羊膜移植對兔前房藥物濃度的影響

冉瑞金，李德清，張新芳，李清韜

1.湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院眼科(湖北 恩施445000)

2.湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室(湖北 恩施445000)

真菌性角膜炎是一類眼部較重的感染性角膜病變，特別在少數(shù)民族地區(qū)，大部分人群還是以農(nóng)作物生產(chǎn)為主要的生活方式，所以眼外傷的發(fā)生率較高，目前國內(nèi)外報(bào)道真菌性角膜炎的治療效果均較差［1］，在感染性角膜病變中是主要的致盲原因，最終只能行眼球摘除。有較多報(bào)道眼部應(yīng)用抗真菌藥物后的前房藥物濃度測定以及應(yīng)用羊膜后治療真菌性角膜炎取得良好的效果［2－3］，但尚無在羊膜移植后行前房藥物濃度的檢測的報(bào)道，我們設(shè)想早期進(jìn)行羊膜移植能促進(jìn)局部抗真菌藥物滲透角膜到達(dá)前房，測定兔前房的藥物濃度。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 20只新西蘭兔來自湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，體質(zhì)量(1.5±0.6)kg，雌雄兼用，無眼部疾病，購買后一周內(nèi)預(yù)飼養(yǎng)。

1.2 真菌的制備 取出茄病鐮刀菌溶于生理鹽水后轉(zhuǎn)接于PDA斜面上，35℃溫箱中孵育2 d，25℃溫箱孵育7 d，使之形成大量孢子，0.1%吐溫80的滅菌注射用水混勻菌落［4］，沉淀菌落，得上層懸浮液于渦流器中充分混勻，再在顯微鏡下調(diào)整濃度至1.5×106CFU/mL作為接種液。

1.3 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭谱?將20只新西蘭兔右眼均作為對照組，左眼為模型組，雙眼接種前3 d預(yù)防性使用左氧氟沙星滴眼液，接種前用1∶10的水合氯醛，4 mL/kg腹腔注射麻醉，0.05%聚維酮碘消毒模型眼后再生理鹽水沖洗3次，鹽酸丙美卡因表麻三次，開瞼，模型眼角膜基質(zhì)層間注射10 μL茄病鐮刀菌菌株的混懸液，同時(shí)結(jié)膜下注射地塞米松0.1 mL，術(shù)眼金霉素眼膏包覆。術(shù)后2 d裂隙燈下檢查眼部情況，有明顯角膜潰瘍面，前房Tyn(++)，刮取角膜潰瘍組織真菌培養(yǎng)陽性為造模成功。再行腹腔麻醉及表麻下模型眼角膜雙層羊膜覆蓋，8－0可吸收線于角膜緣縫合。

1.4 方法 金霉素眼膏包覆模型眼1 d后雙眼同時(shí)滴用0.5%氟康唑滴眼液滴眼。在表麻及腹腔麻醉下，分別在造模成功后第24、72、120 h用微量加樣器滴用50 μL0.5%氟康唑滴眼液于結(jié)膜囊，輕閉雙瞼 30 s，于局部用藥后 10，15，20，30 min，1 mL 注射器從角膜緣抽取房水約0.1～0.2 mL，用反相高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行定量測定藥物濃度。色譜條件:色譜柱為Spherisorb C18，柱溫為45℃，粒徑為 5 μm，色譜柱長度和直徑為 200.0×4.6 mm，流速為1 mL/min，流動相為0.05 mol/L磷酸二氫鉀－甲醇(65∶35)，檢測波長為265 nm。

2 結(jié)果

表1 羊膜移植術(shù)后在不同時(shí)間段的前房藥物濃度(±s)

表1 羊膜移植術(shù)后在不同時(shí)間段的前房藥物濃度(±s)

藥物濃度(mg/L) 時(shí)間5 min 10 min 15 min 20 min 30 min對照組 1.058 ±0.335 1.955 ±0.338 2.345 ±0.456 2.089 ±0.393 1.951 ±0.291 24 h 1.016 ±0.233 1.945 ±0.295 2.33 ±0.273 2.002 ±0.206 1.904 ±0.149 72 h 1.643 ±0.503 3.105 ±0.634 2.900 ±0.722 2.784 ±0.499 2.214 ±0.413 120 h 1.695 ±0.748 3.290 ±0.612 3.031 ±0.724 2.819 ±0.506 2.411 ±0.529

2.1 前房藥物濃度值 對照組滴用0.5%氟康唑液后房水中藥物濃度15 min達(dá)高峰，隨著時(shí)間的延長，前房藥物濃度逐漸達(dá)到高峰，在24 h和7 h時(shí)前房藥物濃度在15 min時(shí)最高，120 h10 min時(shí)前房藥物濃度達(dá)到最高峰。見表1。

2.2 前房藥物濃度的比較 滴用0.5%氟康唑液后在10 min和15 min時(shí)是房水中兩個藥物濃度的高峰期，在10 min時(shí)，72 h和120 h均明顯高于對照組(P＜0.05)(見圖1)，而在15 min時(shí)，羊膜覆蓋后三組前房的藥物濃度只有在羊膜覆蓋后120 h與對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)(見圖2)。

3 討論

真菌性角膜炎是眼科感染性疾病中治療最為棘手的角膜疾病，病情往往難以控制，易發(fā)展為真菌性眼內(nèi)炎，最終導(dǎo)致眼球喪失?？诜拐婢幬镅獫{內(nèi)可以達(dá)到有效的血藥濃度，但在角膜組織及前房局部難以達(dá)到有效的抑菌濃度，而且口服抗真菌藥物會出現(xiàn)較多的藥物毒副作用［5］，在局部應(yīng)用抗真菌藥物很難滲透進(jìn)入到角膜組織及前房，我們應(yīng)用羊膜組織覆蓋于真菌性角膜潰瘍面，測定前房的藥物濃度，結(jié)果顯示較高藥物濃度，達(dá)到了氟康唑液的大部分抗真菌的有效抑菌濃度［6］。氟康唑被證實(shí)是一種有效的抗真菌藥物，對曲霉菌，鐮刀菌，白假絲酵母菌等真菌有很好的治療效果，具有水溶性好、代謝穩(wěn)定、分子量較小等特點(diǎn)，屬于三唑類抗真菌藥物［7］，而且市場價(jià)格便宜，適合于基層醫(yī)院對真菌性角膜炎的廣泛應(yīng)用。

圖1

圖2

羊膜是胎膜的最內(nèi)層，包含內(nèi)皮細(xì)胞層和較厚基質(zhì)層，整個膜沒有血管，能夠抑制新生血管生成，有效抵御微生物的入侵、促進(jìn)上皮細(xì)胞的增生和干細(xì)胞的再生，在角膜和結(jié)膜眼表疾病的再建中應(yīng)用廣泛［8］，較多的文獻(xiàn)報(bào)道羊膜在行穿透性角膜移植［9］、角膜化學(xué)燒傷［10］修復(fù)中的應(yīng)用取得到了良好臨床效果。

我們的實(shí)驗(yàn)測定在羊膜移植后滴用0.5%氟康唑液不同時(shí)間點(diǎn)的前房藥物濃度，結(jié)果顯示應(yīng)用羊膜組前房的藥物濃度明顯高于對照組，而且前房的藥物峰值濃度提前，前房藥物的濃度在120 h滴用0.5%氟康唑液10 min時(shí)達(dá)到最高值，對大部分真菌起到抑制作用，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，羊膜移植術(shù)后在72、120 h滴用0.5%氟康唑液在10 min時(shí)均有意義高于對照組，與 Hoffmann［9］和 liu［10］等的結(jié)果相似。在角膜移植和角膜化學(xué)燒傷羊膜的功能移植，顯示了羊膜除了在抵御眼部的微生物入侵，抑制新生血管的生長和促進(jìn)潰瘍的修復(fù)外，還能夠促進(jìn)藥物在角膜表面的滲透性，增加前房的藥物濃度，是前房氟康唑的藥物濃度達(dá)到大部分真菌的抑菌濃度，因此羊膜移植可以用于真菌性角膜潰瘍的輔助治療，但是臨床的療效需要進(jìn)一步臨床試驗(yàn)的證實(shí)。

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