黨參多糖對實驗動物胃腸道功能的影響

馬方勵，沈雪梅，時 軍

(1.無限極(中國)有限公司，廣東廣州 510665;2.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

黨參(Radix Codonopsis)為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素花黨參Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川黨參Codonopsis tangshen Oliv.的干燥根，性平味甘，為補(bǔ)氣良藥，歷代醫(yī)家常替代人參藥用。黨參具有補(bǔ)氣益肺功效，其健脾養(yǎng)胃功效亦很突出，因其健脾而不燥、養(yǎng)胃而不濕，常被用于改善消化類的方劑及保健食品組方中?！侗静輳男隆访枋?，黨參“補(bǔ)中益氣，和脾胃除煩渴”?！侗静菡x》亦有描述，“黨參力能補(bǔ)脾養(yǎng)胃，潤肺生津，健運中氣，本與人參不甚相遠(yuǎn)。其尤可貴者，則健脾運而不燥，滋胃陰而不濕”［1］。

多糖類成分是黨參藥材中的重要活性成分，含量達(dá)10% ～20%［2］。多糖類成分藥理活性明顯，如增強(qiáng)免疫功能和超氧化物歧化酶(SOD)活性、降低丙二醛(MDA)的含量、清除超氧和羥自由基、促進(jìn)脾臟造血等。另外，多糖還可顯著降低胃液、胃酸分泌和胃蛋白酶活性［3-4］。然而，關(guān)于黨參多糖改善消化功能的研究報道較少，筆者從實驗動物食物攝取量、體重增加、胃液活力及消化道黏膜切片觀察等角度，考察黨參多糖對實驗動物胃腸道功能的影響，以期闡述黨參“健脾益胃”的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材與試劑 甘肅產(chǎn)黨參藥材，安徽歸然藥業(yè)有限公司，批號20120318;復(fù)方地芬諾酯片，江蘇平光制藥有限公司，批號1205221;活性炭，天津咸水沽化工有限公司;阿拉伯樹膠，天津永大化工有限公司。

1.1.2 實驗動物 昆明種雄性小鼠，體重(20±2)g(合格證號SCXK粵2011-0015)，南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心;SD雄性大鼠，體重(140±10)g(合格證號SCXK粵2011-0015)，南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。

1.1.3 儀器 海精科YP1002N百分之一電子天平電子分析天平，上海玖梧康德萊一次性注射器、手術(shù)器械，測量器具等。

1.2 方法

1.2.1 黨參多糖的提取與純化 取黨參藥材，60℃烘干，剪碎，以濃度95%乙醇冷浸提取3次，每次12 h。藥渣于室溫通風(fēng)處晾干，加水熱提取3次，合并濾液，將濾液濃縮成稠浸膏狀后，加無水乙醇調(diào)整醇濃度至80%后，靜置過夜。將提取液過濾，收集沉淀物，即得黨參粗多糖。將粗多糖用濃度5%三氯醋酸溶解，離心(3 000 rpm)，上清液濃縮成稠浸膏，用無水乙醇洗滌2次，離心(3 000 rpm)，留沉淀物。將沉淀物減壓干燥，即得精制多糖。按苯酚—硫酸法測定多糖純度，含量(65.8±2.4)%(n=3)，平均得率(19.9±1.9)%(n=3)。

1.2.2 樣品溶液的配制 (1)受試樣品溶液:稱取適量的黨參多糖提取物，加水配制成3種濃度(5、10、20 g·L-1)的黨參多糖溶液各200 mL，置于冰箱中0～4℃保存，用前水浴加熱至40～50℃;(2)四君子湯(實驗室自制):將人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草各10 g，加水煎煮3次，合并濾液，濾液濃縮至200 mL，放涼，置于冰箱中0～4℃保存，灌胃給藥前水浴加熱至40～50℃;(3)活性炭混懸液:稱取阿拉伯樹膠100 g，加水750 mL，煮沸至溶液呈透明，活性炭粉碎成細(xì)粉，稱取50 g，加至上述溶液中煮沸3次，溶液放涼后加水定容到1 000 mL。0～4℃保存，用前搖勻;(4)復(fù)方地芬諾酯混懸液:取復(fù)方地芬諾酯片(每片2.5 mg)10片，研碎后加水至100 mL，臨用前配制。

1.2.3 試驗動物分組與給藥 (1)大鼠試驗組，共50只。設(shè)黨參多糖3個劑量組 (50、100、200 mg·kg-1)，空白組，陽性對照組(四君子湯濃縮液，7.5 mL·kg-1)，每組10只。每日灌胃給藥1次，空白組按同體積給予試驗用水，試驗期間自由進(jìn)食;(2)小鼠試驗組，共60只。設(shè)黨參多糖3個劑量組(100、200、400 mg·kg-1)、空白組、陽性對照組(四君子湯濃縮液，15 mL·kg-1)，模型對照組，每組10只。每日灌胃給藥1次，空白組和模型對照組按同體積給予試驗用水，試驗期間自由進(jìn)食。

1.2.4 大鼠體重、體重增重、攝食量和食物利用率［5］連續(xù)給藥30 d，每周測體重和食物攝入量，計算食物利用率(見公式1)。

1.2.5 小鼠小腸運動試驗［6］連續(xù)給藥20 d，結(jié)束給藥后禁食不禁水24 h，給予各給藥組、空白組及模型對照組一次受試樣品或蒸餾水，30 min后各給藥組和模型對照組按劑量5 mg·kg-1給予復(fù)方地芬諾酯(制成0.05 g/100 mL混懸液)，空白組給予蒸餾水，30 min后各組按10 mg·kg-1劑量給予指示劑(含5%的活性炭粉、10%阿拉伯樹膠)。

25 min后斷頸處死動物，解剖分離腸系膜，取出幽門(上端)至回盲部(下端)小腸管，測量小腸總長度及墨汁推進(jìn)長度(幽門至墨汁前沿)。計算炭末推進(jìn)比P(見公式2)及炭末推進(jìn)率(見公式3)。

1.2.6 消化酶測定 受試試驗大鼠與1.2.4項同為一組，末次給予受試樣品后，大鼠禁食不禁水16 h。乙醚麻醉后，結(jié)扎大鼠幽門，收集2 h內(nèi)排出的胃液，測定單位時間內(nèi)胃液量。取胃液1 mL，加入0.05 mol·L-1鹽酸溶液15 mL搖勻，放入新鮮制作的蛋白管兩根。塞好瓶口，37℃恒溫孵育24 h，取出蛋白管，用尺測量蛋白管兩端透明部分的長度(mm)，以四端之值求其平均值。計算胃蛋白酶活性(見公式4)和胃蛋白酶排出量(見公式5)。

1.2.7 胃腸切片制片及觀察 連續(xù)給藥30 d，結(jié)束給藥后禁食不禁水24 h，腹腔注射烏來糖(劑量1.5 g·kg-1)，麻醉后在無菌條件下取大鼠胃、十二指腸、空腸組織，經(jīng)福爾馬林(濃度10%)固定，24 h后常規(guī)石蠟包埋，4 mm厚連續(xù)切片，蘇木素—伊紅(HE)染色，光鏡觀察微黏膜表面特征及變化，攝片。

1.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，進(jìn)行組間方差分析。若各組方差齊，采用單因素方差分析法(one way-ANOVA)，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)，采用LSD法進(jìn)行各劑量組與對照組之間的均數(shù)比較;若方差齊性不能滿足，采用Tamhane＇s T2法統(tǒng)計。

2 結(jié)果

2.1 大鼠體重、體重增重、攝食量和食物利用率試驗

2.1.1 黨參多糖對大鼠體重的影響 從第1周開始，黨參多糖高劑量組大鼠體重均顯著高于空白組(P＜0.05或P＜0.01);觀察期末，中、高劑量組大鼠體重顯著高于空白組 (P＜0.05)，與陽性對照組無差異。中劑量組、高劑量組大鼠總體重增長顯著高于空白組(P＜0.01)，見表1。

2.1.2 黨參多糖對大鼠攝食量的影響 第2周大鼠的攝食量明顯增加，與空白組相比，黨參多糖高劑量組攝食量均顯著增加(P＜0.01)。中、高劑量組總攝食量與空白組比較，差異有顯著性 (P＜0.05)，見表 2。

表1 黨參多糖對大鼠體重的影響(±s，n=10)

表1 黨參多糖對大鼠體重的影響(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與陽性對照組比較，△P ＜0.05;△△P＜0.01。

.9 230.4±19.8 89.1±12.8低劑量組(50 mg·kg-1) 139.34±14.6 157.4±15.8 194.9±24.1 220.4±19.6△ 241.2±18.4△ 101.9±12.2△中劑量組(100 mg·kg-1) 143.7±12.9 170.2±8.8 197.6±11.8 228.0±12.67* 250.2±12.4* 106.5±12.8*高劑量組(200 mg·kg-1) 143.0±9.4 173.2±10.9* 209.1±18.2＊＊ 234.1±12.4＊＊ 261.3±12.0＊＊ 118.3±13.1＊＊陽性對照組(7.5 mL·kg-1) 139.2±11.2 169.5±10.8 193.2±10.2 235.4±9.8＊＊ 257.4±10.9＊＊ 118.2±5.4/g空白組 141.3±10.5 162.00±10.3 183.7±16.2 212.6±19組別 體重/g初始 第1周 第2周 第3周 期末 體重增長＊＊

表2 黨參多糖對大鼠攝食量的影響(±s，n=10)

表2 黨參多糖對大鼠攝食量的影響(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與陽性對照組比較，△P ＜0.05;△△P＜0.01。

±36.4低劑量組(50 mg·kg-1) 55.8±11.0 81.9±4.4△ 82.5±4.4△ 68.9±5.3 289.1±14.7中劑量組(100 mg·kg-1) 60.2±8.4 78.4±16.4 92.5±5.4△ 71.5±7.7 302.6±20.7*高劑量組(200 mg·kg-1) 59.7±16.8 92.8±9.7＊＊△△ 81.5±19.8△△ 71.8±8.9 305.8±20.1*陽性對照組(7.5 mL·kg-1) 63.2±3.7 71.2±8.5 106.1±7.8＊＊ 64.2±14.4 304.7±17.6/g空白組 58.7±6.4 72.8±8.6 86.4±19.7 63.2±14.6 281.1組別 攝食量/g第1周 第2周 第3周 期末 總攝食量*

2.1.3 黨參多糖對食物利用率的影響 黨參多糖具有一定程度的增加食物利用率作用。與空白組相比，黨參多糖高劑量組食物總利用率較大，與陽性對照組相當(dāng)(P＜0.01);高劑量試驗組顯著高于空白組，見表3。

2.2 小腸運動試驗 模型組小腸推進(jìn)率明顯低于空白組(P＜0.01)，表明便秘模型建立成功。各劑量組小鼠小腸炭末推進(jìn)率明顯高于模型組，其中中劑量組、高劑量組與陽性對照組相當(dāng)，與模型組比較，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。說明黨參多糖對復(fù)方地芬諾酯引起的小腸推進(jìn)降低有改善作用，見表4。

2.3 大鼠消化酶測定結(jié)果 黨參多糖可明顯提高胃蛋白酶活力及胃蛋白酶排出量，其中高劑量組極為顯著(P＜0.01)，見表5。

2.4 大鼠胃腸病理切片觀察結(jié)果 黨參多糖各劑量組，相對于空白組大鼠，大鼠的胃黏膜及胃壁均有不同程度的增厚，微絨毛增大;桔紅色胃黏膜上下兩側(cè)分別被覆復(fù)層扁平上皮和單層柱狀上皮，黏膜交界處的組織致密，深方的環(huán)層肌增厚。黨參多糖各劑量組，十二指腸及空腸的腸絨毛平均面積均有不同程度增大。中、高劑量組與陽性對照組比較無明顯差異，見圖1～3。

表3 黨參多糖對食物利用率的影響(±s，n=10)

表3 黨參多糖對食物利用率的影響(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

1.99±4.6低劑量組(50 mg·kg-1) 32.00±6.99 46.02±13.2* 30.95±18.34 30.36±8.2 35.31±4.4中劑量組(100 mg·kg-1) 43.67±10.2* 33.93±17.4 32.85±12.65 31.39±3.9 35.41±5.4高劑量組(200 mg·kg-1) 49.67±9.5＊＊ 39.23±13.1 28.85±13.7 38.63±7.1＊＊ 38.76±4.5＊＊陽性對照組(7.5 mL·kg-1) 48.16±4.5＊＊ 33.71±4.4 39.99±3.5 34.19±4.1＊＊ 38.85±1.8/%空白組 35.43±4.7 30.62±22.2 31.51±11.7 27.01±7.7 3組別 食物利用率/%第1周 第2周 第3周 期末 利用率＊＊

表4 黨參多糖對小鼠炭末推進(jìn)率的影響(±s，n=10)

表4 黨參多糖對小鼠炭末推進(jìn)率的影響(±s，n=10)

注:與模型組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01。

/%空白組 71.2±12.6## 0.98±0.28組別 炭末推進(jìn)比/% 炭末推進(jìn)率##模型對照組 52.6±0.17 0.81±0.16低劑量組(100 mg·kg-1) 68.4±10.3# 0.91±0.12#中劑量組(200 mg·kg-1) 91.5±7.8## 1.30±0.16##高劑量組(400 mg·kg-1) 77.8±23.6## 1.07±0.32##陽性對照組(15 mL·kg-1) 76.9±14.1## 1.06±0.16##

表5 黨參多糖對大鼠消化酶的影響(±s，n=10)

表5 黨參多糖對大鼠消化酶的影響(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽性對照組比較，△△P ＜0.01。

白酶·h -1 3.7.05＊＊(100 mg·kg-1)0.71±0.23 17.07±4.42* 12.10±4.53*高劑量組(200 mg·kg-1)0.68±0.17*25.42±9.76＊＊△△ 17.38±7.81＊＊陽性對照組(7.5 mL·kg-1)0.68±0.18* 18.30±6.04* 12.10±3.86*

圖1 大鼠胃黏膜病理切片(×40)

圖2 大鼠十二指腸黏膜病理切片(×40)

圖3 大鼠空腸黏膜病理切片(×40)

3 討論

消化不良是臨床常見癥狀，在我國城市人口中發(fā)生率高達(dá)20% ～54%，其發(fā)病率隨年齡的增長而增加，50～59歲年齡段達(dá)到高峰。消化不良主要表現(xiàn)為脾虛，而脾是一個以消化系統(tǒng)為主的多臟器多系統(tǒng)的綜合功能單位，脾虛時大量器官會出現(xiàn)基因水平、分子水平、細(xì)胞水平的變化，從而引起組織結(jié)構(gòu)和功能的改變，其中消化酶的變化更顯突出［9］。

化學(xué)藥物治療消化不良，常利用增加胃動力制劑或消化酶制劑，起效迅速，但不能從根源上解決問題，往往引發(fā)如過敏反應(yīng)、口干等不良反應(yīng)，長期服用還會產(chǎn)生耐藥性。一些補(bǔ)虛類中藥具有健脾益胃功效，可以顯著改善消化不良癥狀，服用安全、無副作用。黨參中多糖含量高達(dá)10% ～20%，是黨參藥材健脾益胃的活性有效部位。動物功效試驗表明，黨參多糖具有促進(jìn)消化功能，即增進(jìn)動物食欲和進(jìn)食量，提高胃蛋白酶活力及胃蛋白酶排出量，促進(jìn)小腸蠕動。

20世紀(jì)90年代的研究認(rèn)為，口服多糖類大分子不被腸道吸收，不具有藥理活性［7］。但近年來的研究發(fā)現(xiàn)，口服多糖可以通過改變胃腸道菌群代謝，從而發(fā)揮改善胃腸吸收的作用，這可能與黨參多糖含有高度分支結(jié)構(gòu)的糖鏈、糖鏈間形成大小不同的環(huán)有關(guān)［8-9］。如麥冬多糖MDG-1在腸道內(nèi)分解，主要代謝部位在大腸，腸道內(nèi)環(huán)境及細(xì)菌共同作用引起多糖降解，發(fā)揮降血糖的活性［10］。

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