劉慰+秦浩+劉霜+等

摘要以從土壤中自行分離的219株芽胞桿菌中篩選的一株枯草芽胞桿菌菌株HX08為研究對(duì)象，通過菌落形態(tài)觀察、掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡等進(jìn)行菌體形態(tài)觀察以及16S rRNA基因同源性分析等一系列方法鑒定，該株細(xì)菌屬枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis，命名為HX08，并將其16S rRNA基因序列提交上Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得登陸號(hào)KF774302.通過生測(cè)發(fā)現(xiàn)，HX08菌株在60 h發(fā)酵時(shí)間段對(duì)棉鈴蟲的致死效果最好.對(duì)該菌株發(fā)酵液提取的活性蛋白進(jìn)行初步研究，建立了HPLC技術(shù)分離體系，使用H2O做流動(dòng)相，以0.5 mL/min 流速洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為215、254和280 nm，收集第15 mL收集管處即保留時(shí)間為31 min的2號(hào)峰粗分離物活性較高.切取SDSPAGE膠上相對(duì)應(yīng)活性峰目的蛋白質(zhì)條帶酶解，利用質(zhì)譜（ LTQMS） 技術(shù)進(jìn)行了分子特性分析，鑒定發(fā)現(xiàn)殺蟲活性蛋白成分為草酸脫羧酶.

關(guān)鍵詞枯草芽胞桿菌；菌株鑒定；生理生化特性；殺蟲活性

中圖分類號(hào)S476文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)10002537（2014）05001407

枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）具有典型的芽胞桿菌特征，是一類好氧、內(nèi)生抗逆孢子的桿狀細(xì)菌[1]，作為一種有益的土壤細(xì)菌，對(duì)人畜相對(duì)安全，發(fā)達(dá)的分泌系統(tǒng)和抗逆生長(zhǎng)的孢子都讓其對(duì)多種病原菌產(chǎn)生拮抗作用[2].枯草芽胞桿菌抗菌物質(zhì)的分離純化及抗菌作用的分子機(jī)制、拮抗基因的克隆及其表達(dá)調(diào)控等研究已經(jīng)積累了豐富的資料，所篩得的拮抗菌株數(shù)量也較多，但是應(yīng)用到殺蟲方面的菌株較少，潛力有待發(fā)掘[3].鑒于目前農(nóng)作物生產(chǎn)中存在的病蟲害防治問題，本研究從本地農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)，力求獲得適合本地區(qū)的對(duì)鱗翅目害蟲具有高效殺蟲活性的枯草芽胞桿菌，為開發(fā)該菌的生物防治功能和擴(kuò)大農(nóng)作物應(yīng)用范圍奠定基礎(chǔ).

3討論

根據(jù)該菌在平板上的菌落形態(tài)，初步推斷為芽胞桿菌類，故采用高溫法篩選，優(yōu)化了菌株的分離過程，提高了分離效率.本研究通過一系列方法，對(duì)從湖南長(zhǎng)沙市采集到的土樣中利用高溫條件篩選到的219株芽胞桿菌中，分離得到一株新菌株并進(jìn)行了鑒定和歸類.將測(cè)得的16S rRNA基因序列在NCBI 中以blast搜尋，該株菌與Bacillus subtilis strain CU12（JX489167.1）具有很高相似性，序列相似性為99%，可認(rèn)為屬于枯草芽胞桿菌中一個(gè)新的菌株（HX08）.

研究發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis在低pH環(huán)境下也可以誘導(dǎo)合成草酸脫羧酶[78]，枯草芽胞桿菌生防菌株Bs916 可產(chǎn)生抗菌蛋白對(duì)核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum） 和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani） 的菌絲生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，隨后鑒定該蛋白為草酸脫羧酶[910].該酶單體結(jié)構(gòu)含有2個(gè)結(jié)構(gòu)相似的cupin結(jié)構(gòu)域， 并且在每個(gè)域的中心部位含有一個(gè)金屬結(jié)合位點(diǎn)， 和周圍的氨基酸殘基結(jié)合成為雙核中心， 另外它的N末端還含有短螺旋突出肽鏈[8]，該酶的Mn2+催化活性中心可能主要是在結(jié)構(gòu)域II的結(jié)合位點(diǎn)上[1116]，本研究分離出的活性物質(zhì)的具體殺蟲機(jī)理需要進(jìn)一步深入研究.HX08菌株60 h的發(fā)酵液殺蟲效果更為明顯，說明進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期后菌株的殺蟲活性物質(zhì)仍然繼續(xù)增加，能提高殺蟲效果.鑒于目前市場(chǎng)很少有能有效防治鱗翅目害蟲的枯草芽胞桿菌微生物制劑[1718]，本實(shí)驗(yàn)分離出對(duì)棉鈴蟲等鱗翅目害蟲有致死毒力的殺蟲菌株，對(duì)研究草酸脫羧酶殺蟲作用分子機(jī)制及研發(fā)新型殺蟲劑提供了重要基礎(chǔ)，為生態(tài)農(nóng)業(yè)和綠色農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供支撐.

參考文獻(xiàn)：

[1]劉志恒.現(xiàn)代微生物學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社， 2002.

[2]李明，雙寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應(yīng)用[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2009，40（9）：111114.

[3]程洪斌，劉曉橋，陳紅漫.枯草芽孢桿菌防治植物真菌病害研究進(jìn)展[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2006，22（1）：109112.

[4]溫海燕.枯草芽孢桿菌的分離與初步鑒定[J].獸醫(yī)科技， 2012（3）：118119.

[5]曹茂新，洪楓，朱利民.草酸脫羧酶及其應(yīng)用[J].中國(guó)生物工程雜志， 2005 ，25（Z）：170175.

[6]LIU Y， CHEN Z， NG T B， et al. Bacisubin， an antifungal protein with ribonuclease and hemagglutinating activities from Bacillus subtilis strain B916[J]. Peptides， 2007，28（3）：553559.

[7]劉永鋒，陳志誼，周明國(guó)，等. 枯草芽孢桿菌Bs916 的抑菌活性及其抑菌物質(zhì)初探[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)， 2007，9（1）：92954.

[8]于俊杰，陳志誼，胡建坤，等. 枯草芽孢桿菌Bs916 草酸脫羧酶基因Bacisubin 的克隆、原核表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物的酶活性分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2012，28（3）：497502.

[9]李林珂，高玉千，崔錦，等. 一株蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選及酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006（3）：5052.

[10]東秀珠，蔡妙英.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社， 1999：370384.

[11]BANERJEE A B， BOSE S K. Aminoacid configuration of mycobacillin[J]. Nature， 1963，200：471.

[12]TAMEHIRO N ， OKAMOTO Y， OKAMOTO S， et al. Bacilysocin， a novel phospholipid antibiotic produced by Bacillus subtilis 168[J].Antimicrob agents chemother， 2002，46：315320.

[13]沈錦玉，尹文林，曹錚，等.枯草芽孢桿菌B115抗菌蛋白的分離純化及部分性質(zhì)[J].水生生物學(xué)報(bào)， 2005，29（6）：689693.

[14]白延琴，辛小玲， 來有志，等.枯草芽孢桿菌的分離篩選[J].畜牧獸醫(yī)雜志， 2013，32（2）：2427，31.

[15]BESSON F， MICHEL G. Isolation and characterization of new iturins： iturin D and iturin E[J]. J Antibiotics， 1987，40（4）：437 442.

[16]DELEU M， PAQUOT M， NY LANDER. Fengycin interaction with lipidmono layers at the air aqueous interface implications for the effect of fengycin on b iologicalm emb ranes[J]. Colloid Interface Sci， 2005，283（2）：358365.

[17]陳志誼，許志剛，陸凡，等. 拮抗細(xì)菌B916 培養(yǎng)液對(duì)水稻紋枯病菌的抗生活性及其抗菌物質(zhì)的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2000，16（3）：148152.

[18]羅楚平，陳志誼，劉永鋒，等. 生防菌Bs916 合成脂肽類化合物Bac 操縱子突變株構(gòu)建及功能[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2009，49（4）：445452.

（編輯王?。?

摘要以從土壤中自行分離的219株芽胞桿菌中篩選的一株枯草芽胞桿菌菌株HX08為研究對(duì)象，通過菌落形態(tài)觀察、掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡等進(jìn)行菌體形態(tài)觀察以及16S rRNA基因同源性分析等一系列方法鑒定，該株細(xì)菌屬枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis，命名為HX08，并將其16S rRNA基因序列提交上Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得登陸號(hào)KF774302.通過生測(cè)發(fā)現(xiàn)，HX08菌株在60 h發(fā)酵時(shí)間段對(duì)棉鈴蟲的致死效果最好.對(duì)該菌株發(fā)酵液提取的活性蛋白進(jìn)行初步研究，建立了HPLC技術(shù)分離體系，使用H2O做流動(dòng)相，以0.5 mL/min 流速洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為215、254和280 nm，收集第15 mL收集管處即保留時(shí)間為31 min的2號(hào)峰粗分離物活性較高.切取SDSPAGE膠上相對(duì)應(yīng)活性峰目的蛋白質(zhì)條帶酶解，利用質(zhì)譜（ LTQMS） 技術(shù)進(jìn)行了分子特性分析，鑒定發(fā)現(xiàn)殺蟲活性蛋白成分為草酸脫羧酶.

關(guān)鍵詞枯草芽胞桿菌；菌株鑒定；生理生化特性；殺蟲活性

中圖分類號(hào)S476文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)10002537（2014）05001407

枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）具有典型的芽胞桿菌特征，是一類好氧、內(nèi)生抗逆孢子的桿狀細(xì)菌[1]，作為一種有益的土壤細(xì)菌，對(duì)人畜相對(duì)安全，發(fā)達(dá)的分泌系統(tǒng)和抗逆生長(zhǎng)的孢子都讓其對(duì)多種病原菌產(chǎn)生拮抗作用[2].枯草芽胞桿菌抗菌物質(zhì)的分離純化及抗菌作用的分子機(jī)制、拮抗基因的克隆及其表達(dá)調(diào)控等研究已經(jīng)積累了豐富的資料，所篩得的拮抗菌株數(shù)量也較多，但是應(yīng)用到殺蟲方面的菌株較少，潛力有待發(fā)掘[3].鑒于目前農(nóng)作物生產(chǎn)中存在的病蟲害防治問題，本研究從本地農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)，力求獲得適合本地區(qū)的對(duì)鱗翅目害蟲具有高效殺蟲活性的枯草芽胞桿菌，為開發(fā)該菌的生物防治功能和擴(kuò)大農(nóng)作物應(yīng)用范圍奠定基礎(chǔ).

3討論

根據(jù)該菌在平板上的菌落形態(tài)，初步推斷為芽胞桿菌類，故采用高溫法篩選，優(yōu)化了菌株的分離過程，提高了分離效率.本研究通過一系列方法，對(duì)從湖南長(zhǎng)沙市采集到的土樣中利用高溫條件篩選到的219株芽胞桿菌中，分離得到一株新菌株并進(jìn)行了鑒定和歸類.將測(cè)得的16S rRNA基因序列在NCBI 中以blast搜尋，該株菌與Bacillus subtilis strain CU12（JX489167.1）具有很高相似性，序列相似性為99%，可認(rèn)為屬于枯草芽胞桿菌中一個(gè)新的菌株（HX08）.

研究發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis在低pH環(huán)境下也可以誘導(dǎo)合成草酸脫羧酶[78]，枯草芽胞桿菌生防菌株Bs916 可產(chǎn)生抗菌蛋白對(duì)核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum） 和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani） 的菌絲生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，隨后鑒定該蛋白為草酸脫羧酶[910].該酶單體結(jié)構(gòu)含有2個(gè)結(jié)構(gòu)相似的cupin結(jié)構(gòu)域， 并且在每個(gè)域的中心部位含有一個(gè)金屬結(jié)合位點(diǎn)， 和周圍的氨基酸殘基結(jié)合成為雙核中心， 另外它的N末端還含有短螺旋突出肽鏈[8]，該酶的Mn2+催化活性中心可能主要是在結(jié)構(gòu)域II的結(jié)合位點(diǎn)上[1116]，本研究分離出的活性物質(zhì)的具體殺蟲機(jī)理需要進(jìn)一步深入研究.HX08菌株60 h的發(fā)酵液殺蟲效果更為明顯，說明進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期后菌株的殺蟲活性物質(zhì)仍然繼續(xù)增加，能提高殺蟲效果.鑒于目前市場(chǎng)很少有能有效防治鱗翅目害蟲的枯草芽胞桿菌微生物制劑[1718]，本實(shí)驗(yàn)分離出對(duì)棉鈴蟲等鱗翅目害蟲有致死毒力的殺蟲菌株，對(duì)研究草酸脫羧酶殺蟲作用分子機(jī)制及研發(fā)新型殺蟲劑提供了重要基礎(chǔ)，為生態(tài)農(nóng)業(yè)和綠色農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供支撐.

參考文獻(xiàn)：

[1]劉志恒.現(xiàn)代微生物學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社， 2002.

[2]李明，雙寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應(yīng)用[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2009，40（9）：111114.

[3]程洪斌，劉曉橋，陳紅漫.枯草芽孢桿菌防治植物真菌病害研究進(jìn)展[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2006，22（1）：109112.

[4]溫海燕.枯草芽孢桿菌的分離與初步鑒定[J].獸醫(yī)科技， 2012（3）：118119.

[5]曹茂新，洪楓，朱利民.草酸脫羧酶及其應(yīng)用[J].中國(guó)生物工程雜志， 2005 ，25（Z）：170175.

[6]LIU Y， CHEN Z， NG T B， et al. Bacisubin， an antifungal protein with ribonuclease and hemagglutinating activities from Bacillus subtilis strain B916[J]. Peptides， 2007，28（3）：553559.

[7]劉永鋒，陳志誼，周明國(guó)，等. 枯草芽孢桿菌Bs916 的抑菌活性及其抑菌物質(zhì)初探[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)， 2007，9（1）：92954.

[8]于俊杰，陳志誼，胡建坤，等. 枯草芽孢桿菌Bs916 草酸脫羧酶基因Bacisubin 的克隆、原核表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物的酶活性分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2012，28（3）：497502.

[9]李林珂，高玉千，崔錦，等. 一株蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選及酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006（3）：5052.

[10]東秀珠，蔡妙英.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社， 1999：370384.

[11]BANERJEE A B， BOSE S K. Aminoacid configuration of mycobacillin[J]. Nature， 1963，200：471.

[12]TAMEHIRO N ， OKAMOTO Y， OKAMOTO S， et al. Bacilysocin， a novel phospholipid antibiotic produced by Bacillus subtilis 168[J].Antimicrob agents chemother， 2002，46：315320.

[13]沈錦玉，尹文林，曹錚，等.枯草芽孢桿菌B115抗菌蛋白的分離純化及部分性質(zhì)[J].水生生物學(xué)報(bào)， 2005，29（6）：689693.

[14]白延琴，辛小玲， 來有志，等.枯草芽孢桿菌的分離篩選[J].畜牧獸醫(yī)雜志， 2013，32（2）：2427，31.

[15]BESSON F， MICHEL G. Isolation and characterization of new iturins： iturin D and iturin E[J]. J Antibiotics， 1987，40（4）：437 442.

[16]DELEU M， PAQUOT M， NY LANDER. Fengycin interaction with lipidmono layers at the air aqueous interface implications for the effect of fengycin on b iologicalm emb ranes[J]. Colloid Interface Sci， 2005，283（2）：358365.

[17]陳志誼，許志剛，陸凡，等. 拮抗細(xì)菌B916 培養(yǎng)液對(duì)水稻紋枯病菌的抗生活性及其抗菌物質(zhì)的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2000，16（3）：148152.

[18]羅楚平，陳志誼，劉永鋒，等. 生防菌Bs916 合成脂肽類化合物Bac 操縱子突變株構(gòu)建及功能[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2009，49（4）：445452.

（編輯王?。?

摘要以從土壤中自行分離的219株芽胞桿菌中篩選的一株枯草芽胞桿菌菌株HX08為研究對(duì)象，通過菌落形態(tài)觀察、掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡等進(jìn)行菌體形態(tài)觀察以及16S rRNA基因同源性分析等一系列方法鑒定，該株細(xì)菌屬枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis，命名為HX08，并將其16S rRNA基因序列提交上Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得登陸號(hào)KF774302.通過生測(cè)發(fā)現(xiàn)，HX08菌株在60 h發(fā)酵時(shí)間段對(duì)棉鈴蟲的致死效果最好.對(duì)該菌株發(fā)酵液提取的活性蛋白進(jìn)行初步研究，建立了HPLC技術(shù)分離體系，使用H2O做流動(dòng)相，以0.5 mL/min 流速洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為215、254和280 nm，收集第15 mL收集管處即保留時(shí)間為31 min的2號(hào)峰粗分離物活性較高.切取SDSPAGE膠上相對(duì)應(yīng)活性峰目的蛋白質(zhì)條帶酶解，利用質(zhì)譜（ LTQMS） 技術(shù)進(jìn)行了分子特性分析，鑒定發(fā)現(xiàn)殺蟲活性蛋白成分為草酸脫羧酶.

關(guān)鍵詞枯草芽胞桿菌；菌株鑒定；生理生化特性；殺蟲活性

中圖分類號(hào)S476文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)10002537（2014）05001407

枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）具有典型的芽胞桿菌特征，是一類好氧、內(nèi)生抗逆孢子的桿狀細(xì)菌[1]，作為一種有益的土壤細(xì)菌，對(duì)人畜相對(duì)安全，發(fā)達(dá)的分泌系統(tǒng)和抗逆生長(zhǎng)的孢子都讓其對(duì)多種病原菌產(chǎn)生拮抗作用[2].枯草芽胞桿菌抗菌物質(zhì)的分離純化及抗菌作用的分子機(jī)制、拮抗基因的克隆及其表達(dá)調(diào)控等研究已經(jīng)積累了豐富的資料，所篩得的拮抗菌株數(shù)量也較多，但是應(yīng)用到殺蟲方面的菌株較少，潛力有待發(fā)掘[3].鑒于目前農(nóng)作物生產(chǎn)中存在的病蟲害防治問題，本研究從本地農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)，力求獲得適合本地區(qū)的對(duì)鱗翅目害蟲具有高效殺蟲活性的枯草芽胞桿菌，為開發(fā)該菌的生物防治功能和擴(kuò)大農(nóng)作物應(yīng)用范圍奠定基礎(chǔ).

3討論

根據(jù)該菌在平板上的菌落形態(tài)，初步推斷為芽胞桿菌類，故采用高溫法篩選，優(yōu)化了菌株的分離過程，提高了分離效率.本研究通過一系列方法，對(duì)從湖南長(zhǎng)沙市采集到的土樣中利用高溫條件篩選到的219株芽胞桿菌中，分離得到一株新菌株并進(jìn)行了鑒定和歸類.將測(cè)得的16S rRNA基因序列在NCBI 中以blast搜尋，該株菌與Bacillus subtilis strain CU12（JX489167.1）具有很高相似性，序列相似性為99%，可認(rèn)為屬于枯草芽胞桿菌中一個(gè)新的菌株（HX08）.

研究發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis在低pH環(huán)境下也可以誘導(dǎo)合成草酸脫羧酶[78]，枯草芽胞桿菌生防菌株Bs916 可產(chǎn)生抗菌蛋白對(duì)核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum） 和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani） 的菌絲生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，隨后鑒定該蛋白為草酸脫羧酶[910].該酶單體結(jié)構(gòu)含有2個(gè)結(jié)構(gòu)相似的cupin結(jié)構(gòu)域， 并且在每個(gè)域的中心部位含有一個(gè)金屬結(jié)合位點(diǎn)， 和周圍的氨基酸殘基結(jié)合成為雙核中心， 另外它的N末端還含有短螺旋突出肽鏈[8]，該酶的Mn2+催化活性中心可能主要是在結(jié)構(gòu)域II的結(jié)合位點(diǎn)上[1116]，本研究分離出的活性物質(zhì)的具體殺蟲機(jī)理需要進(jìn)一步深入研究.HX08菌株60 h的發(fā)酵液殺蟲效果更為明顯，說明進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期后菌株的殺蟲活性物質(zhì)仍然繼續(xù)增加，能提高殺蟲效果.鑒于目前市場(chǎng)很少有能有效防治鱗翅目害蟲的枯草芽胞桿菌微生物制劑[1718]，本實(shí)驗(yàn)分離出對(duì)棉鈴蟲等鱗翅目害蟲有致死毒力的殺蟲菌株，對(duì)研究草酸脫羧酶殺蟲作用分子機(jī)制及研發(fā)新型殺蟲劑提供了重要基礎(chǔ)，為生態(tài)農(nóng)業(yè)和綠色農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供支撐.

參考文獻(xiàn)：

[1]劉志恒.現(xiàn)代微生物學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社， 2002.

[2]李明，雙寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應(yīng)用[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2009，40（9）：111114.

[3]程洪斌，劉曉橋，陳紅漫.枯草芽孢桿菌防治植物真菌病害研究進(jìn)展[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2006，22（1）：109112.

[4]溫海燕.枯草芽孢桿菌的分離與初步鑒定[J].獸醫(yī)科技， 2012（3）：118119.

[5]曹茂新，洪楓，朱利民.草酸脫羧酶及其應(yīng)用[J].中國(guó)生物工程雜志， 2005 ，25（Z）：170175.

[6]LIU Y， CHEN Z， NG T B， et al. Bacisubin， an antifungal protein with ribonuclease and hemagglutinating activities from Bacillus subtilis strain B916[J]. Peptides， 2007，28（3）：553559.

[7]劉永鋒，陳志誼，周明國(guó)，等. 枯草芽孢桿菌Bs916 的抑菌活性及其抑菌物質(zhì)初探[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)， 2007，9（1）：92954.

[8]于俊杰，陳志誼，胡建坤，等. 枯草芽孢桿菌Bs916 草酸脫羧酶基因Bacisubin 的克隆、原核表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物的酶活性分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2012，28（3）：497502.

[9]李林珂，高玉千，崔錦，等. 一株蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選及酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006（3）：5052.

[10]東秀珠，蔡妙英.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社， 1999：370384.

[11]BANERJEE A B， BOSE S K. Aminoacid configuration of mycobacillin[J]. Nature， 1963，200：471.

[12]TAMEHIRO N ， OKAMOTO Y， OKAMOTO S， et al. Bacilysocin， a novel phospholipid antibiotic produced by Bacillus subtilis 168[J].Antimicrob agents chemother， 2002，46：315320.

[13]沈錦玉，尹文林，曹錚，等.枯草芽孢桿菌B115抗菌蛋白的分離純化及部分性質(zhì)[J].水生生物學(xué)報(bào)， 2005，29（6）：689693.

[14]白延琴，辛小玲， 來有志，等.枯草芽孢桿菌的分離篩選[J].畜牧獸醫(yī)雜志， 2013，32（2）：2427，31.

[15]BESSON F， MICHEL G. Isolation and characterization of new iturins： iturin D and iturin E[J]. J Antibiotics， 1987，40（4）：437 442.

[16]DELEU M， PAQUOT M， NY LANDER. Fengycin interaction with lipidmono layers at the air aqueous interface implications for the effect of fengycin on b iologicalm emb ranes[J]. Colloid Interface Sci， 2005，283（2）：358365.

[17]陳志誼，許志剛，陸凡，等. 拮抗細(xì)菌B916 培養(yǎng)液對(duì)水稻紋枯病菌的抗生活性及其抗菌物質(zhì)的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2000，16（3）：148152.

[18]羅楚平，陳志誼，劉永鋒，等. 生防菌Bs916 合成脂肽類化合物Bac 操縱子突變株構(gòu)建及功能[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2009，49（4）：445452.

（編輯王健）