甲基紅褪色光度法測(cè)定琥乙紅霉素

王曉玲，張 萍，陳 燕

(咸陽(yáng)師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西咸陽(yáng) 712000)

琥乙紅霉素商品名利君沙，屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，水溶性小，無(wú)味，在胃酸中穩(wěn)定，在體內(nèi)水解釋放出紅霉素(EES)而起抗菌的作用，臨床廣泛應(yīng)用于扁桃體炎、上呼吸道感染、支原體肺炎、咽喉部炎癥、中外耳炎、猩紅熱、皮膚軟組織感染的治療。目前報(bào)道的分析方法有荷移光度法［1-2］、HPLC［3-4］、分光光度法［5-6］、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法［7］、毛細(xì)管電泳法［8］等，褪色光度分析法還未見(jiàn)報(bào)道。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在常溫下，在水-乙醇介質(zhì)中，琥乙紅霉素能使甲基紅顯著褪色，據(jù)此建立了快速、靈敏、簡(jiǎn)便的測(cè)定藥物中琥乙紅霉素的分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

珀乙紅霉素，對(duì)照品;甲基紅、無(wú)水乙醇均為分析純。

722型分光光度計(jì)。

1.2 溶劑配制

1.2.1 2 mg/mL琥乙紅霉素標(biāo)準(zhǔn)液 在分析天平上準(zhǔn)確稱取化學(xué)對(duì)照品琥乙紅霉素0.200 4 g，用無(wú)水乙醇溶解并定容到100 mL容量瓶?jī)?nèi)。

1.2.2 2.0 ×10－3mol/L 甲基紅溶液 準(zhǔn)確稱取甲基紅0.053 86 g于燒杯中，用無(wú)水乙醇使之完全溶解并用無(wú)水乙醇定容至100 mL。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

取2支刻度一致的25 mL具塞比色管，分別加入甲基紅溶液0.4 mL，無(wú)水乙醇0.5 mL，向其中一支加入一定量的琥乙紅霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，另一支不加，用蒸餾水稀釋至10 mL，搖勻。以水為參比，用1 cm比色皿在分光光度計(jì)上，于520 nm處，測(cè)定吸光度值A(chǔ)。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

測(cè)定不同波長(zhǎng)下的吸光度A0和A，繪制吸收光譜圖，見(jiàn)圖1。

圖1 吸收光譜圖Fig.1 Absorption spectra

由圖1可知，試劑空白曲線和褪色體系曲線的最大吸收波長(zhǎng)均為520 nm，褪色體系曲線表明，琥乙紅霉素的加入能使甲基紅顯著褪色。

2.2 試劑用量的選擇

2.2.1 最佳介質(zhì)條件 按實(shí)驗(yàn)方法，試驗(yàn)了 HCl、H2SO4、H3PO4、氨基乙酸-濃 HCl、KCl-HCl、鄰苯-HCl、KH2PO4-NaOH(pH=7.2)、硼砂-NaOH(pH=9.94)、無(wú)水乙醇等不同介質(zhì)溶液對(duì)反應(yīng)體系的影響。結(jié)果表明在無(wú)水乙醇介質(zhì)中褪色效果最好、最穩(wěn)定。

2.2.2 無(wú)水乙醇的用量 隨著無(wú)水乙醇的用量的改變，見(jiàn)圖2，當(dāng)無(wú)水乙醇用量在0.5 mL時(shí)，ΔA最大。故實(shí)驗(yàn)選用無(wú)水乙醇的用量為0.5 mL。

圖2 無(wú)水乙醇的用量Fig.2 The amount of anhydrous ethanol

2.2.3 甲基紅的用量 改變甲基紅的用量，見(jiàn)圖3。隨著甲基紅用量的增加，ΔA逐漸增大，當(dāng)甲基紅用量在0.4 mL時(shí)，ΔA值達(dá)到最大，此后，隨著甲基紅用量的增加，ΔA迅速降低，實(shí)驗(yàn)選擇甲基紅的最佳用量為0.4 mL。

圖3 甲基紅的用量Fig.3 The amount of methyl red

2.2.4 反應(yīng)時(shí)間、溫度和穩(wěn)定性 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，褪色反應(yīng)瞬間完成，分別試驗(yàn)了不同溫度下ΔA值的變化，發(fā)現(xiàn)在常溫下ΔA最大且穩(wěn)定，在20 min后ΔA發(fā)生變化。

2.2.5 工作曲線 分別取不同量的琥乙紅霉素標(biāo)準(zhǔn)液，按照實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定吸光度ΔA值，繪制工作曲線，見(jiàn)圖4。其線性回歸方程為 y=4.362 7x－0.189 5，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，表觀摩爾吸光系數(shù)為1.53 ×104L/(mol·cm)，琥乙紅霉素的量在 150～600μg/10 mL范圍內(nèi)與ΔA呈良好的線性關(guān)系。

圖4 工作曲線Fig.4 Working curve

2.2.6 干擾離子的影響 按實(shí)驗(yàn)方法對(duì)0.2 mg/mL鹽酸氯丙嗪進(jìn)行測(cè)定，當(dāng)相對(duì)誤差控制±5%時(shí)，考察了常見(jiàn)離子和藥物賦形劑的干擾情況。結(jié)果表明，常見(jiàn)的物質(zhì):葡萄糖、乳糖、果糖、糊精和淀粉均不干擾測(cè)定。

2.3 樣品分析

2.3.1 樣品1 取琥乙紅霉素片(125 mg/片)一片于50 mL的小燒杯中，用無(wú)水乙醇溶解，過(guò)濾，用無(wú)水乙醇定容至50 mL容量瓶中。每次取0.1 mL樣品進(jìn)行測(cè)定。

2.3.2 樣品2 取琥乙紅霉素膠囊(250 mg/粒)1粒，傾出內(nèi)容物，加適量乙醇，使其溶解完全，過(guò)濾，濾液用乙醇定容至100 mL容量瓶中。每次取0.1 mL琥乙紅霉素樣品液進(jìn)行測(cè)定。

表1 樣品中琥乙紅霉素的測(cè)定結(jié)果Table1 Analytical results enoxacin in samples

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)研究了在無(wú)水乙醇介質(zhì)中，琥乙紅霉素能使甲基紅顯著褪色，且褪色的程度和琥乙紅霉素的量呈正比例關(guān)系，據(jù)此建立了琥乙紅霉素光度分析法。實(shí)驗(yàn)最大吸收波長(zhǎng)為520 nm，表觀摩爾吸光系數(shù)為1.53 ×104L/(mol·cm)，琥乙紅霉素的量在150～600μg/10 mL范圍內(nèi)服從朗伯-比爾定律，和同類方法相比較，該方法簡(jiǎn)便、快速、可靠、選擇性高、重現(xiàn)性好，用于測(cè)定藥物中琥乙紅霉素的含量，結(jié)果滿意。

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