山刺玫果提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

摘要：建立山刺玫果提取物的定性鑒別和含量測(cè)定方法，采用薄層色譜法對(duì)山刺玫果提取物進(jìn)行定性分析；采用紫外-可見分光光度法建立山刺玫果提取物總黃酮的含量測(cè)定方法；采用高效液相色譜法建立山刺玫果提取物中槲皮素的含量測(cè)定方法，其中色譜柱為伊利特C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸-三乙胺（50 ∶50 ∶0.45 ∶0.2），流速為1 mL/min，進(jìn)樣量為20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)374 nm，柱溫30 ℃。建立的薄層色譜鑒別方法熒光斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾；蕓香苷在3.70～44.40 μg/mL（r=0.999 7）、槲皮素在0.02～0.20 μg（r=0.999 9）內(nèi)線性關(guān)系良好；蕓香苷平均回收率為101.32%，RSD為1.67%（n=9），槲皮素平均回收率99.80%，RSD為1.31%（n=9）。建立的薄層鑒別方法專屬性高，含量測(cè)定方法具有良好的精密度，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于山刺玫果提取物的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：山刺玫果；金絲桃苷；總黃酮；槲皮素

中圖分類號(hào)： R284.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）09-0248-03

收稿日期：2013-11-29

基金項(xiàng)目：吉林省科技計(jì)劃（編號(hào)：20110948）。

作者簡(jiǎn)介：楊揚(yáng)（1989—），女，吉林吉林人，碩士研究生，主要從事天然產(chǎn)物有效成分的提取及純化工藝研究。E-mail：15643957455@163.com。

通信作者：鐘方麗，博士，教授，主要從事天然產(chǎn)物的研究與開發(fā)。E-mail：fanglizhong@sina.com。山刺玫果別稱野薔薇、野玫瑰、薔薇果，系薔薇科植物山刺玫（Rosa davurica Pall.）的成熟果實(shí)，廣泛分布在我國(guó)東北及山西、內(nèi)蒙等地，花、根、果均可入藥，其果實(shí)為卵形或球形，營(yíng)養(yǎng)豐富、酸甜可口，可抗衰老，治腸炎、食欲不振，防治心血管疾病等，民間大量采食或用于泡酒、泡茶等，《中藥大辭典》認(rèn)為其有健脾理氣、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的作用。據(jù)報(bào)道，山山刺玫果內(nèi)含多種維生素、氨基酸及黃酮類化合物等成分，具有很大的開發(fā)價(jià)值，山刺玫果作為一種具有保健和治療作用的天然產(chǎn)物被日益重視[1-5]。山刺玫果中所含的總黃酮類物質(zhì)具有防治高血脂和血栓所致的心腦血管疾病的功效[6-7]，其中蕓香苷具有舒張血管、抗病毒、抗衰老等生物活性[8]；槲皮素具有抗炎、抗氧化、清除體內(nèi)自由基的作用，對(duì)由膠原、ADP或凝血酶引起的血小板聚集及血栓形成也有抑制作用，并有免疫增強(qiáng)功能及鎮(zhèn)痛等作用[9-10]。本研究以蕓香苷為對(duì)照品采用紫外-可見分光光度法對(duì)山刺玫果提取物總黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定，并采用高效液相色譜法對(duì)山刺玫果提取物中的槲皮素量進(jìn)行了測(cè)定。

1材料

1.1試藥

山刺玫果提取物（批號(hào)20120810、20120820、20121011、20121022、20121103）為吉林化工學(xué)院化學(xué)與制藥工程學(xué)院藥學(xué)系自制。槲皮素對(duì)照品（批號(hào)：100081-200907），蕓香苷對(duì)照品（批號(hào)：100080-200707），金絲桃苷對(duì)照品（批號(hào)：111521-201004），均為含量測(cè)定用，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

1.2儀器

TU-1810紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；LC2000高效液相色譜儀（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；AEG-220電子天平（日本島津）；KQ-250B超聲波清洗器（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；ZF-20D暗箱式紫外分析儀（上海寶山顧村電光儀器廠）。

1.3試劑

薄層色譜硅膠G、H（青島海洋化工集團(tuán)公司），甲醇為色譜純，三乙胺為優(yōu)級(jí)純，水為重蒸餾水，醋酸乙酯、甲酸、乙醇等其他化學(xué)試劑均為分析純。

2結(jié)果與分析

2.1薄層色譜鑒別

2.1.1對(duì)照品溶液及供試品溶液的制備精確稱取干燥至恒重的金絲桃苷對(duì)照品5.05 mg，置于10 mL容量瓶中，甲醇溶解，定容，作為對(duì)照品溶液，備用。稱取干燥至恒重的山刺玫果提取物0.16 g，精確稱定，置于25 mL容量瓶中，加60%乙醇溶解，定容，吸取5 mL于25 mL容量瓶中，60%乙醇定容，作為供試品溶液，備用。

2.1.2陰性對(duì)照液的制備稱取干燥至恒重的山刺玫果提取物0.16 g，精確稱定，50 mL蒸餾水分散，將上述分散液經(jīng)過(guò)D-101樹脂柱，流出液重復(fù)上柱，至流出液無(wú)黃酮顏色反應(yīng)，收集流出液，水浴上揮干，用適量60%乙醇溶解，即得除去總黃酮的陰性對(duì)照液，備用。

2.1.3結(jié)果按《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B 薄層色譜法試驗(yàn)[11-12]，吸取上述金絲桃苷對(duì)照品溶液、3批供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一層析硅膠（G）薄層板（市售鋁箔片基）上，以醋酸乙酯-甲酸-水（8 ∶1 ∶1）為展開劑展開，取出，晾干，均勻地噴以5%AlCl3-乙醇溶液，用電吹風(fēng)吹至無(wú)有機(jī)溶劑氣味，置于紫外分析儀（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯有相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖1）。

2.2總黃酮含量的測(cè)定

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精確稱取干燥至恒重的蕓香苷對(duì)照品10.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加60%乙醇溶解，定容，搖勻，配制成濃度為0.2 mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。

2.2.2供試品溶液的制備按“2.2.1”節(jié)的方法制備。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確吸取蕓香苷對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置于25 mL容量瓶中，加5% NaNO2溶液 1.0 mL，搖勻，放置6 min，加10% Al（NO3）3溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min，加4% NaOH 10.0 mL，再加60%乙醇定容至刻度，搖勻，放置15 min。以相應(yīng)的試劑為空白，按照分光光度法，在505 nm處測(cè)定其吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、蕓香苷對(duì)照品濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[13-14]，進(jìn)行直線回歸，回歸方程為：y=12.831x+0.003 5，r=0.999 7。結(jié)果表明蕓香苷在3.70～44.40 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。endprint

2.2.4儀器精密度試驗(yàn)吸取對(duì)照品溶液2.0 mL于25 mL容量瓶中，按“2.2.3”節(jié)的方法顯色，連續(xù)測(cè)定6次吸光度，RSD為0.18%，結(jié)果表明精密度較好。

2.2.5中間精密度試驗(yàn)吸取對(duì)照品溶液2.0 mL于25 mL容量瓶中，按“2.2.3”節(jié)的方法顯色，分別在2臺(tái)儀器上連續(xù)測(cè)定6次吸光度，RSD為1.68%、1.05%，中間精密度的RSD為2.07%，結(jié)果表明中間精密度較好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)吸取2.0 mL供試品溶液于25 mL容量瓶中，按“2.2.3”節(jié)的方法分別于配制后0、1、2、4、6、8、24 h進(jìn)行顯色，測(cè)定吸光度，RSD為0.41%。按“2.2.3”的方法分別在顯色后于0、5、10、15、20、25、30、35、40、60 min測(cè)定吸光度，RSD為1.61%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h穩(wěn)定性良好，顯色后60 min穩(wěn)定，滿足測(cè)定要求。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)山刺玫果提取物6份，精確稱量，按“2.2.1”節(jié)的方法制成供試品溶液，吸取2.0 mL于25 mL容量瓶中，按“2.2.3”節(jié)的方法顯色，在505 nm處測(cè)定吸光度，RSD為 2.38%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.2.8加樣回收率試驗(yàn)稱取9份總黃酮含量已知的供試品，精確稱定，每3份中加入3.18、6.34、9.52 mg/mL對(duì)照品溶液5.0 mL，按“2.2.1”節(jié)的方法制備供試品溶液，按“2.2.3”節(jié)的方法顯色測(cè)定，結(jié)果見表1。

2.2.9樣品含量測(cè)定稱取5批供試品，精確稱定，按“2.2.1”節(jié)的方法制備供試品溶液，按“2.2.3”節(jié)的方法顯色，在505 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果顯示5批山刺玫果提取物中總黃酮的含量分別為74.67%、73.00%、74.54%、7321%、75.80%。

2.3槲皮素含量測(cè)定

2.3.1對(duì)照品溶液的制備精確稱取干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品10.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.20 mg/mL的槲皮素對(duì)照品溶液。

2.3.2供試品溶液的制備精確稱取干燥的山刺玫果提取物0.16 g，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）30 mL，密塞，稱質(zhì)量，置于90 ℃水浴中加熱回流1 h，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)充減失的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，將濾液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度[15-16]，搖勻，吸取5 mL于25 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，微孔濾膜（0. 45 μm） 過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.3色譜條件及適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱為伊利特C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸-三乙胺（50 ∶50 ∶0.45 ∶0.2），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 374 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為20 μL。在此條件下，槲皮素的保留時(shí)間為8.7 min，分離度為2.4，理論塔板數(shù)為5 100，其HPLC圖如圖2所示。

2.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制吸取對(duì)照品溶液適量，配成濃度分別為1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μg/mL的系列對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20 μL，以槲皮素峰面積積分值y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量x（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：y=3×106x-11 000，r=0.999 9。結(jié)果表明，槲皮素的進(jìn)樣量在0.02～0.20 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)山刺玫果提取物6份，按“2.3.1”節(jié)中已定的方法制備供試品溶液，各進(jìn)樣20 μL進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示槲皮素峰面積的RSD為1.68%，說(shuō)明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.3.6儀器精密度試驗(yàn)稱取20 μg/mL的槲皮素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣20μL，結(jié)果顯示槲皮素峰面

積的RSD為0.98%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.3.7穩(wěn)定性試驗(yàn)吸取供試品溶液，在同一色譜條件下，分別于0、1、2、3、4、5、6、7、8 h進(jìn)樣20 μL，結(jié)果顯示槲皮素的峰面積RSD為1.57%，說(shuō)明供試品溶液在室溫下8 h穩(wěn)定。

2.3.8加樣回收率試驗(yàn)稱取9份槲皮素含量已知的供試品，每3份中分別加入0.20 mg/mL槲皮素對(duì)照品溶液1.50、1.88、2.25 mL，按“2.3.1”節(jié)的方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表2。

2.3.9樣品含量測(cè)定稱取3批樣品，精確稱定，按“2.3.1”節(jié)中已定的方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定槲皮素峰面積，計(jì)算其含量，結(jié)果3批樣品中槲皮素的含量分別為0.221%、0.220%、0.224%。3結(jié)論與討論

3.1薄層色譜條件的選擇

3.1.1展開劑的選擇分別以醋酸乙酯-甲酸-水（8 ∶1 ∶1、9 ∶1 ∶1、7 ∶1 ∶1、10 ∶1 ∶1、12 ∶1 ∶1、20 ∶1 ∶1）、甲醇-冰醋酸-水（4 ∶1 ∶5）、苯-醋酸乙酯-甲酸（5 ∶4 ∶1，6 ∶4 ∶1）、三氯甲烷-甲醇-水（28 ∶10 ∶1）為展開劑對(duì)展開系統(tǒng)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示醋酸乙酯-甲酸-水（8 ∶1 ∶1）系統(tǒng)金絲桃苷比移值適中，斑點(diǎn)分離效果好。

3.1.2硅膠板的選擇分別吸取供試品溶液3批、金絲桃苷對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，分別考察自制硅膠G板（玻璃片基）、自制硅膠H板（玻璃片基）、層析硅膠（G）薄板（鋁箔片基）、層析硅膠（G）薄板（玻璃片基）的展開效果，結(jié)果表明層析硅膠（G）薄板（鋁箔片基）展開效果良好，熒光斑點(diǎn)清晰。

3.1.3顯色劑的選擇根據(jù)山刺玫果提取物的主要化學(xué)成分為黃酮類化合物，顯色時(shí)選擇9%FeCl3、5%AlCl3-乙醇溶液為顯色劑進(jìn)行顯色，結(jié)果顯示，5%AlCl3-乙醇溶液為顯色劑，熒光斑點(diǎn)清晰，所以宜以5%AlCl3-乙醇溶液為顯色劑。endprint

3.2 測(cè)定槲皮素含量的供試品溶液制備方法的確定

在槲皮素含量測(cè)定中，對(duì)供試品溶液制備方法進(jìn)行研究，分別對(duì)水解液的用量、水解時(shí)間和水解溫度進(jìn)行探索。

3.2.1水解液用量的選擇取6份干燥的山刺玫果提取物 0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，分別加入甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）10、15、20、25、30、35 mL，密塞，稱質(zhì)量，分別于50 ℃下進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間為0.5 h。放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)充減少的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，將濾液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取5 mL于25 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，微孔濾膜（0.45 μm） 過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積分別為27 146、28 147、30 009、34 359、34 479、33 380，根據(jù)峰面積選擇水解液用量為30 mL。

3.2.2水解時(shí)間的選擇取6份干燥的山刺玫果提取物 0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）30 mL，密塞，稱質(zhì)量，50 ℃進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h。按“3.2.1”節(jié)中的方法稀釋過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積為31 326、32 636、35 966、46 117、42 897、40 699，根據(jù)峰面積選擇水解時(shí)間為2.0 h。

3.2.3水解溫度的選擇按“3.2.2”節(jié)中的方法稱取提取物加入水解液，分別于50、60、70、80、90、100 ℃下進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間為2.0 h。按“3.2.1”節(jié)中的方法稀釋過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積分別為49 692、51 232、62 290、63 009、74 759、68 396，根據(jù)峰面積選擇水解溫度為90 ℃。

供試品溶液制備方法為：稱取干燥的山刺玫果提取物0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，加入水解液甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）30 mL，90 ℃水解2.0 h。

本試驗(yàn)分別采用HPLC、UV法對(duì)山刺玫果提取物中槲皮素、總黃酮的含量測(cè)定進(jìn)行了相關(guān)的探索，并建立了山刺玫果提取物的薄層鑒別方法，本試驗(yàn)建立的薄層鑒別方法斑點(diǎn)清晰、簡(jiǎn)便快捷，建立的含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、線性關(guān)系良好，回收率、重現(xiàn)性符合要求，可以更全面地對(duì)山刺玫果提取物進(jìn)行質(zhì)量控制，為進(jìn)一步開發(fā)山刺玫果提供了理論依據(jù)。endprint

3.2 測(cè)定槲皮素含量的供試品溶液制備方法的確定

在槲皮素含量測(cè)定中，對(duì)供試品溶液制備方法進(jìn)行研究，分別對(duì)水解液的用量、水解時(shí)間和水解溫度進(jìn)行探索。

3.2.1水解液用量的選擇取6份干燥的山刺玫果提取物 0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，分別加入甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）10、15、20、25、30、35 mL，密塞，稱質(zhì)量，分別于50 ℃下進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間為0.5 h。放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)充減少的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，將濾液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取5 mL于25 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，微孔濾膜（0.45 μm） 過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積分別為27 146、28 147、30 009、34 359、34 479、33 380，根據(jù)峰面積選擇水解液用量為30 mL。

3.2.2水解時(shí)間的選擇取6份干燥的山刺玫果提取物 0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）30 mL，密塞，稱質(zhì)量，50 ℃進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h。按“3.2.1”節(jié)中的方法稀釋過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積為31 326、32 636、35 966、46 117、42 897、40 699，根據(jù)峰面積選擇水解時(shí)間為2.0 h。

3.2.3水解溫度的選擇按“3.2.2”節(jié)中的方法稱取提取物加入水解液，分別于50、60、70、80、90、100 ℃下進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間為2.0 h。按“3.2.1”節(jié)中的方法稀釋過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積分別為49 692、51 232、62 290、63 009、74 759、68 396，根據(jù)峰面積選擇水解溫度為90 ℃。

供試品溶液制備方法為：稱取干燥的山刺玫果提取物0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，加入水解液甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）30 mL，90 ℃水解2.0 h。

本試驗(yàn)分別采用HPLC、UV法對(duì)山刺玫果提取物中槲皮素、總黃酮的含量測(cè)定進(jìn)行了相關(guān)的探索，并建立了山刺玫果提取物的薄層鑒別方法，本試驗(yàn)建立的薄層鑒別方法斑點(diǎn)清晰、簡(jiǎn)便快捷，建立的含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、線性關(guān)系良好，回收率、重現(xiàn)性符合要求，可以更全面地對(duì)山刺玫果提取物進(jìn)行質(zhì)量控制，為進(jìn)一步開發(fā)山刺玫果提供了理論依據(jù)。endprint

3.2 測(cè)定槲皮素含量的供試品溶液制備方法的確定

在槲皮素含量測(cè)定中，對(duì)供試品溶液制備方法進(jìn)行研究，分別對(duì)水解液的用量、水解時(shí)間和水解溫度進(jìn)行探索。

3.2.1水解液用量的選擇取6份干燥的山刺玫果提取物 0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，分別加入甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）10、15、20、25、30、35 mL，密塞，稱質(zhì)量，分別于50 ℃下進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間為0.5 h。放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)充減少的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，將濾液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取5 mL于25 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，微孔濾膜（0.45 μm） 過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積分別為27 146、28 147、30 009、34 359、34 479、33 380，根據(jù)峰面積選擇水解液用量為30 mL。

3.2.2水解時(shí)間的選擇取6份干燥的山刺玫果提取物 0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）30 mL，密塞，稱質(zhì)量，50 ℃進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h。按“3.2.1”節(jié)中的方法稀釋過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積為31 326、32 636、35 966、46 117、42 897、40 699，根據(jù)峰面積選擇水解時(shí)間為2.0 h。

3.2.3水解溫度的選擇按“3.2.2”節(jié)中的方法稱取提取物加入水解液，分別于50、60、70、80、90、100 ℃下進(jìn)行水解，每次水解時(shí)間為2.0 h。按“3.2.1”節(jié)中的方法稀釋過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，峰面積分別為49 692、51 232、62 290、63 009、74 759、68 396，根據(jù)峰面積選擇水解溫度為90 ℃。

供試品溶液制備方法為：稱取干燥的山刺玫果提取物0.16 g，精確稱定，置于具塞錐形瓶中，加入水解液甲醇-25%鹽酸溶液（4 ∶1）30 mL，90 ℃水解2.0 h。

本試驗(yàn)分別采用HPLC、UV法對(duì)山刺玫果提取物中槲皮素、總黃酮的含量測(cè)定進(jìn)行了相關(guān)的探索，并建立了山刺玫果提取物的薄層鑒別方法，本試驗(yàn)建立的薄層鑒別方法斑點(diǎn)清晰、簡(jiǎn)便快捷，建立的含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、線性關(guān)系良好，回收率、重現(xiàn)性符合要求，可以更全面地對(duì)山刺玫果提取物進(jìn)行質(zhì)量控制，為進(jìn)一步開發(fā)山刺玫果提供了理論依據(jù)。endprint