杜仲70%乙醇提取物對(duì)鎘致小鼠腎臟損傷的保護(hù)作用研究

林 霖，邱 妍，汪紀(jì)倉，楊國棟，楊自軍，董發(fā)明

（河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南洛陽 471003）

杜仲樹為我國特有樹種，杜仲皮是一種名貴中草藥，具有補(bǔ)肝腎、益氣、安胎等作用。成分分析表明，杜仲皮、葉內(nèi)含有多糖、黃酮、木脂素等豐富的化學(xué)物質(zhì)，具有抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、中樞鎮(zhèn)靜、利尿等作用（杜紅巖，2003）。飼料中添加杜仲可促進(jìn)動(dòng)物生長，增強(qiáng)機(jī)體免疫，改善肉品質(zhì)（朱丹等，2013）。近年來，研究發(fā)現(xiàn)多種中草藥成分能拮抗重金屬對(duì)動(dòng)物機(jī)體的有害作用 （費(fèi)東亮等，2012；朱萍萍等，2007）。而有關(guān)杜仲對(duì)重金屬致機(jī)體組織、器官的損傷有無保護(hù)作用尚未見報(bào)道，本試驗(yàn)研究了杜仲70%乙醇提取物對(duì)鎘致小鼠腎臟損傷及脂質(zhì)過氧化的影響，為開發(fā)拮抗鎘毒性中草藥添加劑提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 杜仲70%乙醇提取物：杜仲皮（購于洛陽同仁堂大藥房），粉碎后經(jīng)10倍量70%乙醇提取2次，過濾，浸出液進(jìn)行低壓蒸餾、濃縮，浸膏提取率8.8%，用蒸餾水稀釋為所需濃度；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）試劑盒均購于南京建成生物工程有限公司。

1.1.2 主要儀器 切片機(jī)、精密電子天平、微量加樣槍、臺(tái)式高速離心機(jī)、分光光度計(jì)、水浴鍋。

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康昆明小鼠40只，雌雄各半，體重16～20 g，購于鄭州大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心。小鼠常規(guī)飼養(yǎng)，自由取食、飲水，試驗(yàn)期為8 d。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組與處理 小鼠經(jīng)1周觀察，無異常，隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為對(duì)照組、模型組、低劑量杜仲干預(yù)組和高劑量杜仲干預(yù)組。其中低、高劑量杜仲干預(yù)組分別灌胃低、高（0.17、0.68 g/kg體重杜仲浸膏）兩個(gè)劑量的杜仲提取物，對(duì)照組和模型組灌胃等體積的蒸餾水，每天1次，連續(xù)灌胃7 d，并于第 5、6天灌胃后1 h，給模型組和杜仲干預(yù)組小鼠腹腔注射氯化鎘溶液，注射劑量為4 mg/kg體重，對(duì)照組腹腔注射等體積生理鹽水，于末次染鎘24 h摘眼球放血處死小鼠。剖開腹腔，取出兩側(cè)腎臟，剝離脂肪及被膜，用冷生理鹽水沖洗干凈，一側(cè)腎臟置入10%中性甲醛中固定，用于組織切片制作；切取另一側(cè)部分腎臟，精確稱量，用眼科剪剪碎，置于冰浴的玻璃勻漿器中勻漿，用于SOD、GSH-Px、MDA及組織蛋白含量的測(cè)定。

1.2.2 腎臟組織病理學(xué)檢測(cè) 常規(guī)制備小鼠腎臟石蠟組織切片，H.E.染色，光鏡觀察腎臟組織結(jié)構(gòu)。

1.2.3 腎臟抗氧化指標(biāo)檢測(cè) 腎皮質(zhì)勻漿，蛋白含量的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法；SOD活性測(cè)定采用黃嘌呤氧化酶法；GSH-Px活性測(cè)定采用改良DTNB直接法、MDA含量采用硫代巴比妥法，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)處理 各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用 “平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，利用SPSS17.O統(tǒng)計(jì)軟件中的方差分析法比較組間差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組小鼠腎臟組織病理學(xué)觀察結(jié)果 對(duì)照組小鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小球及腎小管結(jié)構(gòu)正常；模型組腎臟充血，部分腎小球萎縮，近曲小管濁腫、管腔狹窄，空泡變性，可見腎小管上皮細(xì)胞刷狀緣脫落，部分腎小管上皮細(xì)胞胞核濃縮、核膜崩解，腎小管管形崩解、局部發(fā)生凝固性壞死；杜仲低劑量干預(yù)組腎小球輕度萎縮，毛細(xì)血管輕度擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞排列紊亂，但與模型組比較明顯減輕；杜仲高劑量干預(yù)組部分腎小管上皮細(xì)胞輕度排列紊亂，輕度變性，少數(shù)腎小球萎縮，間質(zhì)充血不明顯。

2.2 杜仲提取物對(duì)小鼠腎臟組織抗氧化酶活性及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的影響 從表1可以看出，模型組腎臟組織SOD和GSH-Px活性分別較對(duì)照組降低27.27%和42.13%（P＜0.05），MDA含量升高42.07%（P＜0.05）；與模型組比較，低劑量杜仲干預(yù)組小鼠腎臟組織SOD活性有所提高，但差異不顯著（P ＞ 0.05），GSH-Px活性提高 13.03%（P ＜0.05）；高劑量杜仲干預(yù)組腎臟組織SOD和GSHPx活性分別提高 19.28%和 39.06%（P＜0.05），MDA含量降低18.47%（P＜0.05）。

表1 各組小鼠腎皮質(zhì)脂質(zhì)過氧化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

3 討論

鎘（Cd）是一種主要環(huán)境污染物，我國鎘污染比較嚴(yán)重，鎘在動(dòng)物及人體內(nèi)代謝緩慢，對(duì)人和動(dòng)物機(jī)體的損傷廣泛，并且存在多種損傷機(jī)制，其中氧化應(yīng)激損傷起著主要的作用（陳大偉等，2008）。腎臟是鎘毒性作用的主要靶器官，鎘急、慢性染毒都可對(duì)動(dòng)物腎臟造成不同程度的損傷。本試驗(yàn)連續(xù)2 d給小鼠腹腔注射4 mg/kg體重氯化鎘溶液，小鼠腎臟組織MDA含量顯著升高，表明腎臟受到嚴(yán)重的脂質(zhì)過氧化損傷，腎臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯的病理學(xué)改變，表明鎘對(duì)小鼠腎臟具有較強(qiáng)的毒性。李清釗等（2002）研究發(fā)現(xiàn)，茶多酚可減輕鎘對(duì)腎臟的脂質(zhì)過氧化損傷。朱萍萍等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，冬蟲夏草提取物對(duì)鎘致腎臟的毒性作用具有一定的保護(hù)。高銀輝等（2011）和周程艷等（2009）通過杜仲提取物對(duì)四氯化碳及免疫肝損傷的影響研究發(fā)現(xiàn)，杜仲提取物能提高四氯化碳及肝組織SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量，拮抗肝損傷作用。本研究結(jié)果顯示，杜仲干預(yù)組小鼠腎臟SOD和GSH-Px活性提高，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA明顯減少，組織細(xì)胞損傷明顯減輕，并且存在劑量－效應(yīng)關(guān)系，表明杜仲提取物中的一些活性成分能對(duì)抗鎘致小鼠腎臟的損傷，其機(jī)制與杜仲提取物的抗氧化活性有關(guān)；另外，杜仲中的珊瑚甙還能夠刺激副交感神經(jīng)中樞，加快尿酸轉(zhuǎn)移和排出，具有明顯的利尿作用，對(duì)促進(jìn)鎘排出腎臟，減少鎘在腎臟中的蓄積可能具有一定作用 （羅麗芳等，2006）。程虹和宋恩峰（2009）研究發(fā)現(xiàn)，杜仲還可調(diào)控轉(zhuǎn)換生長因子，抑制腎纖維化TGF-β1/Smad蛋白基因表達(dá)，減輕腎臟間質(zhì)纖維化形成。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，杜仲提取物對(duì)鎘致小鼠腎臟損傷具有一定保護(hù)作用，可以作為防治重金屬鎘毒性損傷的畜禽中草藥添加劑進(jìn)行開發(fā)利用。但其保護(hù)作用可能存在多種機(jī)制，有待于進(jìn)一步研究。

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