杜仲藥材薄層色譜鑒別研究

劉 玲 鮑家科

1.貴陽醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550004;2.貴州省藥品審評(píng)認(rèn)證中心，貴州 貴陽 550004

杜仲藥材是被子植物門杜仲科杜仲屬植物的樹皮[1]，在中國藥典2010年版中，杜仲藥材的定性鑒別仍為外觀性狀及顯微鑒別，這種鑒別方法對(duì)于完整的杜仲藥材來說是可行的，但對(duì)于粉末狀藥材或藥材提取物等來說就不適應(yīng)。根據(jù)有關(guān)報(bào)道，杜仲的降壓成分主要是松脂醇二葡萄糖苷，屬于木質(zhì)素類化合物，其降壓作用明顯且未見不良反應(yīng)，且對(duì)動(dòng)物血壓有雙向調(diào)節(jié)功能，也是現(xiàn)行藥典定量成分。另外，杜仲藥材所含的京尼平苷酸具有一定的防癌、抗癌、抗腫瘤、抗輻射損害、抗氧化、抗衰老及調(diào)節(jié)血壓等作用。本文以杜仲藥材對(duì)照品、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸為對(duì)照，建立了杜仲藥材的薄層鑒別方法，具有斑點(diǎn)清晰，分離度良好，操作簡便，方法重復(fù)性好的特點(diǎn)。

1 儀器和試藥

硅膠G高效預(yù)制板，索氏提取器，水浴鍋 (DK-98-11A，天津市泰斯特儀器有限公司)。松脂醇二葡萄糖苷(批號(hào) 111537-200501)、京尼平甘酸 (批號(hào) 111828-201102)、杜仲 (批號(hào)121202-0301)均購自貴州省食品藥品監(jiān)督管理局，藥材樣品經(jīng)貴州省食品藥品檢驗(yàn)所中藥檢測室鑒定為杜仲藥材。所用試劑均為分析純。

2 方法研究與結(jié)果

2.1 溶液制備方法

2.1.1 供試品溶液 采用《中國藥典》2010年版中對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量測定的提取方法。取杜仲藥材2g，精密稱定，置索氏提取器中，加入三氯甲烷適量，加熱回流6h，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，再置索氏提取器中，加入甲醇適量，加熱回流6h，提取液過濾回收甲醇至適量，轉(zhuǎn)移至10ml兩瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 對(duì)照藥材溶液 取杜仲對(duì)照藥材2g，精密稱定，置索氏提取器中，按照供試品溶液的方法制備即得。

2.1.3 對(duì)照品溶液 松脂醇二葡萄糖苷溶液的制備:取松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。京尼平苷酸溶液的制備:取京尼平苷酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。

2.2 薄層條件的優(yōu)化

2.2.1 展開劑及展開條件的考察和比較 通過系列預(yù)試驗(yàn)，確定基本具體操作方法:分別吸取對(duì)照品溶液，對(duì)照藥材溶液和供試品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，將展開劑倒于展缸中預(yù)飽和30min，薄層板預(yù)飽和20min展開后，上行展開，展距8cm.。取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色。

考察石油醚-乙醚 (7:3);石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸 (4:3:3:1);石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸 (5:4:0.5:0.5)三種展開劑，試驗(yàn)結(jié)果表明，只有石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸 (5:4:0.5:0.5)可以將杜仲分離，但是分離效果亦不理想。經(jīng)進(jìn)一步對(duì)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液展開系統(tǒng)的有關(guān)比例進(jìn)行調(diào)整，分別考察三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液(3:5:1:0.5);三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液 (1:7:1:1);三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液 (1:8:1:1)。結(jié)果這三種展開劑都可以再薄層板上將杜仲藥材成分進(jìn)行分離，但是經(jīng)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液 (3:5:1:0.5)展開的松脂醇二葡萄糖苷的Rf值太低，經(jīng)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液 (1:8:1:1)展開的中松脂醇二葡萄糖苷的Rf值太高，只有三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液 (1:7:1:1)中的松脂醇二葡萄糖苷的Rf值較為恰當(dāng)，見表1。

表1 展開劑考察結(jié)果

2.2.2 點(diǎn)樣方式和點(diǎn)樣量的比較 考察點(diǎn)狀點(diǎn)和條帶狀點(diǎn)兩種方式，結(jié)果顯示，點(diǎn)條帶狀點(diǎn)比較容易出現(xiàn)拖尾且斑點(diǎn)分離不明顯，點(diǎn)狀點(diǎn)斑點(diǎn)比較清晰。在點(diǎn)樣量為3μl時(shí)，京尼平甘酸溶液和供試品溶液斑點(diǎn)均清晰，并且供試品斑點(diǎn)分離較好，但是對(duì)照藥材和松脂醇二葡萄糖苷溶液斑點(diǎn)過淺，在紫外燈下幾乎觀察不到，故把對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量增加到4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量增加到6μl，結(jié)果分離效果明顯，斑點(diǎn)清晰。故確定京尼平甘酸溶液和供試品溶液點(diǎn)樣量為3μl，對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量為6μl。

2.2.3 檢視條件的選擇 在日光條件下檢視供試品溶液的展開斑點(diǎn)，在與京尼平甘酸對(duì)照品對(duì)應(yīng)的位置上可顯相同顏色的斑點(diǎn)，但是與松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品對(duì)應(yīng)位置上的斑點(diǎn)太淺，不易辨認(rèn)。在紫外條件下，供試品溶液與京尼平甘酸和松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品對(duì)應(yīng)的位置上均可顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)清晰，容易辨認(rèn)。綜合考慮，選擇紫外光源作為檢視條件。

2.2.4 層析條件的驗(yàn)證 薄層板:硅膠G高效預(yù)制板;點(diǎn)樣:點(diǎn)狀點(diǎn)樣，京尼平甘酸溶液和供試品溶液點(diǎn)樣量為3μl，對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量為6μl;展開劑:三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液 (1:7:1:1)為展開劑。展缸預(yù)飽和30min，上行展開8cm，顯色:噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，在100℃加熱顯色至斑點(diǎn)清晰。檢視光源:紫外光。結(jié)果如圖1、2。

3 討論

杜仲的薄層鑒別報(bào)道中[4-6]，一般只采用松脂醇二葡萄糖苷作為對(duì)照，本研究設(shè)立了對(duì)照品藥材、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸三個(gè)對(duì)照，從而可提高杜仲藥材定性鑒別的專屬性和可控性。同時(shí)，以本研究確定的展開系統(tǒng)鑒別杜仲藥材，經(jīng)多批次樣品試驗(yàn)表明方法的重現(xiàn)性良好。對(duì)于樣品溶液的制備，曾探討過多種方法，但都不能有效的去除杜仲膠等雜質(zhì)，最終選擇2010年版《中國藥典》中對(duì)于松脂醇二葡萄糖苷的提取方法。從薄層板的結(jié)果可知，供試品分離效果良好，在實(shí)際檢測中，杜仲藥材薄層鑒別的供試品溶液可直接利用其含量測定的提取溶液進(jìn)行試驗(yàn)。

[1]葉文峰.杜仲葉中化學(xué)成分、藥理活性及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].林產(chǎn)化工通訊，2004，38(5):40-43.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典 (一部) [M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3]胡文彬.杜仲中和松酯醇二葡萄糖苷的分離及多種成分同時(shí)檢測方法[D].長沙:中南林業(yè)科技大學(xué)，2012.

[4]譚莉莉，萬小強(qiáng)，王剛.貴州產(chǎn)杜仲乙醇提取物UV、TLC及HPLC指紋圖譜的比較研究[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，26(2):112-113.

[5]鄭雪，劉澤緯，丁來欣，等.杜仲葉中松脂醇二葡萄糖苷的提取分離及含量測定[J].食品科學(xué)，2012，33(6):166-170.

[6]戚向陽，陳維軍，張聲華.杜仲中雙環(huán)氧木脂素二糖苷分離純化技術(shù)的研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2005，25(4):47-50.