PBEF在體外循環(huán)術(shù)后肺血管內(nèi)皮通透性中的機(jī)制研究

楊威　董嘯　周建良　龔藝　徐建軍

【摘要】目的：探討PBEF在體外循環(huán)術(shù)后肺血管內(nèi)皮通透性增加中的機(jī)制，為提出更好的體外循環(huán)期間肺保護(hù)措施提供依據(jù)。方法：建立動(dòng)物模型并進(jìn)行分組，A組僅行病毒轉(zhuǎn)染；B組僅行30min深低溫停循環(huán)；C組行病毒轉(zhuǎn)染后，再行30min深低溫停循環(huán)。應(yīng)用Western blot檢測(cè)各組大鼠肺組織。結(jié)果：C組的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)明顯高于A(yíng)、B組和對(duì)照組。結(jié)論：PBEF通過(guò)P38MAPK、ERK等途徑改變內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中MLC的磷酸化狀態(tài)，VE-cadherin和FAK也參與了肺血管內(nèi)皮通透性增加的過(guò)程。

【關(guān)鍵詞】前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子；體外循環(huán)；肺血管內(nèi)皮；通透性

【中圖分類(lèi)號(hào)】R654.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）19-0024-02

體外循環(huán)（cardiopulmonary bypass， CPB）技術(shù)是心臟外科手術(shù)的必備條件，但其帶來(lái)的術(shù)后肺損傷等并發(fā)癥一直威脅著行心臟手術(shù)的患者，重者發(fā)展為呼吸窘迫綜合癥，甚至死亡，嚴(yán)重威脅到患者的生存和預(yù)后。前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作為一種具有生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和煙酰胺磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶作用的分子，認(rèn)為PBEF在急性肺損傷中起到非常重要的作用。并參與調(diào)控炎癥、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、內(nèi)皮血管形成、心臟保護(hù)效應(yīng)和免疫應(yīng)答等多種作用。但具體機(jī)制仍不清楚，因此通過(guò)建立大鼠模型分析PBEF的作用機(jī)制，結(jié)果現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料和方法

1.1一般資料選擇體重在25～30g之間的成熟雄性昆明種小鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（南昌大學(xué)心血管病研究所提供），按不同處理方法分4組，每組10只，所有小鼠均在室溫（24±2）℃，濕度（55±5）%環(huán)境中飼養(yǎng)，自由飲水、攝食，如在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物死亡，選取新小鼠進(jìn)行補(bǔ)充。對(duì)照組動(dòng)物在麻醉后建立體外循環(huán)，不行體外循環(huán)轉(zhuǎn)流；A組動(dòng)物行慢病毒AD-PBEFshRNA轉(zhuǎn)染，在麻醉后建立體外循環(huán)，不行體外循環(huán)轉(zhuǎn)流；B組動(dòng)物在建立體外循環(huán)后進(jìn)行30min深低溫停循環(huán)；C組動(dòng)物行同種病毒轉(zhuǎn)染后，再進(jìn)行30min深低溫停循環(huán)。Western blot和免疫組化試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.2方法大鼠處死后取右肺前葉用于肺組織濕干重比的測(cè)定，右肺中后葉留待Western blot、ELISA和免疫組化檢測(cè)。按試劑盒說(shuō)明分別進(jìn)行Western blot和ELISA檢測(cè)，Western blot檢測(cè)磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)。免疫組化檢測(cè)PBEF，鏡檢以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)[1]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Western blot檢測(cè)結(jié)果各組Western blot檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，C組磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)與A組、B組和對(duì)照組的差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。見(jiàn)表1。

2.2免疫組化檢測(cè)結(jié)果A、B、C組在肺泡上皮細(xì)胞、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞胞核及氣管粘膜上皮細(xì)胞均有廣泛的棕黃色顆粒，PBEF高表達(dá)。C組PBEF的表達(dá)明顯高于A(yíng)、B組和對(duì)照組，表達(dá)差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P<0.05）；C組的PBEF表達(dá)與對(duì)照組的差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。見(jiàn)表2。

【摘要】目的：探討PBEF在體外循環(huán)術(shù)后肺血管內(nèi)皮通透性增加中的機(jī)制，為提出更好的體外循環(huán)期間肺保護(hù)措施提供依據(jù)。方法：建立動(dòng)物模型并進(jìn)行分組，A組僅行病毒轉(zhuǎn)染；B組僅行30min深低溫停循環(huán)；C組行病毒轉(zhuǎn)染后，再行30min深低溫停循環(huán)。應(yīng)用Western blot檢測(cè)各組大鼠肺組織。結(jié)果：C組的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)明顯高于A(yíng)、B組和對(duì)照組。結(jié)論：PBEF通過(guò)P38MAPK、ERK等途徑改變內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中MLC的磷酸化狀態(tài)，VE-cadherin和FAK也參與了肺血管內(nèi)皮通透性增加的過(guò)程。

【關(guān)鍵詞】前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子；體外循環(huán)；肺血管內(nèi)皮；通透性

【中圖分類(lèi)號(hào)】R654.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）19-0024-02

體外循環(huán)（cardiopulmonary bypass， CPB）技術(shù)是心臟外科手術(shù)的必備條件，但其帶來(lái)的術(shù)后肺損傷等并發(fā)癥一直威脅著行心臟手術(shù)的患者，重者發(fā)展為呼吸窘迫綜合癥，甚至死亡，嚴(yán)重威脅到患者的生存和預(yù)后。前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作為一種具有生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和煙酰胺磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶作用的分子，認(rèn)為PBEF在急性肺損傷中起到非常重要的作用。并參與調(diào)控炎癥、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、內(nèi)皮血管形成、心臟保護(hù)效應(yīng)和免疫應(yīng)答等多種作用。但具體機(jī)制仍不清楚，因此通過(guò)建立大鼠模型分析PBEF的作用機(jī)制，結(jié)果現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料和方法

1.1一般資料選擇體重在25～30g之間的成熟雄性昆明種小鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（南昌大學(xué)心血管病研究所提供），按不同處理方法分4組，每組10只，所有小鼠均在室溫（24±2）℃，濕度（55±5）%環(huán)境中飼養(yǎng)，自由飲水、攝食，如在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物死亡，選取新小鼠進(jìn)行補(bǔ)充。對(duì)照組動(dòng)物在麻醉后建立體外循環(huán)，不行體外循環(huán)轉(zhuǎn)流；A組動(dòng)物行慢病毒AD-PBEFshRNA轉(zhuǎn)染，在麻醉后建立體外循環(huán)，不行體外循環(huán)轉(zhuǎn)流；B組動(dòng)物在建立體外循環(huán)后進(jìn)行30min深低溫停循環(huán)；C組動(dòng)物行同種病毒轉(zhuǎn)染后，再進(jìn)行30min深低溫停循環(huán)。Western blot和免疫組化試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.2方法大鼠處死后取右肺前葉用于肺組織濕干重比的測(cè)定，右肺中后葉留待Western blot、ELISA和免疫組化檢測(cè)。按試劑盒說(shuō)明分別進(jìn)行Western blot和ELISA檢測(cè)，Western blot檢測(cè)磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)。免疫組化檢測(cè)PBEF，鏡檢以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)[1]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Western blot檢測(cè)結(jié)果各組Western blot檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，C組磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)與A組、B組和對(duì)照組的差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。見(jiàn)表1。

2.2免疫組化檢測(cè)結(jié)果A、B、C組在肺泡上皮細(xì)胞、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞胞核及氣管粘膜上皮細(xì)胞均有廣泛的棕黃色顆粒，PBEF高表達(dá)。C組PBEF的表達(dá)明顯高于A(yíng)、B組和對(duì)照組，表達(dá)差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P<0.05）；C組的PBEF表達(dá)與對(duì)照組的差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。見(jiàn)表2。

【摘要】目的：探討PBEF在體外循環(huán)術(shù)后肺血管內(nèi)皮通透性增加中的機(jī)制，為提出更好的體外循環(huán)期間肺保護(hù)措施提供依據(jù)。方法：建立動(dòng)物模型并進(jìn)行分組，A組僅行病毒轉(zhuǎn)染；B組僅行30min深低溫停循環(huán)；C組行病毒轉(zhuǎn)染后，再行30min深低溫停循環(huán)。應(yīng)用Western blot檢測(cè)各組大鼠肺組織。結(jié)果：C組的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)明顯高于A(yíng)、B組和對(duì)照組。結(jié)論：PBEF通過(guò)P38MAPK、ERK等途徑改變內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中MLC的磷酸化狀態(tài)，VE-cadherin和FAK也參與了肺血管內(nèi)皮通透性增加的過(guò)程。

【關(guān)鍵詞】前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子；體外循環(huán)；肺血管內(nèi)皮；通透性

【中圖分類(lèi)號(hào)】R654.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）19-0024-02

體外循環(huán)（cardiopulmonary bypass， CPB）技術(shù)是心臟外科手術(shù)的必備條件，但其帶來(lái)的術(shù)后肺損傷等并發(fā)癥一直威脅著行心臟手術(shù)的患者，重者發(fā)展為呼吸窘迫綜合癥，甚至死亡，嚴(yán)重威脅到患者的生存和預(yù)后。前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作為一種具有生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和煙酰胺磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶作用的分子，認(rèn)為PBEF在急性肺損傷中起到非常重要的作用。并參與調(diào)控炎癥、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、內(nèi)皮血管形成、心臟保護(hù)效應(yīng)和免疫應(yīng)答等多種作用。但具體機(jī)制仍不清楚，因此通過(guò)建立大鼠模型分析PBEF的作用機(jī)制，結(jié)果現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料和方法

1.1一般資料選擇體重在25～30g之間的成熟雄性昆明種小鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（南昌大學(xué)心血管病研究所提供），按不同處理方法分4組，每組10只，所有小鼠均在室溫（24±2）℃，濕度（55±5）%環(huán)境中飼養(yǎng)，自由飲水、攝食，如在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物死亡，選取新小鼠進(jìn)行補(bǔ)充。對(duì)照組動(dòng)物在麻醉后建立體外循環(huán)，不行體外循環(huán)轉(zhuǎn)流；A組動(dòng)物行慢病毒AD-PBEFshRNA轉(zhuǎn)染，在麻醉后建立體外循環(huán)，不行體外循環(huán)轉(zhuǎn)流；B組動(dòng)物在建立體外循環(huán)后進(jìn)行30min深低溫停循環(huán)；C組動(dòng)物行同種病毒轉(zhuǎn)染后，再進(jìn)行30min深低溫停循環(huán)。Western blot和免疫組化試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.2方法大鼠處死后取右肺前葉用于肺組織濕干重比的測(cè)定，右肺中后葉留待Western blot、ELISA和免疫組化檢測(cè)。按試劑盒說(shuō)明分別進(jìn)行Western blot和ELISA檢測(cè)，Western blot檢測(cè)磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)。免疫組化檢測(cè)PBEF，鏡檢以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)[1]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Western blot檢測(cè)結(jié)果各組Western blot檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，C組磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達(dá)與A組、B組和對(duì)照組的差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。見(jiàn)表1。

2.2免疫組化檢測(cè)結(jié)果A、B、C組在肺泡上皮細(xì)胞、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞胞核及氣管粘膜上皮細(xì)胞均有廣泛的棕黃色顆粒，PBEF高表達(dá)。C組PBEF的表達(dá)明顯高于A(yíng)、B組和對(duì)照組，表達(dá)差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P<0.05）；C組的PBEF表達(dá)與對(duì)照組的差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。見(jiàn)表2。