廣佛手配方顆粒的FT-IR鑒別研究

羅文匯 ，畢曉黎 ，李養(yǎng)學(xué)，彭麗詩 ，董玉娟

（1.廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，廣東 廣州 510095；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510405）

廣佛手配方顆粒的FT-IR鑒別研究

羅文匯1，畢曉黎1，李養(yǎng)學(xué)1，彭麗詩2，董玉娟2

（1.廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，廣東 廣州 510095；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510405）

目的建立快速客觀地鑒別廣佛手配方顆粒的方法。方法對(duì)廣佛手配方顆粒進(jìn)行紅外光譜掃描，分析、比較所得圖譜，研究其共有的吸收峰峰位和峰強(qiáng)度。結(jié)果各批次的廣佛手配方顆粒之間差異較小，都具有相同的特征吸收峰。結(jié)論利用紅外光譜圖分析可以直觀、快速、準(zhǔn)確地鑒別廣佛手配方顆粒。

廣佛手；配方顆粒；紅外光譜；鑒別

廣佛手為蕓香科植物佛手Citrus medica L.var.sarcodactylisSwingle的干燥果實(shí)，主產(chǎn)于廣東省德慶、高要等地，市場(chǎng)上主要流通品種有廣佛手（產(chǎn)地廣東）和川佛手（產(chǎn)地四川）。廣佛手配方顆粒是以廣佛手飲片為原料，采用現(xiàn)代制藥工業(yè)的先進(jìn)工藝和方法制成的顆粒，保持了原藥材飲片的藥性、藥味和藥效。具有疏肝理氣、和胃止痛、燥濕化痰的功效，用于肝胃氣滯、胸脅脹痛、胃脘痞滿、食少嘔吐、咳嗽痰多[1]。目前在佛手的研究中常用的分析方法除了傳統(tǒng)的性狀、顯微、理化、薄層色譜鑒別[2-4]外，還有以橙皮苷作為指標(biāo)成分定量分析[5]，并利用 HPLC[6-7]、GC-MS 等[8]方法建立指紋圖譜，以及DNA測(cè)序的方法[9-10]。紅外光譜法具有譜圖特征性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、需樣品量小、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，在中藥研究領(lǐng)域中已經(jīng)獲得較為廣泛的應(yīng)用，可以作為中藥配方顆粒質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別的依據(jù)。本文采用傅立葉變換紅外光譜（FT-IR）對(duì)廣佛手配方顆粒進(jìn)行鑒別研究，為廣佛手配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定快速客觀的鑒別方法奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Nicolet 6700 FT-IR紅外光譜儀、OMNIC8.0軟件（美國Thermo Fisher公司）；YP-2壓片機(jī)（上海山岳科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥

廣佛手配方顆粒 （批號(hào)：0603124、0703043、0707041、0711097、0801016），廣佛手藥材，川佛手藥材由廣東一方制藥有限公司提供；佛手對(duì)照藥材（批號(hào)：120933-200303）購于中國藥品生物制品檢定所；光譜純KBr粉末（英國BDH公司）；水為Millipore超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 丁酮提取物的制備

取廣佛手配方顆粒1 g，加水10 mL，加熱溶解，水溶液用丁酮振搖提取2次，每次15 mL，合并丁酮液，蒸干，于105℃干燥7 h，即可。

2.2 供試品的制備

分別取廣佛手配方顆粒以及丙酮提取物、廣佛手藥材、川佛手藥材等樣品粉末約2 mg，加入約200 mg在120℃干燥4 h的KBr粉末，在研缽中研磨、混勻，轉(zhuǎn)移至YP-2壓片機(jī)模具中，30 MPa左右的壓力，經(jīng)1～2 min將樣品壓成透明的薄片[11]。壓片的厚度約1～2 mm。

2.3 光譜測(cè)定

將上述樣品置于FT-IR儀（DTGS檢測(cè)器，分辨率4 cm-1、掃描次數(shù)32次，掃描時(shí)實(shí)時(shí)扣除水和CO2的干擾）中，測(cè)定光譜范圍在4 000～400 cm-1之間的紅外光譜圖。

2.4 精密度試驗(yàn)

取同一份廣佛手配方顆粒0603124的KBr片連續(xù)測(cè)定5次。采用OMNIC 8.0軟件進(jìn)行分析，譜圖間的相關(guān)系數(shù)分別為：1.000 0、0.999 8、0.998 3、0.998 1、0.9974，RSD為0.11%，說明該儀器的精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一份廣佛手配方顆粒樣品（0603124），分別精密稱取6份樣品，平行壓片測(cè)量，采用OMNIC 8.0軟件進(jìn)行分析，譜圖間的相關(guān)系數(shù)分別為1.000 0、0.999 4、0.998 5、0.997 8、0.997 3、0.996 7，RSD 為0.13%，說明所得紅外譜圖具有良好的重復(fù)性。

2.6 數(shù)據(jù)處理

平均圖譜及二階導(dǎo)數(shù)光譜的獲得均采用美國Thermo Fisher公司OMNIC 8.0操作軟件，平滑點(diǎn)數(shù)為13。

3 結(jié)果

3.1 各批次廣佛手配方顆粒和佛手藥材紅外掃描圖譜（見圖1-14）

3.2 各批次廣佛手配方顆粒和佛手藥材IR主要吸收峰峰位（靈敏度：80）。見表1-2。

3.3 結(jié)果分析

3.3.1 一維紅外光譜分析 通過對(duì)廣佛手藥材、川佛手藥材、廣佛手配方顆粒和廣佛手配方顆粒丁酮提取物紅外光譜圖各峰峰形及強(qiáng)度進(jìn)行比較，如圖1-14，所列出的是不同批次顆粒的IR圖譜，通過這些IR圖譜，可以發(fā)現(xiàn)各批次均有一定的相似性。川佛手藥材在2 854 cm-1上有吸收，而廣佛手藥材在657 cm-1上有吸收，這是區(qū)別于兩種佛手的特征吸收峰，見表1。配方顆粒和藥材的紅外光譜圖在 3 400、2 928、1 625、1 415、1 240、773、530 cm-1附近均出現(xiàn)共同吸收峰可以做為廣佛手配方顆粒的鑒別峰；丁酮提取物紅外光譜圖在3 432、2 928、1 718、1 625、1 512、1 384、1 075、875 cm-1附近出現(xiàn)吸收峰，見表2。3 432、3 400 cm-1附近為佛手黃酮和多糖中υO(shè)-H的吸收峰；2 928 cm-1附近為亞甲基C-H反對(duì)稱伸縮振動(dòng)吸收峰；1 718、1 625 cm-1附近為羰基特征峰；1 512、1 415 cm-1附近為苯環(huán)C=C伸縮振動(dòng)吸收峰；1 384 cm-1附近為-CH3基團(tuán)面內(nèi)彎曲振動(dòng)產(chǎn)生的特征峰；1 240 cm-1附近為黃酮類成分C-O伸縮振動(dòng)吸收峰；1 075 cm-1附近為糖苷類成分的吸收峰；875、773 cm-1的吸收峰為佛手化學(xué)成分所含苯環(huán)面外彎曲振動(dòng)與環(huán)彎曲振動(dòng)引起的吸收峰。

3.3.2 二階導(dǎo)數(shù)光譜分析 圖15為廣佛手藥材、川佛手藥材和廣佛手配方顆粒的二階導(dǎo)數(shù)光譜圖（全波段）。從整體上看，廣佛手配方顆粒的二階導(dǎo)數(shù)光譜圖，其峰強(qiáng)度較小。其中3 200～2 500 cm-1波段，廣佛手藥材和廣佛手配方顆粒峰形相似，而與川佛手藥材峰形差別較大。另外，還進(jìn)一步選取了1 800～500 cm-1波段進(jìn)行了分析，如圖16所示，在1 750、1 260、1 157、1 024、985、894、818、711、578 cm-1附近，廣佛手藥材、川佛手藥材和廣佛手配方顆粒有相似的譜峰，其中1 104 cm-1，1 024 cm-1附近的譜峰，川佛手藥材的相對(duì)峰強(qiáng)度均增強(qiáng)，其余均減弱。廣佛手藥材相對(duì)于廣佛手配方顆粒，在615 cm-1附近出現(xiàn)一個(gè)譜峰。 另外在 1 193、1 101、949、894、832、657、605、581、563 cm-1附近的譜峰， 廣佛手配方顆粒的相對(duì)峰強(qiáng)度均減弱；而在1 402、695 cm-1的譜峰，其相對(duì)峰面積強(qiáng)度增加。

表1 各批次廣佛手配方顆粒和佛手藥材IR主要吸收峰峰位（cm-1）

表2各批次廣佛手配方顆粒丁酮提取物IR主要吸收峰峰位（cm-1）

圖15 藥材與配方顆粒二階導(dǎo)數(shù)光譜圖

3.3.3 匹配度分析 采用OMNIC 8.0軟件的譜庫建立與檢索對(duì)廣佛手藥材、川佛手藥材及廣佛手配方顆粒進(jìn)行匹配度分析，廣佛手配方顆粒與廣佛手藥材紅外光譜的匹配度為98%以上，而廣佛手配方顆粒與川佛手藥材紅外光譜的匹配度為85%～93%，說明紅外光譜法可用于廣佛手配方顆粒的鑒別。

圖16 藥材與配方顆粒1 800～500cm-1二階導(dǎo)數(shù)光譜圖

4 討論

紅外光譜法應(yīng)用在中藥配方顆粒方面主要根據(jù)紅外光譜的峰數(shù)、峰位、峰形和峰的強(qiáng)度，以及某一波數(shù)吸收峰的有無，指紋區(qū)的面貌等進(jìn)行判斷，總的原則是比較紅外光譜的全貌。本研究還對(duì)廣佛手配方顆粒的丁酮提取物進(jìn)行了紅外光譜研究，發(fā)現(xiàn)丁酮能有效地除去輔料的影響，可以獲得準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，在控制廣佛手配方顆粒方面有良好的效果。

紅外光譜運(yùn)用二階導(dǎo)數(shù)譜，使一些不明顯的信息突出，并可從重疊譜帶中獲得隱含信息，從而使數(shù)據(jù)分析和處理變得容易。紅外光譜分析操作簡便、快速，所需樣品量較少。通過比較一維紅外光譜中657 cm-1處的特征吸收峰，以及二階導(dǎo)數(shù)光譜1 800～500 cm-1區(qū)域的譜峰，可以準(zhǔn)確、快速地鑒別廣佛手配方顆粒，為中藥配方顆粒在不具備飲片形態(tài)情況下的真?zhèn)舞b別提供了示范性研究。

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（本文編輯 楊 瑛）

Identification of Fructus Citri Sarcodactylis Formula Granule by FT-IR

LUO Wenhui1,BI Xiaoli1,LI Yangxue1,PENG Lishi2,DONG Yujuan2
(1.Guangdong Province Engineering Technology Research Institute of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou,Gangdong 510095,China;2.Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou,Guangdong 510405,China)

ObjectiveTo establish a new identification and analysis method of Fructus Citri sarcodactylis formula granule(FCSFG).MethodsThe FCSFG was scanned by FT-IR spectra.The peak place and the strength of FCSFG were analyzed and compared.ResultsThe FT-IR spectra of the same batch FCSFG had no obvious difference,they exhibited same absorption characteristies.ConclusionsFT-IR spectra can identify Citrisarcodactylisfructusformula granule intuitively,quickly and accurately.

fructus Citri sarcodactylis formula granule;FT-IR spectra;identification

R284.1；O657.33

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.08.007.024.05

2013－10－16

廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（S2011010005926）；廣東省科學(xué)技術(shù)廳課題（2012A03010017）；廣東省教育部科技部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合項(xiàng)目（2012B091100183）。

羅文匯，男，碩士，副主任中藥師，主要從事中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究工作。