肥胖對大鼠前列腺炎性反應(yīng)的影響及其相關(guān)機(jī)制＊

劉世學(xué)，李 可，謝 斌，張厚彬

（重慶市巴南區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科 401320）

慢性前列腺炎（chronic prostatitis，CP）是泌尿外科男性的常見疾病，50歲以下青壯年男性患病率較高。泌尿外科門診中前列腺炎患者約占8%～25%，男性一生中曾經(jīng)出現(xiàn)過CP癥狀者約占50%［1－2］。CP嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，但發(fā)病機(jī)制、病理生理改變尚不十分清楚。肥胖是指體內(nèi)脂肪組織過量儲存，脂肪細(xì)胞增多和（或）增大的一種狀態(tài)。國內(nèi)外的研究表明，肥胖患者體內(nèi)炎癥因子水平高于健康人群，肥胖與慢性炎癥反應(yīng)和慢性疾病密切相關(guān)［3－5］。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，高熱量飲食及肥胖可能是CP的一個危險因素之一［6］。但目前肥胖與CP的關(guān)系尚不明確，因此本文采用動物實(shí)驗(yàn)來探討肥胖與CP的關(guān)系及其相關(guān)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 選用健康成年雄性SD大鼠60只，8周齡，體質(zhì)量200～250g。普通飼料：能量10%由脂肪提供；高脂飼料：能量45%由脂肪提供（中國上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司）。Trizol（美國Invitrogen公司），RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（寶生物工程大連有限公司），SYBR Green（美國Bio－Rad公司）。白細(xì)胞介素（IL）－6和IL－8酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（美國Cusabio公司）。CFX 96TM PCR儀（美國Bio－Rad公司），奧林巴斯BX51顯微鏡（日本奧林巴斯公司）。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的建立 清潔級雄性SD大鼠飼養(yǎng)于重慶醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心。保持飼養(yǎng)條件為溫度（25±1）°C，濕度60%±5%，照明12h。實(shí)驗(yàn)分為3組：普通飼料組（15只）、高脂飼料組（30只）、陽性對照組（15只）。陽性對照組喂養(yǎng)普通飼料，從第6周開始給予皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mg／kg，每日注射1次，連續(xù)注射4周［7］。各組大鼠每周記錄其體質(zhì)量，共喂養(yǎng)10周。

1.2.2 前列腺液分析 動物處死后取前列腺組織擠出前列腺液，吸取10μL進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)。另取1滴涂片鏡檢卵磷脂小體密度。并對其分級：滿視野為4級，3／4視野為3級，2／4視野為2級，1／4視野為1級［8］。

1.2.3 ELISA檢測炎癥因子水平 各組大鼠取前列腺液后采用IL－6、IL－8ELISA試劑盒進(jìn)行檢測。根據(jù)試劑盒說明書步驟，在酶標(biāo)包被板上將標(biāo)準(zhǔn)品及各組前列腺稀釋液上樣，每孔體積50μL。在37℃孵育2h，洗滌后各孔加入酶標(biāo)抗體37℃中孵育1h；洗滌后各孔加入生物素抗體37℃孵育1h；加顯色液37℃孵育20min；終止液終止反應(yīng)，采用酶標(biāo)儀A450nm測定各孔吸光值。

1.2.4 實(shí)時定量－聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）檢測mRNA表達(dá)水平 3組大鼠處死后，取前列腺組織，浸泡于RNA保護(hù)液。提取細(xì)胞總mRNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)為cDNA。用RT－PCR法檢測IL－6和IL－8的mRNA表達(dá)水平。IL－6上游序列為：5′－CCA CGG CCT TCC CTA CTT C－3′；下游序列為：5′－TTG GGA GTG GTA TCC TCT GTG A－3′。IL－8上游序列為：5′－CCT GCT GGC TGT CCT TAA CC－3′；下游序列為：5′－GAC ATC GTA GCT CTT GAG TGT CAC A－3′。采用 RT－PCR分析軟件Bio－Rad CFX manager分析結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用GraphPad Prism5統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析作圖。計量資料以s表示，結(jié)果采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 動物模型的建立 各組大鼠喂養(yǎng)飼料5周之后，高脂飼料組體質(zhì)量開始明顯高于普通飼料組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見圖1。

圖1 各組大鼠從喂養(yǎng)第1～10周的體質(zhì)量變化

2.2 前列腺液分析 與普通飼料組相比，高脂飼料組和陽性對照組前列腺液中的白細(xì)胞數(shù)顯著增多，卵磷脂小體密度顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠前列腺液中卵磷脂小體密度和白細(xì)胞計數(shù)±s）

表1 各組大鼠前列腺液中卵磷脂小體密度和白細(xì)胞計數(shù)±s）

分組 n 白細(xì)胞數(shù)（106 L－1） 卵磷脂小體密度（分級）15 3.54±0.65 3.65±0.49高脂飼料組 30 5.47±0.54 2.40±0.50陽性對照組普通飼料組15 6.44±0.82 2.15±0.67

2.3 炎癥因子分泌 與普通飼料組相比，高脂飼料組和陽性對照組前列腺液中的IL－6和IL－8釋放水平明顯著增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 各組大鼠前列腺液中IL－6和IL－8的釋放水平（ng／mL±s）

表2 各組大鼠前列腺液中IL－6和IL－8的釋放水平（ng／mL±s）

分組 n IL－6釋放水平 IL－8釋放水平普通飼料組15 0.18±0.08 2.42±0.35高脂飼料組 30 0.35±0.12 4.66±1.74陽性對照組15 0.41±0.18 5.84±1.98

2.4 各組大鼠前列腺IL－6和IL－8的mRNA表達(dá)水平 與普通飼料組相比，高脂飼料組和陽性對照組前列腺組織IL－6和IL－8的 mRNA表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 各組大鼠前列腺IL－6和IL－8的mRNA表達(dá)水平±s）

表3 各組大鼠前列腺IL－6和IL－8的mRNA表達(dá)水平±s）

分組 n IL－6相對表達(dá)水平 IL－8相對表達(dá)水平普通飼料組15 1.00±0.00 1.00±0.00高脂飼料組 30 2.46±0.55 1.97±0.48陽性對照組15 3.13±0.98 2.36±0.76

3 討 論

CP是一種十分常見的疾病，常表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿痛、排尿不盡、排尿困難等排尿異常，會陰部、下腹部等部位不適或疼痛。其發(fā)病機(jī)制、病因、發(fā)病機(jī)理尚不明確。有研究表明免疫反應(yīng)參與了CP的發(fā)生、發(fā)展。

近年來的研究表明，前列腺被認(rèn)為是一種免疫源性器官，如果其受到外源性致病因子的刺激，就會有相關(guān)細(xì)胞因子與炎性反應(yīng)［9］。其中，活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生前炎癥因子腫瘤壞死因子（TNF）、IL－1和趨化細(xì)胞因子IL－8，IL－8對中性粒細(xì)胞有趨化作用［10］。T細(xì)胞原性的細(xì)胞因子如IL－6作用為減弱炎性反應(yīng)。IL－6下調(diào)IL－1和TNF等前炎癥因子合成，促進(jìn)糖皮質(zhì)激素和可溶性TNF受體釋放，此外IL－6還抑制GM－CSF、IFN－C和 MIP－2等前炎癥因子的產(chǎn)生［10－11］。

國內(nèi)外研究已經(jīng)證明，肥胖是由不同炎癥因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種全身性的慢性低度炎性反應(yīng)，肥胖患者的血液中的炎癥標(biāo)志物IL－6、TNF－α等都明顯高于普通人群［12］。肥胖與代謝綜合征等慢性疾病密切相關(guān)，最近流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)高脂飲食和肥胖可能對CP的發(fā)生、發(fā)展有不利影響［6］。本研究表明，高脂飼料誘發(fā)的肥胖大鼠其前列腺液中卵磷脂小體密度和白細(xì)胞數(shù)量分別低于和高于普通飼料組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示肥胖與CP的發(fā)病具有一定的聯(lián)系。在進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中，肥胖大鼠的前列腺液中炎癥因子IL－6和IL－8的分泌和基因表達(dá)都明顯高于普通飼料組，提示肥胖大鼠對增加前列腺組織的炎癥因子釋放有明顯的影響。國內(nèi)外文獻(xiàn)報道，肥胖介導(dǎo)的炎性反應(yīng)涉及IκB／NF－κB信號通路和JNK通路［13］，在今后的研究中有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，肥胖介導(dǎo)的慢性炎性反應(yīng)在CP的發(fā)生、發(fā)展中可能起了重要作用，可能是男性發(fā)生CP的一個高風(fēng)險因素。因此，努力改善自身代謝狀況、加強(qiáng)健康監(jiān)測、控制肥胖，對于預(yù)防CP具有重要意義。

［1］吳在德，吳肇漢，鄭樹，等.外科學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：659.

［2］丁可珂，粱朝朝.精索靜脈曲張與慢性前列腺炎相關(guān)性的研究進(jìn)展［J］.中華泌尿外科雜志，2012，33（6）：468－470.

［3］Ouchi N，Higuchi A，Ohashi K，et al.Sfrp5is an anti－inflammatory adipokine that modulates metabolic dysfunction in obesity［J］.Science，2010，329（5990）：454－457.

［4］Maury E，Brichard SM.Adipokine dysregulation，adipose tissue inflammation and metabolic syndrome［J］.Mol Cell Endocrinol，2010，314（1）：1－16.

［5］王旭方.肥胖與免疫炎癥［J］.腎臟病與透析腎移植雜志，2011，20（5）：455－460.

［6］Tewari R，Rajender S，Natu SM，et al.Diet，obesity，and prostate health：are we missing the link［J］.J Androl，2012，33（5）：763－776.

［7］李衛(wèi)平，王養(yǎng)民，馬文強(qiáng)，等.β－actin在無菌性前列腺炎大鼠模型中免疫抑制治療前后的表達(dá)及意義［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2010，16（4）：746－748.

［8］孫繼紅，胡梅，巫鳳娟，等.花川保列顆粒對大鼠非菌性前列腺炎模型的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（4）：135－138.

［9］高衛(wèi)軍，王長海.良性前列腺增生合并慢性前列腺炎的研究進(jìn)展［J］.西北國防醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（4）：453－455.

［10］葉海云，侯樹坤，白文俊，等.慢性前列腺炎患者前列腺液IL－6和IL－8表達(dá)變化及意義［J］.中華泌尿外科雜志，2003，24（4）：279－281.

［11］周青，田雪飛，袁軼峰，等.慢性非細(xì)菌性前列腺炎／慢性盆腔疼痛綜合征患者前列腺液中炎癥因子差異表達(dá)的臨床意義［J］.中華泌尿外科雜志，2009，30（6）：386－389.

［12］孫波，李輝，王寧.肥胖與慢性炎癥［J］.生物學(xué)雜志，2012，29（2）：88－90.

［13］Herrero L，Shapiro H，Nayer A，et al.Inflammation and adipose tissue macrophages in lipodystrophic mice［J］.Proc Natl Acad Sci，2010，107（1）：240－245.