裂殖壺菌粉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血清生化指標(biāo)和蛋黃二十二碳六烯酸含量的影響

陳秀麗 岳洪源 李連彬 宋 丹 曹社會(huì) 武書庚*

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌 712100;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，生物飼料開發(fā)國家工程研究中心，北京 100081)

二十二碳六烯酸(DHA，C22∶6 ω-3)是一種 ω-3系長鏈多不飽和脂肪酸(PUFA)，必須由食物攝入。DHA能促進(jìn)腦、視網(wǎng)膜形成和延緩腦的衰老，具有降血脂、預(yù)防和治療心血管疾病、抗炎等多種生理功能［1］。因此，富含DHA的食品引起了人們的廣泛關(guān)注。研究表明，蛋雞飼糧中添加 ω-3 PUFA可增加DHA在蛋黃中的沉積，如飼糧中添加3%魚油，蛋黃中二十碳五烯酸(EPA)+DHA的含量超過 180 mg/枚［2］。常用于飼料的 ω-3 PUFA源有魚油、亞麻籽、海洋藻類等，但因魚油的特殊腥味可能影響畜禽產(chǎn)品的風(fēng)味等，開發(fā)富含ω-3 PUFA的新原料作為魚油替代品已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)［3］。微藻是海洋食物鏈中的初級(jí)生產(chǎn)者，富含DHA，是 ω-3 PUFA的原始生產(chǎn)者［4］，裂殖壺菌(Schizochytrium，SL)是微藻中較為重要的DHA生產(chǎn)者，SL粉中的DHA與魚油中的DHA形式完全一致，且EPA含量較低，更易于人接受［5］。SL粉在蛋雞中的應(yīng)用較少，因此，本試驗(yàn)擬研究SL粉對(duì)商品蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血清生化指標(biāo)和蛋黃脂肪酸組成的影響，以期為生產(chǎn)實(shí)踐提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

SL粉購自廈門金達(dá)威集團(tuán)股份有限公司，DHA含量占總脂肪酸的41.36%(實(shí)測值)，SL粉中DHA含量為137.09 mg/g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)選擇29周齡體況良好、體重相近的海蘭褐商品蛋雞288只，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞。預(yù)試期1周，正試期6周。

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)和我國《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)，并結(jié)合海蘭褐蛋雞飼養(yǎng)手冊(cè)配制，設(shè)計(jì)分別添加0、1%、2%和3%SL粉的4種試驗(yàn)飼糧，并用能量、蛋白質(zhì)含量與SL粉相近的玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)補(bǔ)足。試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1，試驗(yàn)飼糧及SL粉脂肪酸組成見表2。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis) %

1.3 飼養(yǎng)管理

采用半開放式雞舍3層立體籠養(yǎng)，自然光照加人工補(bǔ)光，光照時(shí)間為16 h/d。人工飼喂粉料，每日喂料2次，自由采食和飲水，每周消毒1次，常規(guī)免疫。

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 樣品采集與制備

正試期以重復(fù)為單位，記錄每天產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重，每7天清料1次，記錄該周耗料量。計(jì)算平均日采食量、料蛋比、產(chǎn)蛋率和平均蛋重。

分別于試驗(yàn)的第 0、3、7、14、28 和 42 天，每個(gè)重復(fù)取5枚雞蛋，用于測定蛋殼強(qiáng)度、蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位和蛋殼厚度等蛋品質(zhì)指標(biāo)。

表2 試驗(yàn)飼糧及SL粉脂肪酸組成Table 2 Fatty acids composition in experimental diets and SL powder %

試驗(yàn)結(jié)束后，于次日早晨空腹采血，每組隨機(jī)抽取1只雞，翅靜脈采血5 mL，促凝管收集血液，3 500 r/min，離心30 min，制備血清，-20℃保存待測。

分別于正試期的第9、15、28和42天，每個(gè)重復(fù)取5枚雞蛋，將蛋黃充分混勻，經(jīng)過凍干機(jī)真空干燥后，-20℃保存，待分析脂肪酸含量。

1.4.2 測定指標(biāo)與方法

蛋品質(zhì):采用SONOVA蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀(Egg AnalyzerTM，Orka Technology Ltd.)測定雞蛋濃蛋白高度、哈夫單位和蛋黃顏色;蛋殼強(qiáng)度分析儀(Egg Force Reader，Orka Technology Ltd.)測定蛋殼強(qiáng)度;蛋殼厚度測定儀(Egg Shell Thickness Gauge，Orka Technology Ltd.)分析蛋殼厚度。

血清生化指標(biāo):采用北京北化康泰臨床試劑有限公司試劑盒測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量。

蛋黃脂肪酸:1)準(zhǔn)確稱取蛋黃試樣0.45～0.55 g于10 mL容量瓶中，添加正己烷并定容，振蕩使其完全溶解，取1 mL溶液于20 mL試管中，加0.5 mol/L的氫氧化鉀-甲醇(KOH-CH3OH)溶液3 mL，充分振蕩，65℃水浴15 min，加入三氟化硼(BF3)-乙醚-甲醇溶液3 mL，振蕩，65℃水浴5 min。冷卻至室溫，加飽和氯化鈉(NaCl)溶液2 mL及正己烷1 mL，離心取上清，用于氣相色譜分析。2)氣相色譜測定條件:GC-2010色譜柱(60 mm ×0.25 mm ×0.25 μm)，載氣為高純度氮?dú)?N2)，柱 流 速 3.0 mL/min，氫 氣 (H2):40 mL/min，空氣:400 mL/min。汽化室 250℃，檢測器280℃，色譜柱初始為100℃，以25℃/min升至200℃，再以4℃/min升至 230℃，保持9 min。進(jìn)樣量 1 μL。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 15.0軟件的ANOVA程序進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Polynomial程序下的Quadratic進(jìn)行線性和二次分析，用Duncan氏法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。同時(shí)采用GLM模塊分析不同添加水平下蛋黃DHA含量隨時(shí)間變化的規(guī)律，結(jié)果以平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 SL粉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表3可知，蛋雞飼糧添加SL粉對(duì)平均蛋重影響不顯著(P＞0.05)，隨飼糧SL粉添加水平增加，平均蛋重有降低的趨勢，但降低幅度較小，試驗(yàn)期內(nèi)，平均蛋重穩(wěn)定在62 g左右，料蛋比穩(wěn)定在2.3上下，均未到達(dá)顯著水平(P＞0.05);隨飼糧SL粉添加水平的提高，產(chǎn)蛋率有增高的趨勢，但未到達(dá)顯著水平(P＞0.05);飼糧SL粉添加水平對(duì)蛋雞平均日采食量有顯著影響(P＜0.05)，隨飼糧SL添加水平的提高，平均日采食量提高趨勢明顯，2%和3%SL粉組分別比對(duì)照組高6.18%和6.59%(P＜0.05)。結(jié)果提示，飼糧添加SL粉對(duì)平均蛋重、料蛋比均沒有影響，產(chǎn)蛋率有增長的趨勢，提高了蛋雞平均日采食量。

表3 SL粉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響Table 3 Effects of SL powder on performance of laying hens

2.2 SL粉對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由表4可知，飼糧添加SL粉顯著影響蛋雞血清TG含量(P＜0.05)。隨飼糧SL粉添加水平的增加，血清TC含量先降低后升高，1%和2%SL粉組分別比對(duì)照組降低了29.84%和31.72%(P＜0.05);3%SL粉組略有升高，與其他各組均差異不顯著(P＞0.05)。1%、2%和3%SL粉組血清TG含量分別比對(duì)照組降低了46.12%、34.07%和32.16%(P＜0.05)，3組之間差異不顯著(P＞0.05)。隨飼糧SL粉添加水平增加，血清LDL-C含量先降低后升高，1%和2%SL粉組血清LDL-C含量分別比對(duì)照組降低了42.91%和42.5%(P＜0.05)。結(jié)果提示，飼糧添加SL粉可降低蛋雞血清TC、TG和LDL-C含量，但SL粉添加水平為3%時(shí)，血清 TC、TG和 LDL-C含量略有升高趨勢。

表4 SL粉對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響Table 4 Effects of SL powder on serum biochemical indices of laying hens mmol/L

2.3 SL粉對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表5可知，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，飼糧添加SL粉對(duì)雞蛋蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、哈氏單位、蛋白高度的影響均不顯著(P＞0.05)。蛋黃顏色與飼糧SL粉添加水平有密切的關(guān)系，但蛋黃顏色與飼糧SL粉添加水平也不是簡單的線性關(guān)系，當(dāng)飼糧SL粉添加水平為1%時(shí)，蛋黃顏色顯著高于其他各組(P＜0.05)，比對(duì)照組提高了9.72%，其他各組與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。結(jié)果提示，蛋雞飼糧添加1%SL粉會(huì)加深蛋黃顏色，不影響其他蛋品質(zhì)指標(biāo)。

2.4 SL粉對(duì)雞蛋脂肪酸組成的影響

2.4.1 PUFA

由表6可知，蛋黃脂肪酸組成受SL粉的影響較大。與對(duì)照組相比，2%和3%SL粉組蛋黃中PUFA含量顯著升高(P＜0.05)，分別比對(duì)照組提高了18.20%和12.15%;1%SL粉組也提高了9.62%，但與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。

表5 SL粉對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響Table 5 Effects of SL powder on egg quality of laying hens

1%、2%和3%SL粉組ω-3 PUFA含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，分別比對(duì)照組提高了39.2%、85.2%和76.7%;2%和3%SL粉組又顯著高于1%SL粉組(P＜0.05);2%和3%SL粉組之間差異不顯著(P＞0.05)。其中DHA含量隨著飼糧SL粉添加水平的提高而升高，1%、2%和3%SL粉組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，分別比對(duì)照組提高了66.1%、116.5%和122.9%;2%和3%SL粉組顯著高于1%SL粉組(P＜0.05)，2%和3%SL粉組之間差異不顯著(P＞0.05)。蛋黃中EPA含量雖有所提高，但因原料中EPA含量有限，使其在蛋黃中所占總量有限。

1%、2%和3%SL粉組ω-6 PUFA含量分別比對(duì)照組提高了6.4%、11.1%和5.2%，2%SL粉組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，其余各組之間差異不顯著(P＞0.05)。其中2%和3%SL粉組蛋黃中亞油酸(C18∶2 ω-6)含量顯著升高(P ＜0.05)，分別比對(duì)照組高了12.64%和9.15%，但2組之間差異不顯著(P＞0.05);1%SL粉組也提高了7.97%，但與其他各組均差異不顯著(P＞0.05)。因原料中C18∶3 ω-6含量有限，使其在蛋黃中所占總量有限。隨著飼糧SL粉添加水平的提高，花生四烯酸(C20∶4 ω-6)含量均有所降低，其中 3%SL粉組比對(duì)照組降低了23.92%(P＜0.05)。

雖然ω-3 PUFA和ω-6 PUFA含量均因飼糧SL粉添加水平升高而升高，但因SL粉中ω-3 PUFA(尤其是DHA)含量更豐富，仍顯著降低了 ω-6/ω-3(P ＜0.05)。1%、2% 和 3%SL粉組ω-6/ω-3分別比對(duì)照組顯著降低了23.9%、40.2%和39.8%，2%和3%SL粉組顯著低于1%SL粉組(P＜0.05)，2組之間差異不顯著(P＞0.05)。

2.4.2 單不飽和脂肪酸(MUFA)和飽和脂肪酸(SFA)

由表6可知，與PUFA在蛋黃中的含量相反，MUFA含量隨飼糧SL粉添加水平增加明顯降低，其中2%SL粉組顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。飼糧添加SL粉對(duì)SFA含量的影響有限。計(jì)算MUFA+PUFA的含量可以得出，各組(0、1%、2%和3%SL粉組分別為64.22%、64.02%、63.67%和64.85%)基本一致，這提示我們，PUFA含量的增加是因?yàn)镸UFA含量減少導(dǎo)致。MUFA中，因?yàn)镃18∶1 ω-9含量較高，所以降低明顯，尤其是2%SL粉組，顯著低于對(duì)照組和3%SL粉組(P＜0.05);C16∶1 ω-7 含 量 的 變 化 沒 有 規(guī) 律;C20∶1 ω-9含量比較保守，未因飼糧改變而變化。

結(jié)果提示，飼糧添加SL粉能線性增加蛋黃中PUFA含量，但SL粉添加水平超過2%時(shí)，蛋黃中PUFA含量不會(huì)繼續(xù)增加;PUFA含量的增加是因?yàn)镸UFA含量減少導(dǎo)致。

2.5 雞蛋DHA富集規(guī)律

由表7可知，隨飼糧SL粉添加水平的增加，蛋黃DHA含量有不同程度的提高。在第9、15和28天時(shí)，SL粉組蛋黃DHA含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，隨飼糧SL粉添加水平的提高，蛋黃DHA含量顯著升高(P＜0.05)。在第42天時(shí)，1%、2%和3%SL粉組蛋黃DHA含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);2%和3%SL粉組蛋黃DHA含量差異不顯著(P＞0.05)，顯著高于1%SL粉組(P＜0.05)。第15天后蛋黃DHA含量基本達(dá)到穩(wěn)定，延長試驗(yàn)期蛋黃DHA含量變化不大。

結(jié)果提示，DHA在雞蛋中富集率呈線性下降，方程為y=-11.61x+58.13，1%SL粉組DHA富集率最高，為18.34%，2%SL粉組為16.44%，3%SL粉組為15.03%。

表6 SL粉對(duì)蛋黃脂肪酸組成的影響Table 6 Effects of SL powder on fatty acid composition of egg yolk %

表7 SL粉對(duì)蛋黃DHA含量的影響Table 7 Effects of SL powder on DHA content of egg yolk mg

3 討論

3.1 SL粉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加SL粉對(duì)料蛋比、產(chǎn)蛋率和平均蛋重的影響不顯著。Hargis等［2］在飼糧中添加魚油或全脂亞麻籽，結(jié)果顯示魚油或全脂亞麻籽對(duì)料蛋比、產(chǎn)蛋率和平均蛋重?zé)o明顯影響，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。但本試驗(yàn)中隨著飼糧SL粉添加水平的增高，平均蛋重呈現(xiàn)下降趨勢，未達(dá)到顯著水平。原因是飼喂蛋雞富含ω-3 PUFA的飼糧，可增加機(jī)體ω-3 PUFA含量，抑制ω-6 PUFA的吸收，而后者的不足可導(dǎo)致脂質(zhì)向卵巢轉(zhuǎn)運(yùn)速度減慢，脂蛋白合成降低，血漿雌二醇水平降低，從而抑制卵泡發(fā)育，降低蛋重［6］。飼糧中添加25%整粒亞麻籽、1%亞麻油和1%魚油能顯著提高蛋雞采食量［7］;飼糧中添加5%微藻粉粕肉雞采食量也顯著增加［8］，這都與本研究結(jié)果相似，原因可能是冬天氣溫低，蛋雞維持需要的能量較高，導(dǎo)致蛋雞提高采食量來維持自身代謝。研究表明，隨著飼糧中魚油用量提高，鴨蛋蛋黃顏色加深［9］。本試驗(yàn)飼糧添加SL粉同樣能增加雞蛋蛋黃顏色，與1%SL粉組相比，對(duì)照組和2%、3%SL粉組的蛋黃顏色有不同程度的降低，分析其原因可能為飼糧SL粉中PUFA氧化，而增加了機(jī)體抗氧化功能的脂溶性色素如β-胡蘿卜素和葉黃素的消耗，導(dǎo)致蛋黃顏色的變淺。1%SL粉組蛋黃顏色最深，原因是SL粉中含有類胡蘿卜素、角黃素，其中β-胡蘿卜素是一種強(qiáng)抗氧化劑和著色劑，它可以顯著增加蛋黃顏色［10］，同時(shí)也可抑制PUFA氧化。由此可見，飼糧SL粉添加水平不宜大于2%。

3.2 SL粉對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

膽固醇在體內(nèi)有著廣泛的生理作用，過量會(huì)導(dǎo)致高膽固醇血癥，其中，低密度脂蛋白是導(dǎo)致心腦血管疾病的元兇，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不利影響，TG過高直接體現(xiàn)在動(dòng)脈粥樣硬化上。大量研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加ω-3 PUFA能明顯改變蛋雞血清中脂類物質(zhì)的含量。ω-3 PUFA和ω-6 PUFA都能顯著降低血清TC和TG含量，同時(shí)ω-3 PUFA還能降低蛋黃TC和TG含量［7］。有研究表明，在蛋雞飼糧中添加不同比例的魚油和菜油，各組能顯著降低血清中 TC、TG和 LDL-C的含量［11］，這與本試驗(yàn)結(jié)果類似。因?yàn)棣?3 PUFA抑制肝臟中編碼脂肪合成酶和糖酵解酶的基因轉(zhuǎn)錄，從而抑制了肝臟中脂類物質(zhì)的合成，提高HDL-C的含量，從而降低組織中膽固醇的沉積，加快膽固醇從體內(nèi)的排泄［12］;ω-3 PUFA通過影響低密度脂蛋白的合成與分解速度，改變脂蛋白的脂肪酸組成，增加其流動(dòng)性，同時(shí)抑制肝臟中脂肪酸和TG的形成，進(jìn)而降低了血清TG含量［13］。本試驗(yàn)表明，蛋雞飼糧中添加SL粉也可降低血清TC、TG和LDL-C含量，其中1%SL粉組血清中TC、TG和LDL-C含量最低。

3.3 SL粉對(duì)雞蛋脂肪酸組成的影響

蛋黃中脂肪酸組成反映原料的脂肪酸組成，雞蛋中85%或78%的DHA和EPA來自于它們?cè)陲暭Z中相應(yīng)的含量［14］。本試驗(yàn)表明，隨著飼糧SL粉添加水平的提高，ω-3 PUFA含量升高，其中DHA和EPA均有不同程度提高，這與鄧興照等［7］的報(bào)道一致。用海藻飼喂蛋雞，可顯著增加蛋黃中ω-3 PUFA含量，并伴隨著ω-6 PUFA含量的下降，本試驗(yàn)中ω-6 PUFA含量反而呈現(xiàn)上升趨勢，原因可能是蛋雞品種、飼喂海藻不同及飼喂方式有區(qū)別。飼糧中添加ω-3 PUFA原料能競爭抑制花生四烯酸在雞蛋中的沉積，提高雞蛋中ω-3 PUFA含量，降低 ω-6/ω-3［15］，本試驗(yàn)也得出了類似結(jié)果，隨著飼糧SL粉添加水平的增加，雞蛋中ω-6/ω-3下降，顯著增加了雞蛋的營養(yǎng)價(jià)值。

3.4 SL粉中DHA在雞蛋中的富集規(guī)律

改變飼糧脂肪酸組成和含量將會(huì)改變雞蛋中脂肪酸的組成。本試驗(yàn)中1%、2%和3%SL粉組中蛋黃DHA含量并不是成倍數(shù)增長。蛋雞飼糧中添加2.4%和4.8%SL粉，雞蛋中ω-3 PUFA含量分別為9.5和11.5 mg/g，最高沉積量在4.8%SL粉組，4.8%SL粉組 ω-3 PUFA含量并不是2.4%SL粉組的2倍［6］，這與本試驗(yàn)結(jié)果相似。本試驗(yàn)表明，蛋黃中DHA含量隨著飼糧SL粉添加時(shí)間的延長均有不同程度提高，這與Milinsk等［16］的報(bào)道一致。添加SL粉第15天時(shí)，DHA可快速沉積到蛋黃中，并在蛋黃中沉積量達(dá)到穩(wěn)定。2%SL粉組表現(xiàn)出較好的沉積效果，隨著添加時(shí)間的延長，其上升幅度趨緩。第42天時(shí)，當(dāng)飼糧SL粉添加水平超過2%時(shí)，繼續(xù)增加飼糧SL粉添加水平蛋黃中DHA含量也不會(huì)繼續(xù)增加，表明DHA并不會(huì)在蛋雞中無限富集，DHA在蛋黃中的沉積有一定的劑量效應(yīng)，添加水平過高反而會(huì)抑制其在蛋黃中的沉積，SL粉添加水平越高其沉積效率也越低。

4 結(jié)論

①飼糧添加SL粉對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率、料蛋比和平均蛋重的影響不顯著，可增加蛋雞采食量;飼糧添加SL粉對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響不顯著，可降低血清TC、TG和LDL-C含量。

②飼糧添加SL粉會(huì)增加蛋中ω-3 PUFA和DHA 含量，降低 ω-6/ω-3。

③ 飼糧SL粉添加水平超過2%時(shí)，蛋黃中DHA含量不會(huì)繼續(xù)增加。DHA在雞蛋中富集15 d即可飽和。

④綜上所述，本試驗(yàn)條件下在蛋雞飼糧中添加2%SL粉可有效促進(jìn)DHA在蛋黃中沉積，并且對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)無不良影響。

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