乳腺癌患者血清MK的定量檢測及其臨床意義

鄒禮明

中期因子(Midkine, MK)在腫瘤的生長、血管的生成方面都發(fā)揮著顯著的作用。MK在多種腫瘤組織中高效表達(dá),并在惡性腫瘤的出現(xiàn)、生長和轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用［1］。本文通過測定MK在乳腺癌患者血清中的含量, 探討了MK與乳腺癌的診斷及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院于2010年12月～2011年12月實(shí)施乳腺外科手術(shù)的患者120例, 所有患者均經(jīng)病理確診, 且全部為女性, 其中40例為乳腺良性腫瘤患者, 80例為乳腺癌患者, 并將40例健康體檢女性作為正常對照。乳腺癌組、乳腺良性腫瘤組、正常對照組的平均年齡分別為：(46.2±8.1)歲、(36.5±6.4)歲和(35.4±6.6)歲。三組年齡上的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法 血清中MK含量的測定采用ELISA法。①所有入組人員于清晨空腹取血, 將標(biāo)本水浴后分離血清。②用MK抗體包被微量反應(yīng)板, 室溫放置20 h, 棄去包被液, 并用PBS溶液洗板。③加入含10%牛血清的PBS溶液, 室溫孵育20 h。④將待檢的血清和MK標(biāo)準(zhǔn)品混合于Tris緩沖液中,然后將混合液加入微量反應(yīng)板中, 并設(shè)立空白對照, 在室溫條件下放置4 h, 隨后用PBS溶液沖洗板子。⑤微量反應(yīng)板中加入兔抗人MK抗體, 在37℃條件下放置2 h后用PBS溶液沖洗板子。⑥微量反應(yīng)板中加入羊抗兔二抗(已用辣根過氧化物酶標(biāo)記), 在37℃條件下放置2 h后用PBS溶液沖洗板子。⑦微量反應(yīng)板中加入底物顯色液, 在室溫條件下避光放置0.5 h后加入終止液終止反應(yīng)。⑧使用酶聯(lián)免疫分析儀在450 nm波長下測定微量反應(yīng)板中的OD值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析, 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn),P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌患者組、乳腺良性腫瘤組和正常對照組中血清MK的表達(dá)水平 見表1。

表1 乳腺癌患者、乳腺良性腫瘤組和正常對照組中血清MK的表達(dá)水平(±s)

表1 乳腺癌患者、乳腺良性腫瘤組和正常對照組中血清MK的表達(dá)水平(±s)

注：a為乳腺癌組與乳腺良性腫瘤組比較, P<0.01；b為乳腺癌組與正常對照組比較, P<0.01；c為乳腺良性腫瘤組與正常對照組比較, P>0.05

組別 例數(shù) MK水平(pg/ml)乳腺癌組 80 682.36±151.27ab乳腺良性腫瘤組 40 216.35±56.48c正常對照組 40 212.43±51.51

由表1可知, 乳腺癌組的血清MK水平明顯高于良性對照組與正常對照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；良性對照組與正常對照組之間血清MK水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 乳腺癌患者血清MK水平與是否轉(zhuǎn)移的關(guān)系 根據(jù)乳腺癌患者是否存在淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移, 將分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。由表2可知, 在80例乳腺癌患者中, 有48例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移, 24例無轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移組的血清MK水平明顯高于無轉(zhuǎn)移組, 兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清MK水平(±s)

表2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組血清MK水平(±s)

注：與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較, aP<0.05

組別 例數(shù) 血清MK水平(pg/ml)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 48 790.36±136.27a無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 32 542.36±125.27

3 討論

乳腺癌是女性發(fā)病率較高的惡性腫瘤, 通過檢測患者血清腫瘤標(biāo)志物來幫助診斷及判斷預(yù)后, 具有無創(chuàng)及快捷方便的特點(diǎn)。最初認(rèn)為MK是胎兒與新生兒發(fā)育過程中的調(diào)節(jié)因子, 隨后證明MK在多種人類惡性腫瘤組織中呈過度表達(dá)［2］。成熟人MK蛋白是一種可分泌蛋白, MK家族受體是一種含有蛋白多糖的分子復(fù)合物。研究證實(shí), MK在乳腺癌組織中高表達(dá), 且表達(dá)具有高度的特異性［3］。

目前國內(nèi)側(cè)重于研究MK在惡性腫瘤組織中表達(dá), 而忽視了MK的血清學(xué)檢測［4］。本論文采用ELISA法檢測了乳腺癌患者(80例)、乳腺良性腫瘤患者(40例)及健康體檢者(40例)血清中的MK水平, 結(jié)果顯示乳腺癌患者血清中MK的表達(dá)水平明顯高于乳腺良性腫瘤患者和健康體檢者(P<0.01)。根據(jù)乳腺癌患者是否存在淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移, 將分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組, 結(jié)果表明淋巴轉(zhuǎn)移組患者血清中MK的表達(dá)水平顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組(P<0.05)。說明乳腺癌患者血清MK的定量檢測, 具有高度的特異性和敏感性, 有助于乳腺癌的診斷和預(yù)后判斷, 因此可以作為新的腫瘤標(biāo)志物在臨床推廣。

［1］閔麗姍, 陳瑩蓉, 馬志紅, 等.中期因子在不同分子分型的乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義.現(xiàn)代免疫學(xué), 2012, 32(5):381-386.

［2］陸巍, 董漢興, 周恒花, 等.乳腺癌組織中期因子的表達(dá)及其臨床意義.中國臨床醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 3(15):433-434.

［3］王玉欣, 馬英智, 孫梅, 等.MK和MMP26在人乳腺組織中的表達(dá)及臨床意義.中國老年學(xué)雜志, 2011, 31(11)：1985-1987.

［4］高順姬, 李廣倫.惡性腫瘤病人中期因子表達(dá)的研究進(jìn)展.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2009, 17(2):384-386.