不育癥患者體內(nèi)酞酸酯類的測(cè)定及意義探討

于 揚(yáng)，耿可亭，孫 玲，屠麗回，趙明光，李 蓓，全吳敏

1.廣州市婦女兒童醫(yī)療中心(廣東廣州510623)

2.廣州市人口和計(jì)劃生育科學(xué)研究所(廣東 廣州510600)

酞酸酯類化合物(Phthalatic acid esters，PAEs)為芳香話二羧ss酸酯，廣泛應(yīng)用于食品包裝、容器、醫(yī)療用品、香味劑、化妝品等領(lǐng)域，由于并未以化學(xué)鍵與塑料結(jié)合，這些酞酸酯類增塑劑會(huì)向外滲出，成為環(huán)境污染物［1］。各種動(dòng)物試驗(yàn)表明，其生殖毒性和生育毒性對(duì)雄性生殖系統(tǒng)與生育力有一定的損害作用。而這并未引起人們足夠的重視［2］。本次研究選擇2012年10月－2013年10月來我院就診的100例男性不育患者和100例健康男性為觀察對(duì)象，測(cè)定血清和精液中酞酸二酯、酞酸二丁酯及酞酸二辛酯的含量，分析其與男性精液質(zhì)量的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年10月－2013年10月來我院就診的100例男性不育患者為觀察組，年齡22～56歲，平均年齡(39.2±4.2)歲，體質(zhì)量56～78 kg，平均體質(zhì)量(65.4±4.3)kg;同時(shí)選擇100例健康體檢為對(duì)照組，年齡23～58歲，平均年齡(38.4±3.8)歲，體質(zhì)量55～68 kg，平均體質(zhì)量(64.7±5.3)kg，兩組年齡、體質(zhì)量等一般資料比較差異無(wú)顯著性(P＜0.05)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 觀察組不育男性:婚后性生活正常，性生活中未采取任何避孕措施，結(jié)婚3年后妻子仍未懷孕;對(duì)照組已育男性:婚后2年內(nèi)妻子已經(jīng)懷孕或足月待產(chǎn)或已經(jīng)分娩。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 測(cè)定儀器 GLAMOUR1800全自動(dòng)生化儀;HP5890GC－HP5972MS氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀;高純度氦氣;721分光光度計(jì);TGL－16G高速冷凍離心機(jī);R－205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;DHG鼓風(fēng)干燥箱TJ－360超聲波發(fā)生器。分析純級(jí)別的正己烷、酞酸二酯(DEHP)、酞酸二丁酯(DBP)、DOP經(jīng)蒸餾純化;以正己烷為溶劑配制1 g/L的DEHP、DBP、DOP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。超聲波清洗后，依次用自來水、蒸餾水沖洗，再放100℃烘箱中烘干［3］。

1.3.2 樣本選取 GC－MS用樣品前處理步驟:①取300 μL血清樣本;②加入1 mL正己烷;③在旋渦震蕩器上劇烈震蕩3～5 min;④以10000 rpm，4℃離心8 min;⑤取離心液上層(正己烷溶劑層)⑥ 重復(fù)②至⑤總計(jì)3次，合并3次所得的正己烷溶劑層，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至2 mL，轉(zhuǎn)入氣象色譜專用樣品管［4］。

樣品GC－MS參數(shù)設(shè)定方法為:氦氣流量為0.8 mL/min［5］;色譜柱為 HP－5 MS毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);進(jìn)樣方式為自動(dòng)、不分流;進(jìn)樣量為5 μL;進(jìn)樣口溫度為280℃;檢測(cè)器溫度為300℃;柱溫程序?yàn)槌鯗?50℃，2 min后以15℃/min升溫至300℃，保持4 min;離子化方式為EI;離子化能量為70 eV;離子化電流為300 μA。

1.4 方法及觀察指標(biāo) 精液參數(shù)以及生化指標(biāo):采用計(jì)算機(jī)電腦行精液分析，對(duì)精液中果糖、肉毒鹼等進(jìn)行檢測(cè)，采用氣－質(zhì)聯(lián)用法搭配SIM對(duì)精液中的三種酞酸酯進(jìn)行定量，計(jì)算其濃度，分析酞酸酯在精液中的分布情況。

測(cè)定血清中 DBP、DOP、DEHP的濃度:采用氣－質(zhì)聯(lián)用法搭配SIM對(duì)樣品中的三種酞酸酯進(jìn)行定量，計(jì)算其濃度，記錄陽(yáng)性數(shù)量，分析酞酸酯在血清樣品中的分布情況。再測(cè)定各研究對(duì)象血液生化指標(biāo):肝功能(GPT、GOT)采用全自動(dòng)生化儀進(jìn)行檢測(cè)［5］;脂質(zhì)過氧化指標(biāo)(SOD、MDA、GSH －Px)則采用專用試劑盒以及分光光度計(jì)測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)分析 采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，DBP、DEHP含量等計(jì)量資料用(±)表示，檢出率用［n(%)］表示，分別進(jìn)行 t檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)，以 P＜0.05表示差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 精液與血清中BDP、DEHP含量比較 觀察組精液及血清中BDP、DEHP含量均明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)，見表1。

表1 兩組精液與血清中BDP、DEHP含量比較(mg/L)(±s)

表1 兩組精液與血清中BDP、DEHP含量比較(mg/L)(±s)

DEHP觀察組組別 精液DBP 精液DEHP 血清DBP 血清0.09±0.020.13 ±0.040.12 ±0.05 0.38 ±0.04對(duì)照組 0.03±0.010.04 ±0.010.04 ±0.01 0.12 ±0.03 t 26.833 21.838 15.689 52 P ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.2 精液與血清中BDP、DEHP檢出率比較 觀察組精液與血清中BDP、DEHP檢出率均顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，見表2。

表2 兩組精液與血清中DBP、DEHP檢出率比較［n=100，(%)］

3 討論

一次性塑料制品的廣泛使用，使得增塑劑接觸食品的機(jī)會(huì)增多。由于塑料制品中的PAEs可以不斷釋出，造成對(duì)環(huán)境、生物以及食品的潛在危害。食物中的酞酸酯類通過攝食途徑進(jìn)入人體，從而在人體內(nèi)蓄積，對(duì)人體的生長(zhǎng)發(fā)育造成危害［6］。大量動(dòng)物試驗(yàn)研究表明，DBP、DEHP對(duì)生物體有擬雌激素作用與慢性毒性危害，主要表現(xiàn)為生殖毒性，可導(dǎo)致睪丸體重降低、結(jié)構(gòu)變化、精子密度與活力下降，而且與PAEs劑量呈相關(guān)性［7］。Carlsen報(bào)道近年來男性生育能力逐漸降低，精液數(shù)量也在不斷減少。作為環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的一類，酞酸酯類由于未以化學(xué)鍵結(jié)合，隨著時(shí)間的推移，酞酸酯類會(huì)逐漸從塑料中釋放出來，進(jìn)入環(huán)境和生物體內(nèi)［8］。

本組結(jié)果表明，觀察組血清和精液中的DEHP和DBP的檢出率及含量水平均高于對(duì)照組，說明該疾病人群體內(nèi)酞酸酯類暴露水平高于正常人，提示PAEs可能是導(dǎo)致男性不育的原因之一，應(yīng)當(dāng)引起高度重視，避免或減少接觸此類化合物，以降低對(duì)人體產(chǎn)生的潛在危害，并對(duì)其在疾病發(fā)展中所發(fā)揮的作用做更進(jìn)一步的探究［9］。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，兩組人群血清、精液中DEHP含量水平均高于DBP，導(dǎo)致這一結(jié)果的原因可能與酞酸酯在生產(chǎn)和生活中的產(chǎn)量和使用量有關(guān)。在我國(guó)，DEHP是最常用的酞酸酯類增塑劑，約占酞酸酯總量的50%，生產(chǎn)量和使用量均超過DBP，故人群DEHP暴露水平要高于DBP［10］。此外，結(jié)果還顯示血清中酞酸酯含量高于精液，這可能與酞酸酯代謝特性有關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資料表明，大部分的酞酸酯在體內(nèi)會(huì)迅速代謝成穩(wěn)定的單體(MBP、ME腫)，與葡糖苷酸結(jié)合48h后隨尿排出，因此較少會(huì)蓄積于體內(nèi)組織器官中，故精液中酞酸酯含量理論上應(yīng)低于血清中，與本次測(cè)定結(jié)果相符。

綜上所述，男性不育患者精液與血清中DBP、DEHP含量與檢出率均明顯高于健康人群，應(yīng)加強(qiáng)環(huán)境中酞酸酯類化合物的監(jiān)控與干預(yù)，以降低其對(duì)人群的危害。

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