維生素B2對(duì)5～16周齡五龍鵝生長性能、血清激素含量和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

王寶維 王 鑫 葛文華 張名愛 岳 斌張雪君 徐晨晨

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所，青島 266109;2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，青島 266109)

維生素B2通過參與構(gòu)成各種黃酶的輔基，在生物氧化過程中作為遞氫體，與糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝密切相關(guān)，具有提高飼料利用率、促進(jìn)家禽生長發(fā)育的作用［1-2］。Baker等［3］研究表明，維生素B2能促進(jìn)雛雞生長。阮棟等［4］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加3.0 mg/kg維生素B2能夠顯著提高43～63日齡黃羽肉雞的平均日增重(ADG)，說明飼糧中添加維生素B2可顯著提高肉雞的生長性能。Olkowski等［5］研究表明，1～21日齡肉仔雞飼糧中添加維生素B2能夠提高ADG。楊煥民等［6］研究表明，1日齡大鼠低溫下補(bǔ)充適量維生素B2有利于生長激素(GH)和胰島素(INS)的分泌，從而促進(jìn)大鼠生長。McDowell［7］研究表明，動(dòng)物缺乏維生素B2時(shí)的普遍癥狀是生長性能降低，飼料轉(zhuǎn)化效率低，同時(shí)，維生素B2還具有維護(hù)腸道黏膜和皮膚完整性的功能。Olkowski等［8］研究表明，維生素B2能促進(jìn)肉雞腸道組織發(fā)育，提高腸道吸收能力。近年來，關(guān)于維生素B2對(duì)家禽營養(yǎng)的研究主要集中在肉雞、肉鴨方面，在鵝方面的研究幾乎處于空白。Chung等［9］研究表明，維生素B2的生物利用率只有59.1%，玉米-豆餅型飼糧中維生素 B2含量低于 2.75 mg/kg。而 NRC(1994)［10］制訂的4～8周齡鵝維生素B2需求量為2.5 mg/kg，如果考慮維生素B2的生物利用率，這一標(biāo)準(zhǔn)已不能滿足鵝正常生長的需要，更不適應(yīng)快速育肥的營養(yǎng)需要。因此，本試驗(yàn)通過研究飼糧中維生素B2添加水平對(duì)5～16周齡五龍鵝生長性能、血清激素含量和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響，以確定5～16周齡五龍鵝維生素B2的需要量，旨在為鵝生產(chǎn)實(shí)踐和飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用維生素B2購自廣濟(jì)藥業(yè)(孟州)有限公司，其有效成分為80%。試驗(yàn)鵝由國家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系育種基地萊陽天森豁眼鵝繁育中心提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用29日齡體重相近、健康的五龍鵝360只。采用隨機(jī)分配編號(hào)法，分為6個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只(公母各占1/2)。Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧(維生素B2含量為2.47 mg/kg)，Ⅱ～Ⅵ組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mg/kg 維生素B2的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期為12周。

1.3 基礎(chǔ)飼糧

基礎(chǔ)飼糧的營養(yǎng)水平參照NRC(1994)家禽營養(yǎng)需要量設(shè)計(jì)，其組成及營養(yǎng)水平見表1。采用高效液相色譜法［11］測(cè)得基礎(chǔ)飼糧中維生素B2含量為2.47 mg/kg。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)前對(duì)鵝舍進(jìn)行全面消毒;全期采取舍飼，采用地面分欄平養(yǎng)方式。試驗(yàn)鵝自由采食及飲水，少添勤飼，注意觀察鵝群的生長狀況。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長性能

16周齡末，分別以重復(fù)為單位對(duì)全部試驗(yàn)鵝進(jìn)行空腹稱重，計(jì)算5～16周齡的ADG;每日統(tǒng)計(jì)飼料消耗量，計(jì)算平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。每天記錄各組死亡及淘汰情況，計(jì)算死淘率。

1.5.2 血清激素含量

16周齡末稱重后，各重復(fù)隨機(jī)選擇2只鵝，共72只，每只翅靜脈采血10 mL，3 000 r/min離心制得血清樣品。血清GH、游離三碘甲腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、INS含量均由北京北方生物技術(shù)研究所采用放射免疫分析法測(cè)定。

1.5.3 腸道切片的制作與觀察

16周齡末稱重后，各重復(fù)隨機(jī)選擇2只鵝，共72只，分別取屠宰后鵝回腸相同部位約1 cm，用0.9%的生理鹽水洗凈后放入10%的甲醛固定液中固定，置于4℃冰箱中保存，用于制作組織切片。將固定好的回腸組織經(jīng)修理去除脂肪等雜質(zhì)后用乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋進(jìn)行切片，最后用蘇木精-伊紅(HE)染色，在奧林巴斯顯微鏡下觀察、照相并用顯微測(cè)微尺測(cè)量各指標(biāo)。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0軟件中單因素方差分析(oneway ANOVA)中的LSD法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。用不相關(guān)比較法(orthogonal)分析各指標(biāo)隨飼糧中維生素B2添加水平增加的線性或曲線方程，采用曲線擬合法確定5～16周齡鵝飼糧中維生素B2的適宜添加水平，并進(jìn)行生長性能、激素與腸道組織間的相關(guān)性分析。P＜0.05和P＜0.01分別為差異顯著和極顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝生長性能的影響

由表2可知，5～16周齡，末重、ADG隨著飼糧維生素B2添加水平的增加先升高后降低，其中Ⅱ、Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)。F/G隨著飼糧維生素B2添加水平的增加先降低后升高，其中Ⅱ～Ⅵ組 F/G均顯著低于Ⅰ組(P＜0.05)。ADFI、死淘率各組間差異不顯著(P＞0.05)。

表2 飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝生長性能的影響Table 2 Effects of dietary vitamin B2supplemental level on growth performance of Wulong geese

以上結(jié)果表明，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組5～16周齡鵝ADG、F/G均無顯著差異，表明飼糧維生素B2添加水平超過10 mg/kg時(shí)對(duì)ADG、F/G均無顯著影響。因此，以Ⅰ～Ⅲ組ADG(Y1)和F/G(Y2)分別與飼糧維生素B2添加水平(X)進(jìn)行二次曲線擬合，建立回歸方程如下:

由上述曲線回歸方程得出:飼糧維生素B2添加水平為5.69 mg/kg時(shí)ADG最大，飼糧維生素B2添加水平為5.64 mg/kg時(shí)F/G最低;飼糧維生素B2添加水平超過10 mg/kg時(shí)末重和ADG降低，F(xiàn)/G提高。從綜合效益角度分析，建議最佳生長性能飼糧中維生素B2添加水平為5.64～5.69 mg/kg。

2.2 飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝血清激素含量的影響

由表3可知，5 ～16 周齡，血清 GH、FT3、FT4、INS含量整體呈先增加后降低的趨勢(shì)，其中Ⅲ組最高，稍高于Ⅴ組，但差異不顯著(P＞0.05)。Ⅲ組血清 GH、FT3、FT4、INS含量均顯著高于 I組(P＜0.05)，Ⅴ組與Ⅵ組之間差異不顯著(P＞0.05)。

以上結(jié)果表明，飼糧添加5.0 mg/kg維生素B2能提高顯著五龍鵝血清 GH、FT3、FT4、INS 含量，飼糧維生素B2添加水平超過10 mg/kg時(shí)，血清 GH、FT3、FT4、INS 含量開始逐漸下降。

表3 飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝血清激素含量的影響Table 3 Effects of dietary vitamin B2supplemental level on serum hormone content of Wulong geese

2.3 飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

由表4可知，16周齡時(shí)，飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝腸道絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度(V/C)有顯著影響(P＜0.05)。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組腸道絨毛高度顯著或極顯著高于Ⅰ組(P＜0.05或P＜0.01)，維生素 B2添加水平為5.0 mg/kg時(shí)，腸道絨毛高度最高，隱窩深度最淺，V/C最高。Ⅱ～Ⅵ組隱窩深度顯著或極顯著低于對(duì)照組(P＜0.05或P＜0.01);Ⅲ組V/C顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)。腸壁厚度各組間無顯著差異(P＞0.05)。

以上結(jié)果表明，16周齡時(shí)，在飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝腸道絨毛高度、隱窩深度、V/C有顯著影響。飼糧添加5.0 mg/kg維生素B2能顯著提高絨毛高度和V/C，降低隱窩深度。飼糧維生素B2添加水平超過10 mg/kg時(shí)，腸道絨毛高度、腸壁厚度和V/C開始逐漸降低，隱窩深度開始逐漸提高。

表4 維生素B2對(duì)五龍鵝腸道組織結(jié)構(gòu)的影響Table 4 Effects of dietary vitamin B2supplemental level on intestinal tissue structure of Wulong geese

2.4 回腸絨毛組織學(xué)切片

由圖1可見，16周齡時(shí)，Ⅱ～Ⅵ組回腸絨毛高度高于Ⅰ組，Ⅱ、Ⅲ組五龍鵝的回腸絨毛高度最高，隱窩最淺。Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組回腸絨毛高度較Ⅲ組低，隱窩深度較Ⅲ組深，且Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組之間差異不明顯。

以上結(jié)果表明，飼糧中添加2.5～5.0 mg/kg維生素B2對(duì)五龍鵝的回腸發(fā)育有直接影響。

2.5 生長性能與血清激素含量和腸道組織結(jié)構(gòu)的相關(guān)性

2.5.1 生長性能與血清激素含量的相關(guān)性

由表5可知，5～16周齡時(shí)，ADG與FT4含量呈顯著正相關(guān)(P ＜0.05)，F(xiàn)/G 與 GH、FT3、FT4和INS含量呈顯著或極顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05或P＜0.01)。其他各項(xiàng)指標(biāo)之間相關(guān)性不顯著(P＞0.05)。

以上結(jié)果表明，ADG與FT4含量有顯著相關(guān)性，F(xiàn)/G 與 GH、FT3、FT4和 INS含量有顯著相關(guān)性。

圖1 回腸組織結(jié)構(gòu)Fig.1 Ileum tissue structure(100×)

2.5.2 生長性能與腸道組織結(jié)構(gòu)的相關(guān)性

由表6可知，5～16周齡時(shí)，ADG與絨毛高度呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，F(xiàn)/G與絨毛高度、隱窩深度呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。其他各項(xiàng)指標(biāo)之間相關(guān)性不顯著(P＞0.05)。

以上結(jié)果表明，ADG與絨毛高度有顯著相關(guān)性，F(xiàn)/G與絨毛高度、隱窩深度有顯著相關(guān)性。

3 討論

3.1 飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝生長性能的影響

生長性能是研究動(dòng)物營養(yǎng)需要量的重要指標(biāo)之一。維生素B2在動(dòng)物體內(nèi)存在形式有3種:游離的核黃素、黃素單核苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)，在生物氧化過程中作為各種酶類的重要組成，促進(jìn)碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪的合成代謝。據(jù)前人研究，維生素B2對(duì)肉雞生長性能有影響［12-13］。王丹莉［14］在玉米 -豆粕型基礎(chǔ)飼糧中添加不同水平維生素B2顯著增加了肉仔雞ADG，但對(duì)F/G無顯著影響。唐淑珍［15］研究表明，維生素B2顯著提高7～28日齡肉仔雞ADG?；羲歼h(yuǎn)［16］研究表明，蛋鴨飼糧中添加10 mg/kg維生素B2顯著影響了ADG、F/G，但對(duì)ADFI影響不顯著。唐靜［17］研究表明，飼糧維生素 B2水平對(duì)1～21日齡北京鴨 ADG、ADFI和F/G有顯著影響。蘆燕［18］研究表明，飼糧維生素B2水平對(duì)蛋鴨ADFI沒有顯著影響，但極顯著影響體重、ADG和F/G。王艷輝［19］研究表明，飼糧維生素B2水平的升高對(duì)ADFI的影響不顯著，添加10 mg維生素B2顯著提高了蛋雛鴨的ADG和F/G。本研究結(jié)果表明，玉米-豆粕型飼糧中維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝體重、ADG、F/G有顯著影響，上述研究結(jié)果一致。

表5 生長性能與血清激素含量的相關(guān)性Table 5 Correlation between growth performance and serum hormone contents

本試驗(yàn)中，飼喂玉米-豆粕型飼糧(維生素B2含量為2.47 mg/kg)的對(duì)照組試驗(yàn)鵝表現(xiàn)為生長緩慢、相關(guān)激素分泌量低、腸道組織發(fā)育差，但沒有出現(xiàn)維生素B2缺乏癥和死亡率高的現(xiàn)象，說明基礎(chǔ)飼糧中2.47 mg/kg的維生素B2能滿足鵝維持生命的最低要求，但卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到高效和優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)的要求。為此，在采用其他類型飼料配方時(shí)，由于飼糧維生素B2水平低，更要注意調(diào)整維生素B2的添加水平。

表6 生長性能與腸道組織結(jié)構(gòu)的相關(guān)性Table 6 Correlation between growth performance and intestinal tissue structure

3.2 飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝血清激素含量的影響

GH能促進(jìn)脂肪分解，使組織脂肪含量減少。FT3和FT4能夠促進(jìn)脂肪酸合成和膽固醇分解。INS能夠促進(jìn)脂肪細(xì)胞膜對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)和脂肪酸的合成［20］。維生素B2在機(jī)體中主要以游離的核黃素、FMN和FAD形式存在，而FMN和FAD是脂肪代謝中必不可少的復(fù)合體，維生素B2能為上述激素在調(diào)節(jié)脂肪代謝時(shí)，提供傳遞電子能力的復(fù)合體。

王艷輝［19］研究表明，維生素B2對(duì)蛋雛鴨三碘甲狀原氨酸(T3)和GH的含量有顯著影響。霍思遠(yuǎn)［16］研究表明，在添加不同水平維生素B2條件下，蛋鴨的血清GH和INS含量顯著高于對(duì)照組。蘆燕［18］研究表明，維生素B2對(duì)蛋鴨FT3和FT4含量有顯著影響，對(duì)GH、INS含量均有極顯著影響。唐靜等［21］研究表明，基礎(chǔ)飼糧中添加維生素B2能顯著提高肉鴨血清FT3、GH含量。孟銘倫等［22］研究表明，補(bǔ)充維生素B2不僅可使大鼠血清FT4含量升高，而且有可能提高甲狀腺素對(duì)某些黃素酶的誘導(dǎo)作用，并縮短FT4含量恢復(fù)到正常水平的時(shí)間。康世良［23］研究表明，維生素B2還參與GH和INS等激素的合成。INS含量與體脂、腹脂的合成有一定關(guān)系，INS是家禽促進(jìn)生長，調(diào)節(jié)脂肪代謝較重要的激素［24］。脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰輔酶A酸化酶(ACC)活性受INS的調(diào)節(jié)［25］，表明INS與脂肪代謝有直接關(guān)系。本試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照組生長性能各項(xiàng)指標(biāo)都與試驗(yàn)組有顯著差別，相應(yīng)的各組INS含量差別較大，維生素B2對(duì)機(jī)體INS分泌有明顯調(diào)控作用。添加維生素B2對(duì)血清中 GH、FT3、FT4、INS 含量有顯著影響，表明添加維生素B2能夠促進(jìn)激素的分泌，從而促進(jìn)鵝機(jī)體物質(zhì)代謝和生長發(fā)育，其有關(guān)調(diào)控機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

3.3 飼糧維生素B2添加水平對(duì)五龍鵝腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

飼糧中的維生素B2大多以FAD和FMN的形式存在，廣泛參與機(jī)體的生理生化反應(yīng)，發(fā)揮代謝調(diào)節(jié)作用，從而維護(hù)組織、器官、細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的完整，保證各項(xiàng)生命活動(dòng)的正常進(jìn)行。維生素B2在腸道近端以游離形式被吸收，進(jìn)入小腸黏膜細(xì)胞后再次被磷酸酸化，生成FMN。當(dāng)維生素B2缺乏時(shí)，引起各種黏膜炎癥。Williams等［26］研究表明，雛雞采食缺乏維生素B2飼糧大約1周后，繼生長緩慢之后發(fā)生腹瀉，而腹瀉是微生物入侵造成腸炎導(dǎo)致黏膜受損的表現(xiàn)。Stefan等［27］研究表明，維生素B2對(duì)近端結(jié)腸癌癥有抑制作用。Gianguido等［28］研究表明，維生素 B2對(duì)腸道組織有顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，16周齡時(shí)，在飼糧中添加維生素B2對(duì)5～16周齡五龍鵝腸道絨毛高度、隱窩深度、V/C有顯著影響。腸道絨毛的長短與腸管的吸收面積有直接關(guān)系，即腸道絨毛越長，吸收面積越大，本試驗(yàn)結(jié)果表明，維生素B2對(duì)腸道發(fā)育和吸收有促進(jìn)作用。另外，王俐［29］研究表明，腸壁變薄也不能說明營養(yǎng)物質(zhì)吸收作用加強(qiáng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，腸壁厚度各組間無顯著差異，與王俐［29］研究結(jié)果一致。鵝腸道細(xì)菌合成的維生素B2不能滿足機(jī)體需要，需要從飼糧中獲得，但添加維生素B2促進(jìn)鵝腸道組織的途徑和分子機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

3.4 生長性能與血清激素含量和腸道組織結(jié)構(gòu)的相關(guān)性

維生素B2促進(jìn)動(dòng)物體生長發(fā)育過程中，激素調(diào)節(jié)起著重要的作用。目前，關(guān)于維生素B2對(duì)生長性能與血清激素含量、腸道組織結(jié)構(gòu)相關(guān)性的研究還處于空白。本試驗(yàn)表明，5～16周齡五龍鵝的ADG與FT3含量及F/G與血清激素含量有顯著相關(guān)性，表明飼糧中維生素B2能促進(jìn)機(jī)體促生長類激素的分泌、激素再調(diào)節(jié)和機(jī)體生長發(fā)育。

維生素B2在體內(nèi)消化吸收分解都是在腸道內(nèi)，小腸黏膜細(xì)胞的發(fā)育情況直接影響到維生素B2吸收和利用。Subramanian等［30］研究表明，維生素B2能在人腸道上皮細(xì)胞的細(xì)胞表面表達(dá)。Lu等［31］研究表明，ADG和空腸、回腸的隱窩深度成正比。本試驗(yàn)結(jié)果表明，5～16周齡五龍鵝的ADG與腸道絨毛高度呈正相關(guān);F/G與腸道絨毛高度、隱窩深度有顯著相關(guān)性。機(jī)體可以通過采食飼料獲得維生素B2，滿足自身對(duì)維生素B2的需求。當(dāng)維生素B2的攝取量適宜時(shí)，維生素B2能到達(dá)腸道，促進(jìn)腸道發(fā)育，使腸道吸收面積加大，從而有利于機(jī)體吸收各種營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)機(jī)體營養(yǎng)代謝和生長發(fā)育，所以生長性能與腸道組織之間存在著相關(guān)性。本試驗(yàn)結(jié)論與Lu等［31］研究結(jié)果相一致。

3.5 5～15周齡五龍鵝對(duì)維生素 B2的營養(yǎng)需要量

營養(yǎng)需要也稱營養(yǎng)需要量，是指動(dòng)物在最適宜環(huán)境條件下，正常、健康生長或達(dá)到理想生產(chǎn)成績(jī)對(duì)各種營養(yǎng)物質(zhì)種類和數(shù)量的最低要求。過量添加會(huì)對(duì)動(dòng)物生長發(fā)育、生理生化指標(biāo)和生產(chǎn)成本等產(chǎn)生不良影響。NRC(1994)制訂的4～8周鵝維生素B2需求量為2.5 mg/kg，生產(chǎn)中采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧中維生素B2含量基本達(dá)到了NRC(1994)要求，然而實(shí)踐表明，隨著鵝品種的改良和飼養(yǎng)環(huán)境的改善，鵝生長發(fā)育加快，所需營養(yǎng)逐漸增加，NRC(1994)標(biāo)準(zhǔn)不能滿足快速和優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)的營養(yǎng)需要。本試驗(yàn)中有效評(píng)定維生素B2營養(yǎng)需要量的敏感指標(biāo)為生長性能、血清激素含量和腸道組織結(jié)構(gòu)。肉鵝實(shí)際養(yǎng)殖中多以ADG和F/G為主要參考依據(jù)，因此，本試驗(yàn)以ADG和F/G為主要衡量指標(biāo)，通過二次曲線擬合確定最佳ADG和F/G下，5～15周齡五龍鵝玉米-豆粕型飼糧中維生素B2添加水平為5.64～5.69 mg/kg。

4 結(jié)論

①飼糧添加5.0 mg/kg維生素B2五龍鵝的體重、ADG、F/G 和血清 GH、FT3、FT4、INS 含量及腸道絨毛高度、隱窩深度和V/C均有顯著影響。

② 建議5～16周齡五龍鵝玉米-豆粕型飼糧中維生素B2添加水平為5.64～5.69 mg/kg，飼糧維生素B2添加水平超過10 mg/kg無生物學(xué)意義。

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