06:42:30于雪于紅孔令鋒李琪
    遺傳 2014年2期
    關(guān)鍵詞:跨膜進(jìn)化樹酪氨酸

    于雪,于紅,孔令鋒,李琪

    中國海洋大學(xué)海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,青島 266003

    酪氨酸酶是含銅金屬酶,廣泛分布于微生物、動物、植物及人體中,是黑色素生物合成的關(guān)鍵酶,可以催化兩個(gè)反應(yīng):催化L-酪氨酸羥基化轉(zhuǎn)變?yōu)長-多巴和氧化 L-多巴形成多巴醌,多巴醌經(jīng)過一系列反應(yīng)后形成黑色素[1,2]。黑色素合成在生物體中具有重要的生理功能,人類遺傳病如白化病、白癜風(fēng)、耳聾都與黑色素合成中的一個(gè)或多個(gè)相關(guān)基因的突變有關(guān)[3]。酪氨酸酶在無脊椎動物先天免疫防御中也起著重要的作用[4,5]。酪氨酸酶還參與昆蟲蛻皮后角質(zhì)的硬化以及軟體動物卵囊、足絲、角質(zhì)層的形成等多種生理反應(yīng)[6~10]。

    目前,軟體動物中關(guān)于酪氨酸酶的研究主要集中在基因克隆、分離和酶活性分析等方面[8,9,12~15],關(guān)于酪氨酸酶進(jìn)化方面的分析較少。通過對后生動物酪氨酸酶的進(jìn)化分析,根據(jù)系統(tǒng)進(jìn)化樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),可將酪氨酸酶分為刺胞動物和原肢類酪氨酸酶、頭索和半索動物酪氨酸酶類似蛋白、脊索動物酪氨酸酶家族和酪氨酸酶相關(guān)蛋白[2]。大部分后生動物中,不同物種的酪氨酸酶和酪氨酸酶類似蛋白存在獨(dú)立的基因擴(kuò)張現(xiàn)象[2]。Felipe等[16]根據(jù)組氨酸排列順序?qū)⒗野彼崦阜譃閍亞型、b亞型、g亞型,并認(rèn)為a亞型是最原始類型。然后經(jīng)過兩次復(fù)制:第一次復(fù)制,早于單纖毛真核生物的分化,分化出了b亞型即胞內(nèi)型; 第二次復(fù)制,早于動物的分化,分化出g亞型即跨膜結(jié)構(gòu)域型。分化出的多細(xì)胞真核生物中有酪氨酸酶亞型缺失現(xiàn)象,即一種或兩種亞型缺失,留下的亞型進(jìn)行線性擴(kuò)張[16]。以上均是針對不同物種酪氨酸酶基因家族的系統(tǒng)進(jìn)化研究,但是對某個(gè)物種中線性擴(kuò)張的酪氨酸酶基因家族的研究還未見報(bào)道。例如,合浦珠母貝(PinctadafucataGould)中已發(fā)現(xiàn)并克隆了3個(gè)酪氨酸酶基因[8,9],但這些酪氨酸酶的類型以及與其他物種酪氨酸酶的進(jìn)化關(guān)系等問題仍然有待探索。

    太平洋牡蠣(Crassostrea gigasThunberg)亦稱長牡蠣,隸屬軟體動物門雙殼綱(Bivalvia),是世界上養(yǎng)殖范圍最廣、養(yǎng)殖產(chǎn)量最大的經(jīng)濟(jì)貝類。根據(jù)FAO統(tǒng)計(jì),2011年太平洋牡蠣世界總產(chǎn)量達(dá)到63.7萬噸(http://www.fao.org/fishery/species/3514/en)。2012 年,太平洋牡蠣基因組測序完成,共發(fā)現(xiàn)26個(gè)酪氨酸酶基因,存在基因擴(kuò)張現(xiàn)象[11]。

    本研究對相關(guān)數(shù)據(jù)庫中的太平洋牡蠣和其他一些物種的酪氨酸酶序列進(jìn)行收集整理、同源比對以及聚類分析,探討了太平洋牡蠣酪氨酸酶基因家族的分類、演化,旨在為太平洋牡蠣酪氨酸酶基因家族的理論研究和實(shí)際應(yīng)用提供基礎(chǔ)資料,為軟體動物酪氨酸酶家族的深入研究奠定基礎(chǔ)。

    1 材料和方法

    1.1 酪氨酸酶氨基酸序列的獲取

    太平洋牡蠣酪氨酸酶 tyr19 基因序列已由本實(shí)驗(yàn)室克隆獲得(于雪,未發(fā)表),其余酪氨酸酶基因序列從太平洋牡蠣基因組數(shù)據(jù)庫(http://www.oysterdb.cn/)下載獲得。合浦珠母貝酪氨酸酶基因序列從其基因組數(shù)據(jù)庫(http://marinegenomics.oist.jp/genomes/)下載獲得,其他分別隸屬于脊索動物門、軟體動物門、環(huán)節(jié)動物門、扁形動物門、線蟲動物門和腔腸動物門的17個(gè)物種的酪氨酸酶從NCBI下載獲得,相關(guān)信息見表1。

    表1 序列來源及登錄號

    續(xù)表1

    1.2 太平洋牡蠣酪氨酸酶基因結(jié)構(gòu)分析

    太平洋牡蠣酪氨酸酶所在Scaffold、基因組位置等信息從太平洋牡蠣基因組序列數(shù)據(jù)庫(http://www.oysterdb.cn/)獲得。

    1.3 太平洋牡蠣酪氨酸酶基因氨基酸序列分析

    使用 SMART軟件(http://smart.embl-heidelberg.de/)分析并選取酪氨酸酶的保守結(jié)構(gòu)域; 用 SignalP 4.0 和 Cholorop 1.1[17,18]對酪氨酸酶信號肽進(jìn)行預(yù)測; 用TMHMM 2.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)預(yù)測酪氨酸酶跨膜結(jié)構(gòu)域; 用 ClustalX 1.83軟件[19]對太平洋牡蠣酪氨酸酶的保守結(jié)構(gòu)域進(jìn)行多重比對分析。

    1.4 太平洋牡蠣酪氨酸酶基因的進(jìn)化分析

    太平洋牡蠣酪氨酸酶的保守結(jié)構(gòu)域的多重比對在 ClustalX1.83[19]中進(jìn)行,利用 MEGA5.0[20]采用鄰接法(Neighbor-joining method,NJ)并自舉(Bootstrap)1000次計(jì)算置信值。不同物種酪氨酸酶的保守結(jié)構(gòu)域序列的多重比對也在 ClustalX1.83 中進(jìn)行。用MrBayes 3.2[21]構(gòu)建貝葉斯系統(tǒng)發(fā)生樹。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 太平洋牡蠣酪氨酸酶基因所在Scaffold分析

    通過太平洋牡蠣基因組數(shù)據(jù)分析,獲得具有較完整酪氨酸酶結(jié)構(gòu)域的酪氨酸酶基因21個(gè),分布于14個(gè)Scaffold上(圖1)。其中,Scaffold 867上分布的酪氨酸酶基因最多,為4個(gè); Scaffold43702有3個(gè);Scaffold552和Scaffold337各有2個(gè); Scaffold248、Scaffold203、Scaffold483、Scaffold552、Scaffold557、Scaffold612、Scaffold1155、Scaffold1220、Scaffold1719、Scaffold1891和 Scaffold4314均含有一個(gè)酪氨酸酶基因。

    圖1 太平洋牡蠣酪氨酸酸酶基因家族所在Scaffold分析(數(shù)字代表兩個(gè)基因間的距離)

    2.2 太平洋牡蠣酪氨酸酶的分類與保守區(qū)域分析

    所有物種的酪氨酸酶都具有酪氨酸酶保守結(jié)構(gòu)域,酪氨酸酶保守結(jié)構(gòu)域都包含兩個(gè)保守銅離子結(jié)構(gòu)域Cu(A) 和 Cu(B)。太平洋牡蠣酪氨酸酶基因家族中,包括3種類型的酪氨酸酶。tyr5、tyr11、tyr12、tyr17、tyr18為分泌型(Type A); tyr1、tyr2、tyr3、tyr4、tyr9、tyr13、tyr14、tyr15、tyr16、tyr20、tyr21 為胞內(nèi)型(Type B)。tyr6、tyr7、tyr8、tyr10、tyr19 為具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶(Type C)。太平洋牡蠣酪氨酸酶保守結(jié)構(gòu)域序列比對分析表明,除 tyr9外其他酪氨酸酶都包含6個(gè)保守的組氨酸(圖2)。

    2.3 太平洋牡蠣酪氨酸酶的系統(tǒng)進(jìn)化

    太平洋牡蠣酪氨酸酶的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析見圖 3,其酪氨酸酶基因?yàn)槎嗫截惢?21個(gè)酪氨酸酶基因中有9對同源基因存在基因重復(fù)現(xiàn)象(tyr1和tyr21,tyr2和tyr9,tyr3和tyr13,tyr4和tyr5,tyr7和tyr10,tyr11和tyr14,tyr12和tyr17,tyr19和tyr20),其中4對同源基因(tyr12和tyr17,tyr11和tyr14,tyr4和tyr5,tyr19和tyr20)屬于基因內(nèi)復(fù)制,位于相同的Scaffold,其余5對同源基因(tyr1和tyr21,tyr2和tyr9,tyr3和tyr13,tyr7和 tyr10,tyr15和 tyr16)均位于不同的Scaffold,可能屬于基因間的重復(fù)。

    圖2 太平洋牡蠣酪氨酸酶Cu(A)和Cu(B)結(jié)合域的比對

    太平洋牡蠣分泌型酪氨酸酶的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析見圖 4。太平洋牡蠣所有分泌型酪氨酸酶首先與頭足類分泌型酪氨酸酶聚在一起,然后與隱秀麗線蟲分泌型酪氨酸酶聚在一起。海葵和水螅分泌型酪氨酸酶單獨(dú)聚為一支,與太平洋牡蠣、頭足類、隱秀麗線蟲分泌型酪氨酸酶分化較大。

    太平洋牡蠣胞內(nèi)型酪氨酸酶 tyr1、tyr2、tyr9、tyr15、tyr16與合浦珠母貝胞內(nèi)型酪氨酸酶聚為一支,與鹿角珊瑚、舌囊蟲、大乳頭水螅和??麅?nèi)型酪氨酸酶分化較大(圖 5A)。太平洋牡蠣胞內(nèi)型酪氨酸酶tyr3、tyr11、tyr13和tyr14與羅阿絲蟲、秀麗新小桿線蟲胞內(nèi)型酪氨酸酶聚為一支,與華枝睪吸蟲、文昌魚、??痛笕轭^水螅的胞內(nèi)型酪氨酸酶分化較大(圖5B)。

    太平洋牡蠣具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶 tyr6、tyr7、tyr8、tyr10、tyr19與合浦珠母貝具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶聚在一起,與其他具有跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶種類分化較大(圖6)。

    圖3 太平洋牡蠣酪氨酸酶基因家族的系統(tǒng)進(jìn)化樹

    圖4 分泌型酪氨酸酶系統(tǒng)進(jìn)化樹

    3 討 論

    Felipe等[17]按照組氨酸排列將酪氨酸酶分成 α亞型、β亞型、γ亞型,并認(rèn)為α亞型全部含有信號肽,為分泌型。通過研究太平洋牡蠣酪氨酸酶基因家族發(fā)現(xiàn),雖然太平洋牡蠣酪氨酸酶在組氨酸排列上屬于 α亞型,但類型多樣,不僅包括具信號肽的分泌型酪氨酸酶,還包括胞內(nèi)型酪氨酸酶和具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶,說明 α亞型酪氨酸酶結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。Sugumaran[22]認(rèn)為無脊椎動物中的酪氨酸酶缺乏跨膜結(jié)構(gòu)域。但是通過分析發(fā)現(xiàn)環(huán)節(jié)動物門,扁形動物門和軟體動物門的某些酪氨酸酶均含有跨膜結(jié)構(gòu)域。本研究說明無脊椎動物酪氨酸酶的多樣性及復(fù)雜性。太平洋牡蠣和合浦珠母貝具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶保守結(jié)構(gòu)域的所在位置不同于脊索動物門、環(huán)節(jié)動物門和扁形動物門具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶。這些物種的跨膜結(jié)構(gòu)域分布在 C末端,而太平洋牡蠣及合浦珠母貝的跨膜結(jié)構(gòu)域分布在N末端與信號肽重疊,而且有些類型只具有跨膜結(jié)構(gòu)域而沒有信號肽。這可能導(dǎo)致了太平洋牡蠣以及合浦珠母貝具跨膜結(jié)構(gòu)域類型與脊索動物門,環(huán)節(jié)動物門和扁形動物門具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶的分化較大,使得太平洋牡蠣和合浦珠母貝具跨膜結(jié)構(gòu)域酪氨酸酶在進(jìn)化中構(gòu)成一獨(dú)立分支。

    圖5 胞內(nèi)型酪氨酸酶系統(tǒng)進(jìn)化樹

    圖6 具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶系統(tǒng)進(jìn)化樹

    通過系統(tǒng)發(fā)生分析發(fā)現(xiàn),太平洋牡蠣酪氨酸酶進(jìn)化樹上的分布不僅受保守結(jié)構(gòu)域影響還受基因所在位置影響,如tyr4、tyr21并非分泌型酪氨酸酶,但tyr4與tyr5同位于Scaffold 552,tyr21與tyr17同位于Scaffold 337,仍與太平洋牡蠣分泌型酪氨酸酶聚在一起; tyr11并非太平洋牡蠣胞內(nèi)型酪氨酸酸酶,但與 tyr13、tyr14同位于scaffold 867,在進(jìn)化樹上與太平洋牡蠣胞內(nèi)型酪氨酸酶聚在一起; 太平洋牡蠣 tyr18、tyr20 并非太平洋牡蠣具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酸酶,但與tyr19同位于scaffold 43702,在進(jìn)化樹上與太平洋牡蠣具跨膜結(jié)構(gòu)域型酪氨酸酶聚在一起。以上結(jié)果說明酪氨酸酸酶基因所在位置在一定程度上影響了酪氨酸酶保守結(jié)構(gòu)域的分化,也說明了太平洋牡蠣酪氨酸酶基因分化的復(fù)雜性,存在基因內(nèi)和基因間復(fù)制。

    基因重復(fù)是基因家族數(shù)量增加的主要方式,太平洋牡蠣酪氨酸酶基因家族中發(fā)現(xiàn)9對基因重復(fù)現(xiàn)象,說明基因重復(fù)是太平洋牡蠣酪氨酸酶基因擴(kuò)增的一個(gè)因素,同時(shí)也有力證實(shí)了基因重復(fù)是基因組合遺傳多樣化的重要來源[23]。太平洋牡蠣酪氨酸酶的基因重復(fù)伴隨著結(jié)構(gòu)分化,支持了結(jié)構(gòu)分化在基因復(fù)制中的普遍性[24]。根據(jù)太平洋牡蠣酪氨酸酶進(jìn)化樹分析,發(fā)現(xiàn)Type A酪氨酸中,tyr18與其他Type A酪氨酸酶分化較大,可能是較早分化出來的 Type A酪氨酸酶。Type B酪氨酸酶中,tyr2、tyr9為較早分化出的Type B酪氨酸酶。Type C型酪氨酸中tyr8較早分化出來,而且 Type C型酪氨酸酶與 Type A型、Type B型酪氨酸酶分化較大,沿著較獨(dú)立的方向進(jìn)行基因擴(kuò)張。其中最早分化的酪氨酸酶 tyr2、tyr8、tyr9、tyr18可能參與比較基礎(chǔ)的代謝,如軟體動物先天性免疫、黑色素形成。隨著基因的再次分化、擴(kuò)張,預(yù)示著這些基因可能具有特化的新功能,比如參與軟體動物卵囊、足絲、角質(zhì)層的形成等多種特化的生理反應(yīng)[8~10]。太平洋牡蠣酪氨酸酶基因家族的擴(kuò)張可能與酪氨酸酶在太平洋牡蠣功能的分化密切聯(lián)系。

    [1]Ito S,Wakamatsu K,Ozeki H.Chemical analysis of melanins and its application to the study of the regulation of melanogenesis.Pigm Cell Res,2000,13(Suppl 8):103–109.

    [2]Esposito R,D’Aniello S,Squarzoni P,Pezzotti MR,Ristoratore F,Spagnuolo A.New insights into the evolution of Metazoan tyrosinase gene family.PLoS ONE,2012,7(4):E35731.

    [3]Goding GR.Melanocytes:the new black.Int J Biochem Cell Biol,2007,39(2):275–279.

    [4]Gillespie JP,Kanost MR,Trenczek T.Biological mediators ofinsect immunity.Ann Rev Entool,1997,42:611–643.

    [5]Luna-Acosta A,Thomas-Guyon H,Amari M,Rosenfeld E,Bustamante P,Fruitier-Arnaudin I.Differential tissue distribution and specificity of phenoloxidases from the Pacific oysterCrassostrea gigas.CompBiochemPhysi,2011,159B:220–226.

    [6]Sugumaran M.Unified mechanism for sclerotization of insect cuticle.Adv Insect Physiol,1998,27:229–334.

    [7]Sugumaran M.Molecular mechanisms for mammalian melanogenesis comparison with insect cuticular sclerotization(minireview).FEBS Lett,1991,293(1-2):4–10.

    [8]Kouhei N,Masato Y,Koichi M,Hiroshi M.Tyrosinase localization in mollusc shells.Comp Biochem Physio B Biochem Mol Biol,2007,146:207–214.

    [9]Zhang C,Xie LP,Huang J,Chen L,Zhang RQ.A novel putative tyrosinase involved in periostracum formation from the pearl oyster(Pinctada fucata).BiochemBiopyhs Res Commun,2006,342(2):632–639.

    [10]Zhou Z,Ni DJ,Wang MQ,Wang LL,Shi XW,Yue F,Liu R,Song LS.The phenoloxidase activity and antibacterial function of a tyrosinase from scallopChlamys farreri.Fish Shellfish Immunology,2012,33(2):375–381.

    [11]Zhang G,Fang X,Guo X,Li L,Luo R,Xu F,Yang P,Zhang L,Wang X,Qi H,Xiong Z,Que H,Xie Y,Holland PW,Paps J,Zhu Y,Wu F,Chen Y,Wang J,Peng C,Meng J,Yang L,Liu J,Wen B,Zhang N,Huang Z,Zhu Q,Feng Y,Mount A,Hedgecock D,Xu Z,Liu Y,Domazet-Loso T,Du Y,Sun X,Zhang S,Liu B,Cheng P,Jiang X,Li J,Fan D,Wang W,Fu W,Wang T,Wang B,Zhang J,Peng Z,Li Y,Li N,Wang J,Chen M,He Y,Tan F,Song X,Zheng Q,Huang R,Yang H,Du X,Chen L,Yang M,Gaffney PM,Wang S,Luo L,She Z,Ming Y,Huang W,Zhang S,Huang B,Zhang Y,Qu T,Ni P,Miao G,Wang J,Wang Q,Steinberg CE,Wang H,Li N,Qian L,Zhang G,Li Y,Yang H,Liu X,Wang J,Yin Y,Wang J.The oyster genome reveals stress adaptation and complexity of shell formation.Nature,2012,490:49–54.

    [12]Cong R,Sun W,Liu G,Fan T,Meng X,Yang L,Zhu L.Purification and characterization of phenoloxidase from clamRuditapes philippinarum.Fish Shellfish Immunol,2005,18(1):61–70.

    [13]Jiang JW,Xing J,Sheng XZ,Zhan WB.Characterization of phenoloxidase from the bay scallopArgopecten irradians.J Shellfish Res,2011,30(2):273–277.

    [14]Aladaileh S,Rodney P,Nair SV,Raftos DA.Characterization of phenoloxidase activity in Sydney rock oysters(Saccostrea glomerata).CompBiochemPhysiol,2007,148(4):470–480.

    [15]Luna-Gonza′leza A,Maeda-Martíneza AN,Vargas-Alboresb F,Ascencio-Vallea F,Robles-Mungaraya M.Phenoloxidase activity in larval and juvenile homogenates and adult plasma and haemocytes of bivalve molluscs.Fish Shellfish Immunol,2003,15(4):275–282.

    [16]Aguilera F,McDougall C,Degnan MB.Origin,evolution and classification of type-3 copper proteins:lineage-specific gene expansions and losses across the Metazoa.BMC Evol Biol,2013,13:96.

    [17]Petersen TN,Brunak S,Von Heijne G,Nielsen H.SignalP 4.0:discriminating signal peptides from transmembrane regions.Nat Meth,2011,8(10):785–786.

    [18]Emanuelsson O,Nielsen H,von Heijne G.ChloroP.A neural network-based method for predicting chloroplast transit peptides and their cleavage sites.Protein Sci,1999,8(5):978–984.

    [19]Larkin MA,Blackshields G,Brown NP,Chenna R,McGettigan PA,McWilliam H,Valentin F,Wallace IM,Wilm A,Lopez R,Thomps JD,Gibson TJ,Higgins DG.Clustal W and Clustal X version 2.0.Bioinformatics,2007,23(21):2794–2948.

    [20]Tamura K,Peterson D,Peterson N,Stecher G,Nei M,Kumar S.MEGA5:Molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood,evolutionary distance and maximum parsimony methods.Mol Biol Evol,2011,28(10):2731–2739.

    [21]Ronquist F,Teslenko M,van der Mark P,Ayres DL,Darling A,Hohna S,Larget B,LiuL,Suchard MA,Huelsenbeck JP.MrBayes 3.2:efficient bayesian phylogenetic inference and model choice across a large model space.Syst Biol,2012,61(3):539–542.

    [22]Sugumaran M.Comparative biochemistry of eumelanogenesis and the protective roles of phenoloxidase and melanin in insects.Pigment Cell Res,2002,15(1):2–9.

    [23]Lespinet O,Wolf IY,Koonin EV,Aravind L.The role of lineage-specific gene family expansion in the evolution of eukaryotes.Genome Res,2002,12:1048–1059.

    [24]Xu G,Guo C,Shan H,Kong H.Divergence of duplicate genes in exon-intron structure.Proc Natl Acad Sci USA,2012,109(4):1187–1192.

    猜你喜歡
    跨膜進(jìn)化樹酪氨酸
    科學(xué)家首次實(shí)現(xiàn)跨膜熒光激活蛋白從頭設(shè)計(jì)
    基于心理旋轉(zhuǎn)的小學(xué)生物進(jìn)化樹教學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
    常見的進(jìn)化樹錯(cuò)誤概念及其辨析*
    囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)體對血壓及血管功能的影響
    枸骨葉提取物對酪氨酸酶的抑制與抗氧化作用
    薔薇花總黃酮對酪氨酸酶的抑制作用及其動力學(xué)行為
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:19:57
    艾草白粉病的病原菌鑒定
    PVC用酪氨酸鑭的合成、復(fù)配及熱穩(wěn)定性能研究
    中國塑料(2016年7期)2016-04-16 05:25:52
    層次聚類在進(jìn)化樹構(gòu)建中的應(yīng)用
    HBD的N端融合蛋白的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)作用
    午夜福利一区二区在线看| 日韩人妻精品一区2区三区| 99热国产这里只有精品6| √禁漫天堂资源中文www| 国产亚洲精品一区二区www | 精品亚洲成国产av| 99精国产麻豆久久婷婷| 波多野结衣一区麻豆| 伦理电影免费视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲视频免费观看视频| 18在线观看网站| av网站在线播放免费| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲成人国产一区在线观看| 黄片大片在线免费观看| www.熟女人妻精品国产| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲第一青青草原| 大香蕉久久成人网| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产日韩欧美视频二区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 天天添夜夜摸| 亚洲成国产人片在线观看| 免费在线观看日本一区| 欧美日韩亚洲高清精品| 视频区欧美日本亚洲| 国产熟女午夜一区二区三区| 91精品国产国语对白视频| 亚洲精品国产区一区二| 久久久久精品人妻al黑| 人人妻人人澡人人看| 怎么达到女性高潮| 999久久久国产精品视频| 日本黄色日本黄色录像| 搡老岳熟女国产| 999精品在线视频| 在线永久观看黄色视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| www.精华液| a级毛片黄视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜老司机福利片| 丰满少妇做爰视频| 啦啦啦免费观看视频1| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 极品人妻少妇av视频| 精品少妇内射三级| 少妇精品久久久久久久| av网站免费在线观看视频| 成人国产av品久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 最近最新免费中文字幕在线| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美成人午夜精品| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 成人18禁在线播放| 国产精品久久久久久精品古装| 久久中文看片网| 日韩大码丰满熟妇| 久久ye,这里只有精品| 国产精品免费视频内射| 一进一出好大好爽视频| 男人操女人黄网站| xxxhd国产人妻xxx| 乱人伦中国视频| videosex国产| 热99re8久久精品国产| 久久 成人 亚洲| 成人av一区二区三区在线看| 久久久国产精品麻豆| 国产麻豆69| 亚洲欧美一区二区三区久久| 午夜福利欧美成人| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 桃花免费在线播放| 午夜福利影视在线免费观看| av视频免费观看在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 免费在线观看日本一区| 91成人精品电影| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产单亲对白刺激| 亚洲欧美激情在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 黄色片一级片一级黄色片| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品影院久久| av网站免费在线观看视频| 成人18禁在线播放| 国产亚洲一区二区精品| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产一区二区在线观看av| 色播在线永久视频| 国产不卡一卡二| 久久免费观看电影| av国产精品久久久久影院| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品.久久久| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲一区中文字幕在线| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一区在线观看完整版| 国产成人免费无遮挡视频| 久久精品国产a三级三级三级| 大陆偷拍与自拍| 成人国语在线视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 怎么达到女性高潮| 国产在线观看jvid| 超色免费av| 国产精品一区二区免费欧美| 免费看a级黄色片| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 999久久久精品免费观看国产| 美女午夜性视频免费| 亚洲av欧美aⅴ国产| 在线播放国产精品三级| 18禁观看日本| 69av精品久久久久久 | 大香蕉久久网| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 美女福利国产在线| 久久久精品免费免费高清| 久久精品亚洲av国产电影网| 在线观看免费高清a一片| 日本五十路高清| 一夜夜www| 夫妻午夜视频| 91字幕亚洲| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲综合色网址| 在线观看66精品国产| 十八禁网站网址无遮挡| 精品久久蜜臀av无| 国产精品久久久久久精品古装| 国产免费现黄频在线看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美 日韩 精品 国产| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产成人啪精品午夜网站| 在线观看www视频免费| 国产三级黄色录像| 久久久国产一区二区| 国产日韩欧美视频二区| 成人免费观看视频高清| 久久久久视频综合| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 99国产精品一区二区三区| 午夜福利乱码中文字幕| 99热国产这里只有精品6| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久热在线av| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美日韩成人在线一区二区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久av网站| 久久这里只有精品19| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日韩欧美三级三区| 亚洲精品乱久久久久久| 国产亚洲一区二区精品| 黄色视频,在线免费观看| 欧美中文综合在线视频| 嫩草影视91久久| 久久久久久久精品吃奶| 91精品国产国语对白视频| 天天影视国产精品| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 成年人免费黄色播放视频| 首页视频小说图片口味搜索| 动漫黄色视频在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 男女高潮啪啪啪动态图| 91成人精品电影| 亚洲av国产av综合av卡| 美国免费a级毛片| 考比视频在线观看| 99热网站在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久 | 黄片播放在线免费| 搡老岳熟女国产| 两性夫妻黄色片| 咕卡用的链子| 99re6热这里在线精品视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 曰老女人黄片| 90打野战视频偷拍视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| h视频一区二区三区| 欧美日韩视频精品一区| 97人妻天天添夜夜摸| 国产午夜精品久久久久久| 国产亚洲欧美精品永久| www.自偷自拍.com| 亚洲五月婷婷丁香| 国产老妇伦熟女老妇高清| 高清视频免费观看一区二区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产又色又爽无遮挡免费看| 99久久精品国产亚洲精品| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 曰老女人黄片| 国产有黄有色有爽视频| 日日夜夜操网爽| 999精品在线视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 一区二区三区精品91| 亚洲av成人一区二区三| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 激情视频va一区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 黄色毛片三级朝国网站| avwww免费| av福利片在线| 亚洲五月色婷婷综合| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产成人免费无遮挡视频| 久久久精品免费免费高清| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲中文字幕日韩| 久久久久久久精品吃奶| 我要看黄色一级片免费的| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品 欧美亚洲| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 国产成人精品无人区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 精品国产一区二区三区四区第35| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久久久久久国产电影| 欧美成狂野欧美在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产在线视频一区二区| 中文字幕最新亚洲高清| 在线观看一区二区三区激情| 女警被强在线播放| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 视频在线观看一区二区三区| 五月天丁香电影| 大香蕉久久网| 怎么达到女性高潮| 亚洲av美国av| 一级毛片电影观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日本黄色视频三级网站网址 | 久久久久国产一级毛片高清牌| 婷婷成人精品国产| 最新的欧美精品一区二区| 无限看片的www在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| av一本久久久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日本一区二区免费在线视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲av日韩在线播放| 丝袜美足系列| 日韩三级视频一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品 欧美亚洲| 一个人免费看片子| 一区二区av电影网| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 波多野结衣一区麻豆| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 在线观看舔阴道视频| 亚洲久久久国产精品| 午夜久久久在线观看| 在线观看人妻少妇| 99久久精品国产亚洲精品| 飞空精品影院首页| 男人操女人黄网站| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲五月婷婷丁香| 久热爱精品视频在线9| 黄色视频,在线免费观看| 窝窝影院91人妻| 国产精品国产av在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲精品国产区一区二| 18在线观看网站| 曰老女人黄片| 69av精品久久久久久 | 久久久久国内视频| 少妇 在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产在线视频一区二区| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产精品一区二区在线观看99| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美成人免费av一区二区三区 | 另类亚洲欧美激情| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜福利欧美成人| 亚洲avbb在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩中文字幕视频在线看片| 丝袜喷水一区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 飞空精品影院首页| 一区二区三区精品91| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品一区二区在线观看99| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 老鸭窝网址在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久 成人 亚洲| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 99在线人妻在线中文字幕 | 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲 国产 在线| 色精品久久人妻99蜜桃| 在线观看舔阴道视频| a级片在线免费高清观看视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产亚洲av高清不卡| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 十分钟在线观看高清视频www| 一区二区三区激情视频| 人成视频在线观看免费观看| 一本久久精品| kizo精华| 国产精品免费大片| 9热在线视频观看99| 午夜福利免费观看在线| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲第一av免费看| bbb黄色大片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 日本黄色日本黄色录像| 伦理电影免费视频| 亚洲第一av免费看| e午夜精品久久久久久久| 亚洲精品在线美女| 母亲3免费完整高清在线观看| 色播在线永久视频| 亚洲第一青青草原| 色综合欧美亚洲国产小说| 美女视频免费永久观看网站| 电影成人av| 国产在视频线精品| 国产精品二区激情视频| 2018国产大陆天天弄谢| 老熟女久久久| 啪啪无遮挡十八禁网站| 真人做人爱边吃奶动态| 午夜福利,免费看| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 精品乱码久久久久久99久播| 日韩中文字幕视频在线看片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 老司机影院毛片| 一级毛片电影观看| 男女无遮挡免费网站观看| 精品国产一区二区久久| 中文亚洲av片在线观看爽 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 高潮久久久久久久久久久不卡| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 啪啪无遮挡十八禁网站| 中文字幕av电影在线播放| 精品一区二区三卡| 麻豆国产av国片精品| 亚洲色图av天堂| 国产午夜精品久久久久久| 美女扒开内裤让男人捅视频| 日本黄色视频三级网站网址 | av网站免费在线观看视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 久久九九热精品免费| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产成+人综合+亚洲专区| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久精品91无色码中文字幕| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久9热在线精品视频| 大型黄色视频在线免费观看| 首页视频小说图片口味搜索| 久热这里只有精品99| 国产精品一区二区在线不卡| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲av片天天在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲色图av天堂| a在线观看视频网站| 老汉色∧v一级毛片| 99久久国产精品久久久| 免费少妇av软件| 午夜成年电影在线免费观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 精品高清国产在线一区| 狠狠狠狠99中文字幕| 一级a爱视频在线免费观看| e午夜精品久久久久久久| 男女午夜视频在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久 成人 亚洲| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产精品1区2区在线观看. | 成人国语在线视频| 久久久精品免费免费高清| 国产在线精品亚洲第一网站| 一个人免费在线观看的高清视频| 美女国产高潮福利片在线看| 青草久久国产| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 亚洲综合色网址| 欧美午夜高清在线| 脱女人内裤的视频| 久久中文字幕人妻熟女| 老熟妇乱子伦视频在线观看| tocl精华| 国产亚洲精品第一综合不卡| 免费看a级黄色片| 后天国语完整版免费观看| 男人舔女人的私密视频| 99久久精品国产亚洲精品| 男女无遮挡免费网站观看| 国产高清国产精品国产三级| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 1024视频免费在线观看| 国产成人欧美| e午夜精品久久久久久久| av在线播放免费不卡| 国产精品免费大片| 捣出白浆h1v1| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲黑人精品在线| 老司机靠b影院| 亚洲国产av影院在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 色视频在线一区二区三区| 日韩视频一区二区在线观看| 9热在线视频观看99| 欧美乱妇无乱码| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 婷婷丁香在线五月| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美日韩亚洲高清精品| 大码成人一级视频| 男女床上黄色一级片免费看| 午夜福利影视在线免费观看| 一级片免费观看大全| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品久久蜜臀av无| 深夜精品福利| 亚洲av成人一区二区三| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲全国av大片| 最新在线观看一区二区三区| 宅男免费午夜| 亚洲欧美一区二区三区久久| 视频在线观看一区二区三区| 国产深夜福利视频在线观看| 91麻豆av在线| 日本黄色日本黄色录像| 热99国产精品久久久久久7| 久久久久国内视频| 亚洲伊人色综图| 黑人猛操日本美女一级片| 成年人免费黄色播放视频| 热99国产精品久久久久久7| 久久性视频一级片| 免费黄频网站在线观看国产| 精品第一国产精品| 成在线人永久免费视频| 九色亚洲精品在线播放| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 日韩欧美一区视频在线观看| 色视频在线一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 日韩视频在线欧美| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 成人黄色视频免费在线看| 精品亚洲成a人片在线观看| 成人18禁在线播放| 99在线人妻在线中文字幕 | 精品一品国产午夜福利视频| 久久99热这里只频精品6学生| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产免费av片在线观看野外av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 高清黄色对白视频在线免费看| 老司机靠b影院| 91麻豆av在线| 日韩三级视频一区二区三区| 老司机亚洲免费影院| a在线观看视频网站| 亚洲全国av大片| 夫妻午夜视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 午夜激情av网站| 三级毛片av免费| 国产精品国产av在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美成人免费av一区二区三区 | 国产三级黄色录像| 曰老女人黄片| 99精品久久久久人妻精品| 色在线成人网| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美亚洲日本最大视频资源| 老司机福利观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品久久久人人做人人爽| 美女福利国产在线| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲伊人色综图| 丰满迷人的少妇在线观看| 黄频高清免费视频| 午夜视频精品福利| 成人18禁在线播放| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 午夜福利免费观看在线| 亚洲三区欧美一区| 极品人妻少妇av视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 热99国产精品久久久久久7| 欧美日韩一级在线毛片| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产亚洲精品一区二区www | 脱女人内裤的视频| 国产精品 国内视频| 十八禁高潮呻吟视频| 久久影院123| 国产有黄有色有爽视频| 悠悠久久av| 亚洲avbb在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产成人精品久久二区二区免费| 嫁个100分男人电影在线观看| 免费少妇av软件| 99国产精品99久久久久| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产成人免费无遮挡视频| 国产黄色免费在线视频| 午夜福利视频在线观看免费| 一级毛片女人18水好多| 久久精品91无色码中文字幕| 少妇精品久久久久久久| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 精品一区二区三区av网在线观看 | 无限看片的www在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 日韩欧美一区视频在线观看| av电影中文网址| 免费观看a级毛片全部| 久久久精品免费免费高清| 国产成+人综合+亚洲专区| 男人操女人黄网站| av视频免费观看在线观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久香蕉激情| 国产91精品成人一区二区三区 | 国产成人精品无人区|