全自動生化分析儀測定ALT和AST結果失真的探討

付柳平

(樟樹市劉公廟鎮(zhèn)衛(wèi)生院，江西 樟樹 331212)

丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)為肝細胞內(nèi)非特異性功能酶，大量存在于肝臟組織中，當各種急性病毒性肝炎、藥物或酒精中毒等因素引起的急性肝損害時，血清ALT和AST水平可在臨床癥狀(如黃疸)出現(xiàn)之前急劇升高，且ALT＞AST[1]，是檢測肝細胞損傷程度的重要指標[2]。因此，ALT和AST是肝功能檢查中兩個最常用也是最重要的酶指標。臨床上主要用于肝臟疾病的診斷。筆者在日常工作中，遇到一些ALT和ASL測定結果太低，反應曲線異常的情況，經(jīng)過用生理鹽水按照一定比例稀釋后重新測定結果良好，反應曲線正?！，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本 來源于誤食蘑菇中毒病人的血清標本。

1.2 儀器和試劑 江西特康TC6060全自動生化分析儀 (無底物耗盡報警功能)試劑為江西特康公司提供的酶偶聯(lián)液體雙試劑(線性范圍450U/L)質(zhì)控品為中生北控生物科技股份有限公司提供的21項水平Ⅱ生化質(zhì)控品。

1.3 方法 嚴格按照儀器操作規(guī)程進行操作，并作好室內(nèi)質(zhì)控。采用酶偶聯(lián)速率法檢測ALT和AST，測定結果太低，反應曲線異常，用生理鹽水按照1：5和1：10的比例稀釋后重新檢測。

2 結果

2.1 數(shù)據(jù)測定值 2例標本ALT和AST稀釋前測定值都太低，1 號標本(ALT、AST)、2 號標本(AST)1：5比例稀釋后測定值與1：10比例稀釋后測定值很相近，且二次反應曲線都正常；2號標本(ALT)1：5比例稀釋后測定值與1：10比例稀釋后測定值仍相差很大，前者反應曲線異常，后者反應曲線正常。見表1。

表1 ALT和AST稀釋前、1：5稀釋及1：10稀釋測定值

2.2 反應曲線圖 ALT和AST的異常反應曲線圖特征相似，這里只介紹2號標本稀釋前AST異常反應曲線圖，以及2號標本1：5比例稀釋后ALT異常反應曲線圖。

2.2.1 2號標本稀釋前AST異常反應曲線圖 由于AST活性濃度太高，在酶促反應延滯期NADH迅速氧化，且底物被耗盡。反應曲線表現(xiàn)為在216s～265s間幾乎垂直下降，然后反應曲線變?yōu)橐粭l水平直線，見圖1。

圖1 2號標本稀釋前AST異常反應曲線圖

2.2.2 2號標本1：5比例稀釋后ALT異常反應曲線圖 由于經(jīng)過1：5比例稀釋的標本中ALT活性濃度有所下降，反應曲線在測定區(qū)域前段 (300s～430s)為正常，而在測定區(qū)域后段(430s～540s)底物逐漸被耗盡，反應曲線也逐漸變成水平直線，見圖2。

圖2 2號標本1：5比例稀釋后ALT異常反應曲線

3 討論

TC6060全自動生化分析儀檢測標本后，所得結果有3種形式：數(shù)據(jù)測定值、符號標記和反應曲線圖。數(shù)據(jù)測定值和符號標記是檢驗報告單的主要內(nèi)容，而反應曲線圖可以直觀地反映測試的全過程[3]，是操作者判斷測定結果準確度的依據(jù)之一。

3.1 方法學缺陷 TC6060全自動生化分析儀采用酶偶聯(lián)速率法測定ALT和AST，其原理是在酶促反應過程中，NADH的氧化速率與標本中酶活性呈正比，可在340nm檢測吸光度下降速率，根據(jù)線性反應期吸光度下降速率，計算出ALT、AST活性濃度。從上表1號和2號標本測定結果看，由于標本中ALT和AST活性濃度太高超過了試劑的檢測線性范圍才使測定結果失真。由于ALT和AST活性濃度太高，在到達測定區(qū)域前底物已被耗盡，在到達測定區(qū)域時酶促反應曲線已成為一條水平直線，說明吸光度基本上沒有變化，從而使測定結果太低。經(jīng)過用生理鹽水按合適比例稀釋后重新測定，并觀察反應曲線是否正常，如反應曲線良好，則將測定結果乘以稀釋倍數(shù)，即為真實結果。

3.2 稀釋倍數(shù) 有報道只要稀釋5倍后即可[4]。二份標本都作了稀釋5倍和10倍測定，1號標本ALT、AST，以及2號標本AST5倍稀釋后真實結果與10倍稀釋后真實值很相近，且二次檢測所得反應曲線都正常。由于2號標本ALT活性濃度太高，5倍稀釋后測定結果仍失真，反應曲線異常，10倍稀釋后反應曲線正常，測定結果為真實值，與5倍稀釋后測定值相差很大。根據(jù)上述比較，為了防止由于酶活性濃度太高標本稀釋后再次要求稀釋，造成試劑浪費，增加工作量，筆者建議稀釋10倍為佳。

3.3 責任心要強 在日常工作中，應作好儀器每天的維護及保養(yǎng)，使儀器處于最佳狀態(tài)，要嚴格按照儀器的操作規(guī)程進行操作，作好室內(nèi)質(zhì)控，更要有高度的工作責任心。還要密切注意異常結果的反應曲線，反應曲線異常，應稀釋后重新測定。

綜上所述，要保證ALT和AST測定結果的準確性，就要加強工作責任心，善于觀察異常測定結果和異常反應曲線，不斷總結工作經(jīng)驗，將檢驗與臨床結合起來，不斷提高檢驗質(zhì)量和水平。

[1]周新,涂植光.臨床生物化學和生物化學檢驗[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:167.

[2]Senior JR.Alanine aminotransferase:a clinical and regulatory tool for detecting liver injury＿past,present,and future[J].Clin Pharmacol Ther,2012,92(3):332-339.

[3]王宏碧,劉云華,崔江龍,等.OLYMPUS AU2700全自動生化分析儀反應曲線圖的意義分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2009，27(5)：535.

[4]劉索蘭.警惕7170S型全自動生化分析儀測定ALT、AST漏報警現(xiàn)象[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學,2003,18(4)：5.