EPCs示蹤大鼠腦原位膠質(zhì)瘤的動(dòng)態(tài)MRI研究

李然，方靖琴，陳曉，郭宇，艾華，張偉國(guó)*

內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)是一種可以在體內(nèi)參與新生血管生成的多能干細(xì)胞，能游走到新生腫瘤區(qū)域從生理和病理上參與血管的重建。但目前內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤內(nèi)部的遷移特點(diǎn)及機(jī)制仍不明確，筆者將超微型超順磁氧化鐵(USPIO)標(biāo)記過的EPCs經(jīng)尾靜脈移植入大鼠體內(nèi)，采用MRI動(dòng)態(tài)觀察活體條件下EPCs在腫瘤組織中的分布及遷移特點(diǎn)，并通過病理證實(shí)，為利用磁性標(biāo)記的EPCs作為MRI示蹤細(xì)胞載體提供可行性實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

清潔級(jí)健康SD大鼠：第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所動(dòng)物中心提供；C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞來源于中科院細(xì)胞庫。超微型超順磁氧化鐵(USPIO)：四川大學(xué)生物材料工程學(xué)院艾華實(shí)驗(yàn)室贈(zèng)送，DMEM培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司)，胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、杜氏磷酸鹽緩沖液DPBS(美國(guó)Hyclone公司)、大鼠淋巴細(xì)胞分離液(sigma)，大鼠抗VEGF抗體、抗SDF-1抗體、抗MMP-9抗體、大鼠抗F4/80抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)。

1.2 內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的培養(yǎng)、鑒定和標(biāo)記

內(nèi)皮祖細(xì)胞采用差速貼壁法培養(yǎng)，鑒定工作我科以往的研究生已完成，標(biāo)記EPCs采用四川大學(xué)華西醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)方法，分別取20μl USPIO液體和0.6μl PLL液體，加入2 ml無血清培養(yǎng)基內(nèi)，室溫下振蕩混勻60min；吸棄EPCs培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，加入上述USPIO-PLL復(fù)合標(biāo)記物，37 ℃，5%CO2孵育24 h。

1.3 建立大鼠膠質(zhì)瘤模型

將清潔級(jí)健康SD大鼠[雄性，體重(150±10) g]分為假腫瘤組、腫瘤組、對(duì)照組三組，每組16只。刺破大鼠顱骨與腦膜將1×106C6細(xì)胞種入腦組織內(nèi)。待腫瘤生長(zhǎng)至第8天時(shí)，向腫瘤組和假腫瘤組尾靜脈內(nèi)注射2×106EPCs，對(duì)照組僅注射等量DPBS，不移植EPCs。

1.4 膠質(zhì)瘤模型大鼠MRI掃描

(1)掃描時(shí)間點(diǎn)：3組均在EPCs移植前、移植后1、3、5、7 d進(jìn)行掃描。(2)氣體麻醉大鼠，采用7.0T磁共振掃描儀(德國(guó)Bruker公司，Biospec 70/20USR)，將其固定于三英寸環(huán)形線圈進(jìn)行掃描。(3)掃描序列及參數(shù)SE-T1WI序列：TR 800ms，TE 8 ms；FOV 35 mm×35 mm，層厚0.5 mm，層間距0.5 mm，Matrix 256×256，NEX 4。FRFSE-T2WI序列：TR 2500ms，TE 45.0ms；FOV 35 mm×35 mm，層厚 0.5 mm，層間距 0.5 mm，Matrix 256×256，NEX 4。SWI掃描序列：對(duì)照T2WI序列定位線，Matrix 384×380；NEX 4，反轉(zhuǎn)角40°。T2 map序列：TR 3800ms，TE 45.0ms，F(xiàn)OV 25 mm×25 mm，層厚 0.5 mm，層間距 0.5 mm，Matrix 128×128，NEX 4。T2 map掃描所得原始圖像導(dǎo)入PV5.1后處理工作站處理T2 map數(shù)據(jù)，通過計(jì)算產(chǎn)生偽彩圖，并選擇興趣區(qū)域，保持相同大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)的圖像興趣區(qū)一致，通過計(jì)算得到T2值。

1.5 病理組織學(xué)觀察

按照實(shí)驗(yàn)分組，將大鼠腦組織灌注取材后進(jìn)行固定和石蠟包埋，石蠟標(biāo)本連續(xù)切片7～8張，行HE染色、普魯士藍(lán)染色和免疫組化檢查，包括抗大鼠巨噬細(xì)胞抗體(F4/80)、人基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1 (SDF-1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)檢查。

1.6 病理結(jié)果分析

(1)普魯士藍(lán)染色分析：在紅染的細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)染的顆粒則提示為陽性，高倍(×400)光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，取其平均值作為該組在該時(shí)間點(diǎn)的陽性細(xì)胞，并對(duì)各組各時(shí)間點(diǎn)陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行比較分析。(2) F4/80表達(dá)陽性分析：在細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕褐色為染色陽性，與同層普魯士藍(lán)染色陽性的標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比，觀察普魯士藍(lán)染色陽性的細(xì)胞是否呈陽性表達(dá)。(3) MMP-9、HIF-1、VEGF表達(dá)陽性分析：在細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕褐色顆粒為陽性染色。

2 結(jié)果

2.1 假腫瘤組和腫瘤組的MRI圖像分析

假腫瘤組注射EPCs前在T1WI上表現(xiàn)為均勻的低信號(hào)，在T2WI上表現(xiàn)為以低信號(hào)為主的混雜信號(hào)，在注射EPCs后各時(shí)間點(diǎn)T2WI上的信號(hào)無明顯變化(圖1)。而腫瘤組在注射EPCs前在T2WI表現(xiàn)為類圓形的均勻較高信號(hào)，在SWI(susceptibility weighted imaging)上呈等高信號(hào)，內(nèi)部可見少許蜿蜒的低信號(hào)。注射USPIO標(biāo)記的EPCs第1天后，在T2WI上與注射前無明顯變化，但在SWI上腫瘤周邊出現(xiàn)少許點(diǎn)狀低信號(hào)，第3天后在SWI上腫瘤內(nèi)部蜿蜒的血管信號(hào)增多，并可見多發(fā)沿血管信號(hào)分布的點(diǎn)狀低信號(hào)，第5天和第7天后腫瘤中心區(qū)域出現(xiàn)明顯低信號(hào)(圖2)。而對(duì)照組僅可見腫瘤逐漸增大，其內(nèi)信號(hào)未見明顯改變(圖3)。在T2 map后處理圖上選取病變興趣區(qū)測(cè)量其T2值，發(fā)現(xiàn)假腫瘤組4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的T2值分別為48.3、47.9、47.6 ms和46.3 ms，整體變化不大，而腫瘤組4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的T2值分別為66.1、60.4、51.5、43.7 ms，呈下降趨勢(shì)。

2.2 病理組織學(xué)結(jié)果

2.2.1 HE染色

梭形的腫瘤細(xì)胞排列密集，與正常腦組織有明顯分界，其內(nèi)可見明顯的異型性和細(xì)胞核分裂象，腫瘤中心可見新生血管。

2.2.2 普魯士藍(lán)染色和F4/80染色

經(jīng)普魯士藍(lán)染色后發(fā)現(xiàn)腫瘤組在移植EPCs后1 d在腫瘤周邊區(qū)出現(xiàn)大量藍(lán)染細(xì)胞，在第3天、5天和第7天在腫瘤內(nèi)部也可見大量藍(lán)染細(xì)胞，且主要集中在腫瘤新生血管區(qū)域(圖4)。而假腫瘤組腦組織內(nèi)僅見零星藍(lán)染細(xì)胞，未移植過EPCs的對(duì)照組則未發(fā)現(xiàn)藍(lán)染細(xì)胞，將普魯士藍(lán)染色陽性的同層切片用F4/80染色，其內(nèi)并未發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果，證明藍(lán)染的細(xì)胞為USPIO標(biāo)記過的EPCs。計(jì)數(shù)各組各時(shí)間點(diǎn)的普魯士藍(lán)染色陽性細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)腫瘤組和假腫瘤組在不同時(shí)間點(diǎn)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05；表1)。

表1 兩組標(biāo)本4個(gè)時(shí)間點(diǎn)普魯士藍(lán)染色陽性細(xì)胞數(shù)Tab.1 the number of Prussian blue (PB) staining positive cells and experiment group

2.2.3 CD34+的表達(dá)

CD34+主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，腫瘤組在移植USPIO-EPCs第1天后腫瘤標(biāo)本內(nèi)可見CD34+表達(dá)，但腫瘤外周區(qū)比腫瘤中央?yún)^(qū)表達(dá)得更為顯著，其分布與普魯士藍(lán)染色陽性細(xì)胞基本一致，而在移植USPIO-EPCs第7天后CD34+陽性表達(dá)區(qū)域在腫瘤內(nèi)外分布較均勻。

2.2.4 SDF-1、MMP-9的表達(dá)

SDF-1主要表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，而MMP-9主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞漿及血管基底膜上，呈棕黃色則為陽性。腫瘤組在移植USPIOEPCs第1天后腫瘤外周區(qū)可見明顯的SDF-1和MMP-9表達(dá)，腫瘤中央?yún)^(qū)也可見SDF-1和MMP-9表達(dá)，但不如外周區(qū)顯著，而在移植后第7天后腫瘤中央?yún)^(qū)SDF-1和MMP-9表達(dá)增多，與腫瘤外周區(qū)并無明顯差異(圖5)。

2.2.5 VEGF的表達(dá)

VEGF主要表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi)，部分周圍結(jié)締組織及血管內(nèi)皮細(xì)胞也可呈陽性染色。腫瘤組在移植USPIO-EPCs第1天后腫瘤外周區(qū)未見明顯陽性細(xì)胞，內(nèi)部可見少許染色陽性的細(xì)胞。而在移植USPIO-EPCs第7天后腫瘤標(biāo)本內(nèi)有大量VEGF染色陽性的細(xì)胞，其均勻分布于腫瘤內(nèi)(圖6)。

圖1 假腫瘤組T2WI橫斷面。A：為注射EPC后第1天的圖像，左側(cè)額葉可見三角形以低信號(hào)為主的混雜信號(hào)，邊界清晰；B：為注射EPCs后第7天的圖像，左側(cè)額葉仍可見與注射EPCs前相似的信號(hào) 圖2 分別為腫瘤組注射EPCs后第1天、第7天2個(gè)時(shí)間點(diǎn)的SWI圖像。A：在注射EPCs第1天后在腫瘤周邊出現(xiàn)小片狀低信號(hào)區(qū)；B：注射EPCs第7天后腫瘤內(nèi)部出現(xiàn)明顯的低信號(hào) 圖3 A，B：分別為對(duì)照組相同時(shí)間點(diǎn)掃描的SWI圖像，腫瘤隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增大，但是其內(nèi)信號(hào)無明顯變化Fig.1 T2WI image of fake experimental group.A: There was a triangle Mixed signal consisted of hypointensity signal largely in the left frontal lobe on 1 day after EPCs was transplanted.B: There was the similar signal in the T2WI sequence on 7 day.Fig.2 Changes of SWI image of intracranial glioma model in experiment group on day 1 and 7 day after EPCs transplantation.A: A little hypointensity singal was observed at the periphery of the tumor on SWI image in day 1 after EPCs transplantation.B: SWI shows a large of hypointensity singal in the center of the tumor in day 7 after EPCs transplantation.Fig.3 A, B: Changes of SWI image of intracranial glioma model in control group over time: the signal has no change except for the volume larger.

3 討論

內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是一種可以自我更新、增殖分化為內(nèi)皮細(xì)胞的多能干細(xì)胞，其多以靜止?fàn)顟B(tài)存在于骨髓龕內(nèi)，可以受到多種細(xì)胞因子的趨化作用而釋放游走到病變區(qū)域參與血管重建[1]。惡性膠質(zhì)瘤是腦組織內(nèi)最常見的腫瘤，致死率和復(fù)發(fā)率很高，其原因主要是由于手術(shù)難以全部切除和衛(wèi)星灶的殘存[2]。鑒于EPCs 的歸巢特點(diǎn)，有望利用EPCs以載體的方式治療腫瘤。

為了在MRI能檢測(cè)到EPCs，筆者利用超小型超順磁氧化鐵粒子(ultrasmall superparamagnetic iron oxide，USPIO)標(biāo)記EPCs，其敏感性高、無毒，當(dāng)其分布于組織后，可引起局部磁場(chǎng)改變，縮短組織的T1和T2值，從而使組織信號(hào)降低。Lee等[3]用1.5 T磁共振對(duì)微凝膠-SPIO標(biāo)記的EPCs進(jìn)行示蹤，發(fā)現(xiàn)其對(duì)EPCs的生物學(xué)功能沒有影響。

我科研究生[4]已證實(shí)將EPCs通過尾靜脈注射入原位移植的膠質(zhì)瘤體內(nèi)后，在病理學(xué)上可以檢測(cè)到EPCs分布于腫瘤內(nèi)，但原位移植需刺破腦膜和腦組織，造成大鼠腦組織損傷，據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[5]，EPCs 可以歸巢至創(chuàng)傷組織參與組織修復(fù)，因此原位移植膠質(zhì)瘤大鼠腦組織內(nèi)的EPCs是由于腫瘤趨化所致還是由于創(chuàng)傷趨化所致仍需進(jìn)一步探討。筆者將腫瘤組、假腫瘤組和對(duì)照組在相同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行MRI掃描，發(fā)現(xiàn)假腫瘤組、對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)T2WI和SWI上信號(hào)變化均不大，而腫瘤組則在注射EPCs后在腫瘤周邊出現(xiàn)了明顯的點(diǎn)狀低信號(hào)，并隨著瘤齡的增長(zhǎng)逐漸增多并遷移入腫瘤內(nèi)部，為了能夠更準(zhǔn)確地反應(yīng)病變內(nèi)部信號(hào)變化的情況，筆者用T2 map序列獲得了興趣區(qū)的T2值，假移植組和對(duì)照組在5個(gè)時(shí)間點(diǎn)T2值變化不大，曲線趨于平穩(wěn)，而腫瘤組5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的T2值逐漸下降，這說明USPIO-EPCs向腫瘤內(nèi)部大量歸巢從而聚集導(dǎo)致T2值下降，而假腫瘤組由于USPIOEPCs歸巢較少，T2值變化并不顯著。同時(shí)，用普魯士藍(lán)染色后在腫瘤組切片內(nèi)發(fā)現(xiàn)了較多藍(lán)染細(xì)胞，主要分布于新生血管周圍，而在假移植組腦組織內(nèi)僅有零星的藍(lán)染細(xì)胞，對(duì)其各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證明原位移植時(shí)對(duì)大鼠顱腦造成的損傷對(duì)EPCs歸巢影響較小，EPCs的歸巢主要是由于該處腫瘤趨化所致。由于巨噬細(xì)胞可以吞噬含鐵血黃素，其經(jīng)過普魯士藍(lán)染色后細(xì)胞內(nèi)也可出現(xiàn)藍(lán)染的顆粒，為了與其鑒別，筆者檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)F4/80的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)普魯士藍(lán)染色陽性區(qū)域的細(xì)胞漿內(nèi)并未出現(xiàn)棕色顆粒，提示之前藍(lán)染的細(xì)胞并非巨噬細(xì)胞，而是USPIO標(biāo)記過的EPCs。

圖4 分別腫瘤組移植EPCs后第1天后(A)、第3天(B)和第7天(C)后普魯士藍(lán)染色：腫瘤細(xì)胞區(qū)域出現(xiàn)大量藍(lán)染細(xì)胞，移植EPCs后第1天染色陽性細(xì)胞主要出現(xiàn)在腫瘤表面，第3天和第7天染色陽性細(xì)胞逐漸遷移進(jìn)入腫瘤內(nèi)部(PB ×200) 圖5 A，B：分別為腫瘤組移植USPIO-EPCs后第1天和第7天的MMP-9表達(dá)。在移植第1天腫瘤區(qū)域即可見明顯的MMP-9表達(dá)，但腫瘤表面較內(nèi)部分布較多；而在移植后第7天發(fā)現(xiàn)MMP-9在腫瘤內(nèi)外均有表達(dá)，且分布較均勻。C，D：分別為腫瘤組移植USPIO-EPCs后第1天和第7天的SDF-1表達(dá)，在移植后第1天腫瘤表面SDF-1表達(dá)較內(nèi)部顯著，而在移植后第7天發(fā)現(xiàn)SDF-1在腫瘤內(nèi)外均有表達(dá)，且分布較均勻( ×200) 圖6 A，B：分別為腫瘤組移植USPIO-EPCs后第1天和第7天的VEGF表達(dá)：在移植后第1天腫瘤區(qū)域僅見少許零星分布的VEGF表達(dá)，表面和內(nèi)部分布較均勻，在移植后第7天腫瘤內(nèi)部表達(dá)顯著增多，染色陽性細(xì)胞仍分布較均( ×200)Fig.4 Distribution of Prussian blue (PB) staining-positive cells in experiment group before EPCs transplantation, on day 1 and day 7 after EPCs transplantation.A: Prussian blue staining positive cells were mainly seen at the periphery of the tumor on 1 day after EPCs transplantation.B, C: Prussian blue staining positive cells gradually immigrate in the center of the tumor (PB ×200).Fig 5 A, B: Expression of MMP-9 chemoattractant factors at the sites of migrated USPIO-EPCs in tumors on day 1 and day 7 after EPCs transplantation.MMP-9 staining shows much more obvious expression at the periphery of the tuomr than the centre (A), MMP-9 staining shows generalized expression both in the center and periphery of tumor without obvious discrepancy (B).C, D: Expression of SDF-1 chemoattractant factors at the sites of migrated USPIO-EPCs in tumors on day 1 and day 7 after EPCs transplantation.SDF-1 staining shows much more obvious expression at the periphery of the tuomr than the centre, SDF-1 staining shows generalized expression both in the center and periphery of tumor without obvious discrepancy ( ×200).Fig 6 A, B: Expression of VEGF in the field of the experiment group in tumors on day 1 and day 7 after EPCs transplantation.the number of VEGF stain increases over time , but the distribution is still equality ( ×200).

腫瘤血管生成是微循環(huán)網(wǎng)的形成和腫瘤細(xì)胞誘發(fā)的毛細(xì)血管新生，其是實(shí)體瘤的后續(xù)生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，EPCs可以通過血管發(fā)生(vasculogenesis)的方式參與腫瘤血管的形成[6]，而EPCs的歸巢是一個(gè)很復(fù)雜的過程，多種化學(xué)因子，如SDF-1、HIF-1、VEGF、MMP-9等都是引起EPCs歸巢的重要因素[7]。SDF-1是一種對(duì)造血干細(xì)胞非常有效的化學(xué)引誘物，而內(nèi)皮祖細(xì)胞是CD34細(xì)胞的一個(gè)種屬，不管是CD34細(xì)胞還是內(nèi)皮祖細(xì)胞都有很明顯的CXCR4的表達(dá)，這種物質(zhì)正是SDF1的一個(gè)受體，可以促使EPCs向SDF-1表達(dá)較多的區(qū)域聚集[8]。MMP-9是血管發(fā)生啟動(dòng)系統(tǒng)中的成員之一，可以上調(diào)和促進(jìn)腫瘤血管化，并可以動(dòng)員EPCs從骨髓內(nèi)釋放入外周血[9]。筆者通過免疫組化發(fā)現(xiàn)SDF-1和MMP-9在腫瘤早期主要表達(dá)在腫瘤外周區(qū)，隨著瘤齡的增長(zhǎng)在腫瘤內(nèi)部表達(dá)增加，且內(nèi)外分布較均勻，這與EPCs遷移趨勢(shì)基本一致，因此筆者認(rèn)為SDF-1和MMP-9在腫瘤內(nèi)部表達(dá)的變化是引起EPCs遷移的原因之一。VEGF是最重要的血管生長(zhǎng)刺激因子，可以動(dòng)員骨髓起源的內(nèi)皮祖細(xì)胞使外周血內(nèi)的內(nèi)皮祖細(xì)胞增加[10]，筆者通過免疫組化發(fā)現(xiàn)早期腫瘤VEGF表達(dá)不多，且表面和內(nèi)部分布較均勻，隨著瘤齡的增長(zhǎng)VEGF表達(dá)越來越顯著，但內(nèi)外分布也沒有明顯差異，因此筆者認(rèn)為VEGF在EPCs在腫瘤內(nèi)部由外向內(nèi)遷移的過程中起到的作用并不大。

總之，利用MRI可以可以對(duì)磁性標(biāo)記的EPCs在體內(nèi)的分布、歸巢和參與血管形成過程進(jìn)行示蹤和定位，其準(zhǔn)確性被病理學(xué)指標(biāo)所證實(shí)，EPCs在大鼠膠質(zhì)瘤內(nèi)的遷移特點(diǎn)可以為轉(zhuǎn)基因內(nèi)皮祖細(xì)胞作為載體攜帶毒性基因、自殺基因、抗癌藥物到達(dá)腫瘤微血管區(qū)域治療腫瘤提供相應(yīng)的依據(jù)[11]。

[Rferences]

[1]Kim JY, Ahn HJ, Ryu JH, et al.BH3-only protein Noxa is a mediator of hypoxic cell death induced by hypoxia-inducible factor 1 alpha.J Exp Med, 2009, 199(1): 113-124.

[2]Hu HB, Liu PF.Application of magnetic resonance diffusion tensor imaging and fiber tractography to evaluate the value of diagnostic classifcation of cerebral gliomas.Chin J Magn Reson Imaging, 2011,2(2): 118-122.胡鴻博，劉鵬飛.磁共振彌散張量成像及纖維束成像對(duì)腦膠質(zhì)瘤分級(jí)的診斷價(jià)值.磁共振成像, 2011, 2(2): 118-122.

[3]Lee ES, Shuter B, Chan J, et al.The use of microgel iron oxide nanoparticles in studies of magnetic resonance relaxation and endothelial progenitor cell labeling.Biomaterials, 2010, 31(2):3296-3306.

[4]Wang B ,Wang Y, Zhang WG, et al.Growth pattern of rat C6 brain gliomas:imaging and histopathologic observation.Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2008, 30(2): 1940-1943.王博, 王毅, 張偉國(guó), 等.大鼠C6腦膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)規(guī)律的影像學(xué)與病理學(xué)觀察.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2008, 30(2): 1940-1943.

[5]Wu XN，Zhang WG，F(xiàn)ang JQ, et al.Dynamic CT perfusion imaging in rats with traumatic brain injury and its relatingpathophysiological basis: preliminary study.Chin J Trauma, 2011, 27(2): 782-786.吳曉寧, 張偉國(guó), 方靖琴, 等.大鼠顱腦損傷動(dòng)態(tài)CT灌注成像及相關(guān)病理生理學(xué)基礎(chǔ)的初步研究.中華創(chuàng)傷雜志, 2011, 27(2):782-786.

[6]Fang J, Wang S, Chen J, et al.The effects of magnetically labeled rat spleen-originated endothelial progenitor cells on growth of glioma in vivo an experimental study.Acad Radiol, 2011.18(7): 892-901.

[7]Syková E, Jendelová P, Herynek V, et al.MR tracking of stem cells in living recipients.Methods Mol Biol, 2009, 549(1): 197-215.

[8]Wang S, Fang J, Zhang T, et al.Magnetic resonance imaging targeting of intracranial glioma xenografts by Resovist-labeled endothelial progenitor cells.J Neurooncol, 2011, 105(1): 67-75.

[9]Roncalli JG, Tongers J, Renault MA, et al.Endothelial progenitor cells in regenerative medicine and cancer: a decade of research.Trends in Biotechnology, 2008, 26(5): 276-283.

[10]Sathornsumetee S, Rich JN.Antiangiogenic therapy in malignant glioma:promise and challenge.Curr Pharm Des, 2007, 13(35):3545-3558.

[11]Bar J, Onn A.Combined anti-proliferative and anti-angiogenic strategies for cancer.Expert Opin Pharmacother, 2008, 9(5): 710-915.