抵抗素rs1862513與廣東地區(qū)2型糖尿病的相關(guān)性研究＊

徐 英，王李莉，周 強(qiáng)，鄧 聰，陳 波，黃海櫻，林 楨，楊 靜，夏少梅（.西藏林芝地區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 860000；.南方醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系008級(jí)，廣州 5060；.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣州 5060）

2型糖尿病是現(xiàn)階段最主要和增長(zhǎng)最快的糖尿病類型，占整個(gè)糖尿病人群的90%以上［1］。其發(fā)病率逐年上升，WHO預(yù)測(cè)糖尿病的發(fā)病率將從1995年的4.0%發(fā)展至2025年的5.4%［2］。2型糖尿病是由于遺傳和環(huán)境因素共同導(dǎo)致的胰島素相對(duì)或絕對(duì)缺乏及不同程度的胰島素抵抗（insulin resistance，IR），使體內(nèi)碳水化合物、脂肪及蛋白質(zhì)代謝發(fā)生紊亂［3－4］。研究表明，抵抗素（rs）的多個(gè)單核苷酸位點(diǎn)存在多態(tài)性（SNP），且在不同國(guó)家、不同種族中有很大差異。單核苷酸多態(tài)性包括單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換、插入、缺失等［5－6］。血清rs1862513位點(diǎn)在國(guó)外人群中有一定的多態(tài)性?，F(xiàn)將廣東地區(qū)人群該基因位點(diǎn)多態(tài)性的相關(guān)研究報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年10月至2011年10月廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院收治的新診斷為2型糖尿病的患者182例為治療組，其中男95例，女87例，平均年齡（64±12）歲。排除1型糖尿病，繼發(fā)性2型糖尿病患者，嚴(yán)重肝腎功能不全及其他內(nèi)分泌代謝疾病患者。收集同期健康體檢者191例為健康對(duì)照組，其中男70例，女121例，平均年齡（62±11）歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 實(shí)驗(yàn)用儀器有日立7600全自動(dòng)生化分析儀；羅氏E411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；STAR全自動(dòng)樣本工作站；FAME全自動(dòng)酶免分析儀；MassARRAY實(shí)驗(yàn)平臺(tái)；MassARRAY 384孔雙頭聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增儀；MassARRAY質(zhì)譜檢測(cè)儀；MassARRAY點(diǎn)樣儀。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 實(shí)驗(yàn)試劑為葡萄糖氧化酶試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）；胰島素診斷試劑盒［羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司］；抵抗素檢測(cè)試劑盒（美國(guó)RapidBio Lab公司）；iPLEX反應(yīng)試劑（美國(guó)Sequenom公司）；SpectroCHIP生物芯片（美國(guó)Sequenom公司）；HOTSTART taq酶（美國(guó)Se－quenom公司）；SAP酶（美國(guó)Sequenom公司）；純化瓊脂（美國(guó)Sequenom公司）。

1.4 方法

1.4.1 抵抗素SNP基因位點(diǎn)的選擇 根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)提供的數(shù)據(jù)檢索，綜合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道及資料，得出rs1862513位點(diǎn)在國(guó)外2型糖尿病患者中有一定的多態(tài)性。

1.4.2 標(biāo)本采集與處理 所有受試者均隔夜空腹8h以上，清晨抽取靜脈血兩管共6mL。一支干燥管（3mL），3 000r／min，14.2cm，離心15min，進(jìn)行血清分離，該血清用于空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FIN）水平的檢測(cè)，并移取200 μL血清置－20℃低溫保存，以用于抵抗素的批量檢測(cè)。另一支為乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝血（3mL），充分搖勻以徹底抗凝，－20℃存放，以用作rs1862513單核苷酸多態(tài)性分析之用。

1.4.3 指標(biāo)測(cè)定 FBG測(cè)定采用葡萄糖氧化酶法，F(xiàn)IN測(cè)定采用化學(xué)發(fā)光法。根據(jù)國(guó)際通用的穩(wěn)態(tài)模式評(píng)估法，計(jì)算IRI，IRI＝FBG×FIN／22.5［7］。血清抵抗素測(cè)定采用雙抗夾心ELISA兩步法測(cè)定。rs1862513位點(diǎn)基因型的檢測(cè)由深圳華大基因研究院完成。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。對(duì)抵抗素以及胰島素抵抗指數(shù)進(jìn)行單樣本Kolmogorov－Smirnov檢驗(yàn)正態(tài)性分析，以抵抗素為自變量，IRI為因變量進(jìn)行相關(guān)性回歸分析?；蛐腿后w符合程度用Hardy－Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料基因型頻率在2型糖尿病組與健康對(duì)照組間的差異比較采用行×列表資料的雙側(cè)χ2檢驗(yàn)?；蛐团c疾病相關(guān)性分析通過(guò)logistic回歸分析，以比值比（OR）和95%置信區(qū)間（CI）表示相對(duì)危險(xiǎn)度。所有統(tǒng)計(jì)資料均以雙側(cè)概率檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 抵抗素與胰島素抵抗指數(shù) 單樣本Kolmogorov－Smirnov檢驗(yàn)分別檢測(cè)抵抗素水平與胰島素抵抗指數(shù)的正態(tài)性分布。采用Pearson相關(guān)性分析，r＝0.709，P＜0.05。抵抗素水平與胰島素抵抗指數(shù)在P＝0.05（雙側(cè)）上顯著相關(guān)。

2.2 rs1862513位點(diǎn)基因型頻率 rs1862513位點(diǎn)基因型頻率已達(dá)到遺傳平衡，具有群體代表性。其中χ2＝4.645，P＝0.098，rs1862513位點(diǎn)C／G基因型的分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組rs1862513（C／G）基因型頻率比較

表2 rs1862513（C／G）基因型與2型糖尿病的危險(xiǎn)度分析

2.3 logistic回歸分析 GG純合子患病率是CC純合子患病率的1.375倍，OR＝1.375，95%CI：0.575～3.285，基因型間危險(xiǎn)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.473）。見(jiàn)表2。

3 討 論

糖尿病是世界上普遍危害人類健康的慢性疾病之一。作為糖尿病的主要類型，2型糖尿病是一種具明顯異質(zhì)性的多因素、多基因遺傳病，其遺傳方式和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，許多微小基因的變異都會(huì)增加其發(fā)病率［8］。近年來(lái)的研究認(rèn)為，抵抗素是2型糖尿病的重要信號(hào)分子［9－10］。抵抗素為2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制和治療提供了一個(gè)新的方向［11］。本研究發(fā)現(xiàn)，抵抗素與胰島素抵抗指數(shù)呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，與文獻(xiàn)研究結(jié)果一致［12－17］。

有研究表明，人抵抗素基因編碼區(qū)由326個(gè)堿基組成，編碼108個(gè)氨基酸殘基組成的抵抗素蛋白。羧基端有一獨(dú)特的富含半胱氨酸的高度重復(fù)序列CX（12）CX（8）CXCX（3）CX（10）CXCXCX（9）CC，占12%［10］。 據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)顯示，rs1862513位點(diǎn)基因型存在C→G的突變，由此推測(cè)其可能影響抵抗素的表達(dá)水平以及生物活性，進(jìn)而影響到抵抗素相關(guān)疾病（如糖尿?。┑陌l(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。

對(duì)于抵抗素基因多態(tài)性在2型糖尿病研究中的重要性各界未達(dá)成一致的共識(shí)。本研究中，通過(guò)對(duì)2型糖尿病抵抗素基因1862513位點(diǎn)的檢測(cè)，證實(shí)該位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性存在C→G的突變而呈現(xiàn)3種基因型：CC型、CG型和GG型；研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)基因型頻率在廣東地區(qū)2型糖尿病組和健康對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明了該位點(diǎn)抵抗素基因多態(tài)性與廣東地區(qū)2型糖尿病間無(wú)相關(guān)性。周強(qiáng)等［18］研究發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素＋45位點(diǎn)多態(tài)性與2型糖尿病關(guān)系密切，該基因變異可能在2型糖尿病的發(fā)病過(guò)程中起了重要作用。董艷等［19］研究顯示7個(gè)抵抗素基因的單核苷酸多態(tài)性基因頻率在華東地區(qū)2型糖尿病和健康對(duì)照組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Sentinclli等［20］研究發(fā)現(xiàn)，意大利人＋1326G／C位存在1個(gè)單核苷酸多態(tài)性，而且該單核苷酸多態(tài)性的等位基因頻率在意大利人2型糖尿病中和肥胖間差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究在危險(xiǎn)度分析的研究結(jié)果中顯示，rs1862513位點(diǎn)的各種基因型結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可能與2型糖尿病的發(fā)生無(wú)關(guān)。在廣東地區(qū)2型糖尿病患者中，rs1862513位點(diǎn)的各基因型之間發(fā)生2型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)差異，rs1862513可能不是2型糖尿病的易感基因。

目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者普遍認(rèn)為2型糖尿病為一類多種不同病因所致的代謝綜合征，人們對(duì)該疾病的發(fā)病機(jī)制及影響因素的認(rèn)識(shí)仍較膚淺，抵抗素基因多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)系亦僅是初步研究。此次研究證實(shí)其與廣東地區(qū)2型糖尿病無(wú)相關(guān)性，可能原因?yàn)榈挚顾鼗蚨鄳B(tài)性在不同國(guó)家、不同地區(qū)中與2型糖尿病的關(guān)系亦不一致，該位點(diǎn)可能不是廣東地區(qū)2型糖尿病患者的易感基因。

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