山茱萸果核果肉化學(xué)成分差異初探

董海鵬 李 軍 姜 華 陳麗娜 路西明

1.國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專(zhuān)利局，北京 100088;2.河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471023;3.河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471003

《中華人民共和國(guó)藥典》[1]2010年版規(guī)定山茱萸為山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉”。但山茱萸市場(chǎng)需求量大，供需矛盾尖銳，加工去核的勞動(dòng)量大，加之部分的學(xué)者認(rèn)為山茱萸可以與核同用[2]，造成市售山茱萸摻有15～85%的果核。究竟摻核山茱萸能否在臨床使用，是否造成不良反應(yīng)，臨床病例報(bào)道不一，爭(zhēng)論頗大[3]。為了進(jìn)一步指導(dǎo)山茱萸的合理使用，本文采用HPLC-PDA技術(shù)對(duì)山茱萸果核果肉的中所含化學(xué)成分的異同進(jìn)行初步研究?，F(xiàn)報(bào)道如下:

1 儀器與試藥

Waters 600高效液相色譜儀，PDA檢測(cè)器，Empower色譜工作站，KQ-50DB超聲波清洗器 (昆山超聲波儀器有限公司)，METTLER-AE 240型電子分析天平 (瑞士梅特勒公司)。山茱萸果核果肉采自河南省洛陽(yáng)市嵩縣羅莊村、河南省洛陽(yáng)市欒川縣十里坪和河南省南陽(yáng)市西峽，經(jīng)河南科技大學(xué)路西明教授鑒定為山茱萸科植物山茱萸的果核及其果肉。甲醇 (色譜純)，屈臣氏蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

2.1.1 山茱萸果肉 取干燥的山茱萸果肉5g，精密稱(chēng)定，用50%乙醇回流提取3次，每次1h，溶劑用量50mL，趁熱過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮，將其定量轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶，并用50%乙醇定容置至刻度，搖勻，待用。取上述溶液1.0mL，稀釋至50mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.1.2 山茱萸果核 取適當(dāng)粉碎的山茱萸果核5g，其余操作同“2.1.1”項(xiàng)下山茱萸果肉樣品的制備方法。

2.2 色譜條件 YWG C18色譜柱 (250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 (A)-0.1%磷酸水溶液 (B)，梯度洗脫[0～60 min，A-B(15:85)→ (50:50)];流速:1.0 mL·min-1;柱溫:30℃;檢測(cè)波長(zhǎng):270nm;進(jìn)樣量:20μL。

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取洛陽(yáng)嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項(xiàng)下方法制備各供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，記錄指紋圖譜。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積比值無(wú)明顯變化，RSD 分別為 1.10～2.07%、1.05～1.89%。說(shuō)明供試品溶液在10小時(shí)之內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取洛陽(yáng)嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項(xiàng)下方法制備各供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄指紋圖譜。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積比值無(wú)明顯變化，RSD分別為0.50～1.21%、0.22～0.87%。說(shuō)明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取洛陽(yáng)嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項(xiàng)下方法制備各供試品溶液6份，記錄色譜圖。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積比值的 RSD為1.55～2.14%、1.30～1.98%。說(shuō)明重復(fù)性良好。

2.6 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地的山茱萸果核果肉 (河南省洛陽(yáng)市嵩縣羅莊村、河南省洛陽(yáng)市欒川縣十里坪和河南省南陽(yáng)市西峽)，參照“2.1”項(xiàng)下方法制備山茱萸果核果肉供試品溶液，并按照“2.2”項(xiàng)下色譜方法記錄指紋圖譜。樣品典型的HPLC指紋圖譜見(jiàn)圖1。

2.7 果核、果肉成分比較 對(duì)比不同產(chǎn)地的山茱萸果核果肉HPLC指紋圖譜，并結(jié)合相應(yīng)色譜峰的紫外光譜，發(fā)現(xiàn)果核果肉中的成分存在較大的差異，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 山茱萸果核果肉成分比較

3 討論

3.1 通過(guò)比較山茱萸果核果肉在225、270、300、330nm波長(zhǎng)下各樣品的HPLC指紋圖譜，結(jié)果顯示270nm波長(zhǎng)下各供試品圖譜中色譜峰的數(shù)目較多，基線(xiàn)漂移較小，故確定色譜條件的檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。

3.2 建立HPLC指紋圖譜時(shí)考察的洗脫條件有:A[0～30 min，甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (50∶50)→ (100∶0)]、B[0～30～50 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 (10∶90)→ (50∶50)→ (100∶0)]、C [0～50～55 min，甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (15∶85)→ (60∶40)→ (100∶0)]、D [0～60 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 (15:85)→ (50:50)]。通過(guò)比較上述條件下各樣品的HPLC圖譜，發(fā)現(xiàn)在洗脫條件D下，樣品中各色譜峰的分離度較好。

3.3 根據(jù)各色譜峰的PDA光譜可知:果核特有的成分可分為兩類(lèi)，即保留時(shí)間在20.202、22.385min的成分，其最大吸收波長(zhǎng)在 220、260nm，和保留時(shí)間在4.950、6.210、8.190、 11.262、 12.000、 13.911、 16.842、 19.002、20.202、 22.385、 23.215、 24.285、 29.001、 30.192、30.999、33.211、45.322、46.680min 的成分，其最大吸收波長(zhǎng)在220、275nm，其典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的A和B。果肉中特有的成分可分為兩類(lèi)，即保留時(shí)間在24.258、30.999min的成分，其最大吸收波長(zhǎng)在240nm，和保留時(shí)間在3.988、20.000、53.951min的成分，其典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的C和B。果核果肉共有的成分的典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的B。據(jù)文獻(xiàn)[4、5]推測(cè)紫外光譜A、B代表沒(méi)食子酸類(lèi)相關(guān)化合物，C代表馬錢(qián)苷、莫諾苷等環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物。

3.4 研究結(jié)果表明山茱萸果核果肉中的成分存在較大的差異，果核中所含的成分遠(yuǎn)多于果肉中的成分，且其中的成分以沒(méi)食子酸類(lèi)相關(guān)化合物為主?；诖耍疚恼J(rèn)為山茱萸一定要去核使用。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 (一部) [M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]彭勃，季玉榮.山茱萸果核與果肉化學(xué)成份的對(duì)比分[J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊，1999，14(2):13-14.

[3]張振凌，趙建穎，李娟山，等.茱萸去核的作用和方法研究[J].中藥材，2006，29(1):60-63.

[4]李小娜，霍長(zhǎng)虹，殷瑋，等.山茱萸中馬錢(qián)苷和莫諾苷對(duì)照品的制備[J].中草藥，2006，37(8):1168-1170.

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