陳皮苷制劑對愛拔益加肉雞生長性能、免疫器官指數(shù)及小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

曹貴彬 易鳳珍 游金明 王自蕊 葉亞玲

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，南昌 330045)

目前，抗生素、促長素、酸化劑、重金屬及誘食劑等飼料添加劑普遍應(yīng)用于飼料行業(yè)，雖然這在一定程度上促進了畜牧業(yè)的發(fā)展，但也帶來了畜產(chǎn)品肉品質(zhì)下降、畜產(chǎn)品藥物和重金屬殘留、細(xì)菌耐藥性增強及環(huán)境污染等不良后果［1-3］。在畜禽養(yǎng)殖過程中使用的抗生素，絕大多數(shù)以母體藥物及代謝產(chǎn)物的形式通過糞尿排到土壤中［4］，這些排到土壤中的抗生素因不能有效降解而長期存留在土壤中［5］，是對生物和環(huán)境的潛在威脅。姜萍等［6］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中銅(Cu)、鋅(Zn)、鉛(Pb)、鎘(Cd)含量與豬糞中對應(yīng)元素的含量呈顯著正相關(guān)，而用該豬糞施肥的疏菜中重金屬含量也與土壤中重金屬含量呈顯著正相關(guān)。鑒于此，現(xiàn)如今的飼料企業(yè)和營養(yǎng)學(xué)家都在尋找既具有增強動物機體免疫力、抗菌和抗應(yīng)激等作用，還具有毒副作用小、畜禽體內(nèi)無殘留等特點的新型飼料添加劑［7］。其中，從陳皮中提取出來的黃酮類化合物——陳皮苷(也稱作橙皮苷)，具有促進胃腸道運動、增強消化酶活性、增強機體免疫力、抗菌抗過敏及抗氧化等作用，在國內(nèi)外已較為廣泛地運用于營養(yǎng)調(diào)控的研究中。陳皮是用蕓香科小喬木橘及其變種的成熟果實的果皮經(jīng)過干燥處理制成的，主產(chǎn)于福建、四川、江蘇、江西、浙江、湖南及廣東等地，主要成分是黃酮類化合物［8-9］以及D-檸檬烯、β-松油烯、β-月桂烯、間-傘花烯和β-蒎烯等53種揮發(fā)油，還包括鉀(K)、鈉(Na)、鈣(Ca)、鎂(Mg)、Cu、Zn、鐵(Fe)、鍶(Sr)在內(nèi)的多種微量元素［10-11］。陳皮苷便是陳皮中提取的黃酮類化合物中的一種，是橙皮素與雙糖蕓香糖形成的二氫黃酮苷類化合物［12］。研究發(fā)現(xiàn)，陳皮及陳皮苷具有調(diào)節(jié)胃腸運動、保肝、利膽、祛痰等“理氣健脾、燥濕化痰”的作用［13-15］。Pereira-Lorenzo等［16］認(rèn)為，陳皮提取物黃酮類物質(zhì)具有多種生物活性因子，具有很強的抗氧化、抗應(yīng)激的能力。雖然目前有不少研究提及陳皮及其提取物作為飼料添加劑對肉雞的作用，但有關(guān)陳皮苷在實際生產(chǎn)中的應(yīng)用卻鮮有研究。本試驗擬以陳皮苷制劑為研究對象，探討其對愛拔益加(AA)肉雞生長性能、免疫器官指數(shù)及小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，以期為陳皮苷制劑在肉雞生產(chǎn)中的合理應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用陳皮苷制劑由北京生泰爾生物科技有限公司提供，其商品名為健壯素(其中陳皮苷的有效含量為80%)。

1.2 試驗動物與飼糧

選用200羽1日齡體重相近的健康A(chǔ)A肉雞，隨機分為5個處理，每個處理4個重復(fù)，每個重復(fù)10羽。5個處理分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0(對照組)、50、100、150、200 mg/kg 陳皮苷制劑的試驗飼糧?；A(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型飼糧，按照我國《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)推薦的營養(yǎng)水平分階段配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(飼喂基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(as fed-basis) %

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)肉雞代謝室進行。所有雞只在帶有集糞盤的代謝籠(50 cm×45 cm×37 cm)內(nèi)飼養(yǎng)。在試驗開始前1周雞舍用甲醛和高錳酸鉀進行徹底熏蒸消毒，舍內(nèi)溫度、濕度和光照按常規(guī)飼養(yǎng)管理要求控制，雞只免疫按雞場常規(guī)程序執(zhí)行。整個試驗期間自由采食和飲水。試驗期為42 d。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長性能

在試驗第2、4、6周稱取試驗雞的個體重，并記錄各組試驗雞在不同生長階段的采食量，用于計算各組試驗雞的平均日增重、平均日采食量及料重比。

1.4.2 免疫器官指數(shù)

分別在試驗第2、4、6周從每個重復(fù)中隨機選取2羽試驗雞進行屠宰，摘取肝臟、脾臟、法氏囊，計算肝臟、脾臟及法氏囊指數(shù)。由于家禽后期法氏囊退化萎縮，其重量維持較平衡水平，個體之間差異不大，故本試驗沒有計算后期(第6周)法氏囊指數(shù)。

1.4.3 小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)

取十二指腸、空腸、回腸段，用10%甲醛固定液固定，常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色后制成5 μm石蠟切片，觀察絨毛形態(tài)，計算絨毛高度、隱窩深度及絨毛高度/隱窩深度(V/C)。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計

基本數(shù)據(jù)處理采用Excel 2003，試驗結(jié)果分析采用SPSS 17.0中的one-way ANOVA程序進行方差、線性和二次項分析，多重比較用Duncan氏法，結(jié)果以平均值和平均標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。

2 結(jié)果

2.1 陳皮苷制劑對AA肉雞生長性能的影響

由表2可知，飼糧中陳皮苷制劑添加水平對1～14日齡AA肉雞的平均日增重、平均日采食量以及料重比均沒有顯著影響(P＞0.05)。飼糧中陳皮苷制劑添加水平對15～28日齡AA肉雞的平均日采食量沒有顯著影響(P＞0.05)，但隨著陳皮苷制劑添加水平的增加，平均日增重、料重比分別呈線性增加和線性降低(P＜0.05)，陳皮苷制劑添加水平達200 mg/kg時AA肉雞的平均日增重為43.03 g，顯著高于對照組的40.63 g(P＜0.05)，此時AA肉雞的料重比為1.72，顯著低于對照組及50、100 mg/kg組(P ＜0.05)，但與 150 mg/kg組差異不顯著(P＞0.05)。29～42日齡平均日采食量在各組AA肉雞之間沒有顯著差異(P＞0.05)，但隨著陳皮苷制劑添加水平的增加，AA肉雞的平均日增重、料重比分別呈線性增加和線性降低(P＜0.05)。

2.2 陳皮苷制劑對AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表3可知，飼糧中陳皮苷制劑添加水平對14日齡AA肉雞的肝臟指數(shù)沒有顯著影響(P＞0.05);當(dāng)陳皮苷制劑添加水平達到200 mg/kg時，其脾臟指數(shù)達到0.089%，顯著高于對照組及100、150 mg/kg組(P ＜0.05)，但與 50 mg/kg組差異不顯著(P＞0.05);當(dāng)陳皮苷制劑添加水平達到200 mg/kg時，其法氏囊指數(shù)達到0.284%，顯著高于對照組及 50、100、150 mg/kg組(P＜0.05)。對于28日齡AA肉雞，肝臟指數(shù)以對照組最 低，僅 有 2.131%，顯 著 低 于 50、100、150 mg/kg組(P＜0.05)，但與200 mg/kg組差異不顯著(P＞0.05);在脾臟指數(shù)方面，100 mg/kg組 顯 著 高 于 對 照 組 (P ＜0.05)，50、150、200 mg/kg組相比對照組分別增加了12.5%、19.8%和16.7%(P＞0.05)。飼糧中陳皮苷制劑添加水平對42日齡AA肉雞的肝臟指數(shù)沒有顯著影響(P＞0.05)，但對照組的脾臟指數(shù)顯著低于100 mg/kg組(P ＜ 0.05)，且 50、150、200 mg/kg組脾臟指數(shù)相比對照組分別增加了21.6%、20.1%和17.2%(P＞0.05)。

2.3 陳皮苷制劑對AA肉雞小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表 4 可知，28 日齡時，100、150、200 mg/kg組AA肉雞各腸段絨毛高度相比對照組和50 mg/kg組均獲得提高，其中以150、200 mg/kg組效果較佳，與對照組和50 mg/kg組差異顯著(P＜0.05)。飼糧中陳皮苷制劑添加水平對28日齡AA肉雞的十二指腸隱窩深度沒有顯著影響(P＞0.05);對于空腸隱窩深度，各添加組均顯著小于對照組(P＜0.05)，且以100 mg/kg組為最小;對于回腸隱窩深度，100、150、200 mg/kg 組相比對照組分別減少了21.1%、21.4%和20.2%(P＜0.05)。對于十二指腸和回腸的V/C，隨著陳皮苷制劑添加水平的增加呈線性增加(P＜0.05)，當(dāng)添加水平為150、200 mg/kg時顯著高于對照組及 50 mg/kg組(P＜0.05)，此外，100 mg/kg組回腸的V/C也顯著高于對照組及50 mg/kg組(P ＜0.05)，但與 150、200 mg/kg組差異不顯著(P＞0.05);對于空腸的V/C，各添加組均顯著高于對照組(P＜0.05)，且當(dāng)陳皮苷制劑添加水平達到100 mg/kg時，其V/C達到47.59，比對照組增加了79.2%。

表2 陳皮苷制劑對AA肉雞生長性能的影響Table 2 Effects of hesperidin preparation on growth performance of AA broilers

表3 陳皮苷制劑對AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響Table 3 Effects of hesperidin preparation on immune organ indexes of AA broilers %

42日齡時，隨著陳皮苷制劑添加水平的增加，AA肉雞各腸段的絨毛高度均呈線性增加(P＜0.05)。對于十二指腸的絨毛高度，各添加組相比對照組均顯著增加(P＜0.05)，且當(dāng)陳皮苷制劑添加水平達到200 mg/kg時絨毛高度達到1 541.05 μm，比對照組高出18.3%;對于空腸的絨毛高度，100、150、200 mg/kg組顯著高于對照組(P＜0.05);對于回腸的絨毛高度，對照組最低，顯著低于150 mg/kg組(P＜0.05)，但與其他組差異不顯著(P＞0.05)。飼糧中陳皮苷制劑添加水平對42日齡AA肉雞的十二指腸隱窩深度沒有顯著影響(P＞0.05);對于空腸及回腸，對照組隱窩深度均為最大，且顯著大于100、150、200 mg/kg組(P＜0.05)，但與50 mg/kg組差異不顯著(P＞0.05)。隨著陳皮苷制劑添加水平的增加，各腸段的V/C均呈線性增加(P＜0.05)。對于十二指腸，對照組的V/C最低，較50、200 mg/kg組顯著降低(P ＜0.05);50、100、150、200 mg/kg 組的空腸V/C相比對照組分別增加了41.9%、70.2%、65.1%和76.3%(P＜0.05);對于回腸，僅150、200 mg/kg組的V/C顯著高于對照組(P＜0.05)。

表4 陳皮苷制劑對AA肉雞小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Table 4 Effects of hesperidin preparation on small intestinal mucosal morphology of AA broilers

3 討論

3.1 陳皮苷制劑對AA肉雞生長性能的影響

動物的生長依賴機體對食物的有效消化和吸收。陳皮及陳皮苷對動物的物理消化及化學(xué)消化過程均具有一定的促進作用。研究發(fā)現(xiàn)，陳皮和陳皮苷能有效增強鼠的物理消化過程，在促進鼠胃排空、減少胃殘留率和加快小腸對食物推進率方面效果非常顯著［17-18］。陳皮和陳皮苷也能顯著提高人的離體唾液淀粉酶［19］，羅非魚胃中脂肪酶、胰蛋白酶及各消化場所中淀粉酶等消化酶的活性［20］，并能有效提高豬對蛋白質(zhì)的消化率［21］和人肝細(xì)胞對葡萄糖的利用［22］。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加150、200 mg/kg陳皮苷制劑能顯著提高15～28日齡及29～42日齡AA肉雞的平均日增重和料重比，但對其平均日采食量無顯著影響，這與張耀等［23］的研究結(jié)果一致。從本試驗來看，陳皮苷制劑對AA肉雞生長的促進作用可能是由于陳皮中的揮發(fā)油刺激機體分泌胃液，促進了胃腸道的運動，也可能是由于對唾液淀粉酶分泌的促進作用提高了飼料轉(zhuǎn)化效率，從而提高了生長性能。

3.2 陳皮苷制劑對AA肉雞免疫器官指數(shù)的影響

AA肉雞是目前我國肉雞養(yǎng)殖的主打品種。與我國地方雞種相比，AA肉雞的抗應(yīng)激能力和自身免疫力明顯不足，這已成為肉雞生產(chǎn)的一個先天制約因素。在現(xiàn)代肉雞生產(chǎn)中，為了降低疾病風(fēng)險，提高養(yǎng)殖效益，往往在肉雞飼糧中添加抗生素?？股氐拈L期使用往往導(dǎo)致雞群自身免疫力進一步下降，甚至引起免疫抑制［24］。研究表明，陳皮及陳皮苷能有效增強機體特異性免疫，迅速形成對抗原的免疫應(yīng)答。金治萃等［25］在對豚鼠注射橘皮液后發(fā)現(xiàn)，豚鼠血清中溶菌酶活性和血凝抗體含量均顯著提高。陳皮苷還能有效提高大鼠的免疫力，抑制炎癥的發(fā)生［26］。機體免疫器官指數(shù)是衡量機體免疫功能的初步指標(biāo)，免疫器官的發(fā)育狀況直接反映出機體的免疫應(yīng)答水平。研究顯示，陳皮提取物及陳皮苷可有效促進肉雞中樞免疫器官的生長，一定量的陳皮苷可以提高脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，并且表現(xiàn)出一定的量效關(guān)系［27-28］。從本試驗的結(jié)果來看，飼糧中添加陳皮苷制劑對AA肉雞免疫器官的生長均有一定的促進作用，其中，100 mg/kg添加水平的效果最明顯。這種作用的產(chǎn)生可能是因為陳皮苷是從陳皮里提取出的黃酮類化合物，而黃酮類物質(zhì)對促進機體免疫器官的發(fā)育具有非常有效的作用，這在包括梁英等［29］和戴漢慧等［30］等的許多研究中均有表述，但其作用機制尚不明確，有待進一步研究。

3.3 陳皮苷制劑對AA肉雞小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

小腸作為肉雞營養(yǎng)成分吸收的主要場所，在肉雞營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，而正常小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的形成是其發(fā)揮理想吸收作用的基礎(chǔ)。肉雞小腸由十二指腸、空腸和回腸組成，腸段管壁分為黏膜層、肌層和漿膜層3層。由絨毛、微絨毛和皺襞等特殊結(jié)構(gòu)構(gòu)成的黏膜層，顯著增加了小腸吸收營養(yǎng)物質(zhì)的表面積，特別是黏膜結(jié)構(gòu)的主要組成部分——小腸絨毛，其高度、寬度是反映小腸消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)能力的特有指標(biāo)［31-32］。隱窩是腸上皮細(xì)胞分化的部位，直接反映腸上皮細(xì)胞成熟率。隱窩變淺說明細(xì)胞成熟率高，分泌功能強，反之亦然。而V/C則是腸道功能的風(fēng)向標(biāo)。當(dāng)腸道黏膜受損時，V/C下降，就會影響機體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收［33］。肉雞腸管結(jié)構(gòu)隨年齡逐漸發(fā)育成熟，其發(fā)育狀況與營養(yǎng)物質(zhì)吸收利用乃至畜禽生產(chǎn)性能都息息相關(guān)［34］。陳皮作為一味補益藥，具有改善虛癥患者的物質(zhì)代謝低下或紊亂及改善消化系統(tǒng)等藥效［35］。沈水寶等［36］研究發(fā)現(xiàn)，向仔豬飼糧中添加淀粉酶和蛋白酶能有效降低空腸中段腸絨毛的損傷，并能使十二指腸絨毛由扁平變?yōu)橹笭?，大大改善小腸黏膜結(jié)構(gòu)的完整性。張小蓮［20］在對羅非魚的試驗中也發(fā)現(xiàn)，羅非魚飼料中添加黃橙素(主要成分是陳皮苷)后，小腸的絨毛高度、肌層厚度均得到顯著提高。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)飼糧中陳皮苷制劑的添加水平為100、150、200 mg/kg時，能顯著提高28及42日齡AA肉雞小腸各段的絨毛高度，降低隱窩深度，升高V/C。而前面提到，陳皮苷有助于提高脂肪酶、胃蛋白酶、淀粉酶等消化酶的活性，由此作者推測，飼糧中添加陳皮苷制劑能提高小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，促進小腸絨毛的生長發(fā)育，增加腸道吸收營養(yǎng)物質(zhì)的有效面積，進而促進動物的生長。

4 結(jié)論

①AA肉雞飼糧中添加一定量的陳皮苷制劑可促進其小腸絨毛的生長和發(fā)育，提高其生長性能，并在一定程度上增強免疫力。

②綜合考慮生長性能、免疫器官指數(shù)及小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)指標(biāo)，AA肉雞飼糧中陳皮苷制劑的添加水平以150 mg/kg為宜。

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