p53和nm23在結(jié)直腸癌中的表達及臨床意義

崔娟娟 陸慶革 王愛磊

（河北聯(lián)合大學附屬唐山市中醫(yī)醫(yī)院 河北唐山 064200）

結(jié)直腸癌（Colorectal carcinoma CRC）是常見的消化道惡性腫瘤之一，對CRC病情進行正確評估進而指導臨床治療從而提高患者的預后有重要的臨床意義。結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展經(jīng)過研究被認為是多基因、多因素共同作用的結(jié)果，其過程復雜。目前認為結(jié)直腸癌生存和預后的主要調(diào)控因素是腫瘤的生長分化及侵襲轉(zhuǎn)移。p53作為一種重要的抑癌基因，其缺失與突變是導致多種腫瘤發(fā)生的原因；nm23是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，表達水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關。本研究中研究CRC p53、nm23蛋白在不同臨床病理學參數(shù)中的表達特點及相互關系，來判斷腫瘤惡性程度，進行預后評估并用于指導進一步治療。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2007年12月至2013年11月于我院肛腸科行手術并且臨床資料完整的196例結(jié)直腸癌病例，所有患者術前均未進行過任何形式抗腫瘤治療。年齡最大81歲，最小34歲，平均（60.62±8.14）歲，中位年齡61歲；女124例，男72例；低分化62例，中分化78例，高分化56例；腺癌182例，黏液腺癌14例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移81例，無淋巴轉(zhuǎn)移115例。

1.2 方法 標本以10%甲醛固定、取材、石蠟包埋，連續(xù)4um厚度切片，采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白－過氧化物酶連結(jié)（Streptavidin－peroxi－dase SP）法，試劑購買于福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，Ⅰ抗為鼠抗人單克隆抗體，采用SP超敏免疫組化試劑盒，嚴格按照說明書操作。石蠟切片，常規(guī)脫蠟水化，微波高壓酶行抗原修復，DBA顯色，復染、脫水、透明、封片。在顯微鏡下觀察，已知陽性片做陽性對照，磷酸鹽緩沖液代替行陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 遵循雙盲原則，兩名病理科副主任醫(yī)師閱片，每例選取2張切片進行觀察。p53陽性定位于腫瘤細胞核，呈棕黃色顆粒狀。nm23陽性定位于腫瘤細胞膜或細胞質(zhì)，呈棕色。隨機選取10個高倍視野，每個高倍視野計數(shù)100個腫瘤細胞，取表達的細胞數(shù)的平均值為陽性數(shù)。陽性細胞數(shù)所占比例＜5%為（－）；6%～10%為（＋－）；11%～25%為（＋）；26%～50%為（＋＋）；51%～75%為（＋＋＋）；＞76%為（＋＋＋＋）。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0軟件包對計數(shù)資料采用χ2檢驗分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義；分類變量關聯(lián)性分析采用Spearman等級相關檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 p53及nm23的表達情況 見表1、表2。

2.2 p53和nm23表達的相關性其spearman相關系數(shù)r＝－0.314，P＝0.000，二者表達指數(shù)呈現(xiàn)負相關。

表1 結(jié)直腸癌中p53蛋白表達與臨床病理參數(shù)的關系

表2 結(jié)直腸癌nm23蛋白表達與臨床病理參數(shù)的關系

3 討 論

結(jié)直腸癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，研究出具有較高準確性的檢測方法及指標來早期發(fā)現(xiàn)、科學評估腫瘤狀況、合理有效干預治療，達到減少腫瘤發(fā)生率、降低死亡率、延長生存時間、提高生活質(zhì)量，是醫(yī)學科學工作者們的努力目標。

p53基因是人體的抑癌基因之一，p53蛋白主要集中于核仁區(qū)。通過免疫組化方法檢測的是突變型p53蛋白的表達情況，即表明p53基因發(fā)生突變［1］。本研究中，p53的陽性表達者為152例，陽性率為76.0%，表達情況與性別、年齡、腫瘤部位無關；與腫瘤分化程度之間的差異性有統(tǒng)計學意義，分化程度越高p53蛋白表達的強度越低；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的差異性有統(tǒng)計學意義，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的p53的表達強度要高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。有文獻報道稱p53在直腸癌中的過表達率明顯高于結(jié)腸癌，這可能與致癌物質(zhì)在遠端腸管濃度增大、接觸時間長有關，使腸黏膜中p53發(fā)生突變的概率增大［2、3］。但p53過度表達與腫瘤的分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移密切相關已得到證實，可認為腫瘤組織中p53蛋白過度表達證明腫瘤有較強的侵襲力和轉(zhuǎn)移力，提示預后不佳。另外p53表達與放療敏感性顯著相關，被稱為輻射敏感相關基因，它在調(diào)節(jié)腫瘤細胞對細胞毒物質(zhì)（如放化療等）反應中發(fā)揮著重要作用［4～6］。因此，檢測p53蛋白，可作為判斷結(jié)直腸癌嚴重度、預后及指導治療的一個重要指標。

nm23，腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因之一，主要作用是抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，其機制尚未完全清楚。有研究發(fā)現(xiàn)［7、8］nm23蛋白有與二磷酸核苷激酶（NDPK）相同的氨基酸序列和NDPK活性，因此認為nm23抑制轉(zhuǎn)移能力可能與發(fā)揮NDPK樣功能有關。它能使GDP還原為GTP，而GTP有調(diào)節(jié)細胞膜蛋白的功能，參與跨膜信息的傳遞。另外，nm23還參與微管的聚合和分解，影響細胞骨架狀態(tài)，通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)微管系統(tǒng)的狀態(tài)和阻斷腫瘤信息的傳遞而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移［9］。本研究中nm23的陽性表達者為158例，陽性率為80.61%，其表達與性別、年齡、腫瘤位置差異性無統(tǒng)計學意義；與腫瘤分化程度之間的差異性有統(tǒng)計學意義，分化程度越高nm23蛋白表達的強度越高；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的差異性有統(tǒng)計學意義，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的nm23的表達強度低于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。有文獻報道稱，nm23基因的表達與腫瘤分化程度無關，但與腫瘤浸潤深度和淋巴轉(zhuǎn)移密切相關［10］。本研究與文獻報道相符。nm23可以作為判斷腫瘤有無轉(zhuǎn)移的一個重要指標。

綜上所述，結(jié)直腸癌中p53和nm23表達上調(diào)，與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關。兩者在結(jié)直腸癌中的陽性表達呈負相關，p53高表達而nm23低表達的患者淋巴轉(zhuǎn)移率高，腫瘤分化程度低，提示預后不良。聯(lián)合檢測結(jié)直腸癌組織p53、nm23蛋白情況可幫助判斷腫瘤的嚴重程度、有效評價預后并輔助術后的基因靶向治療。

［1］Somasundaram K.Tumor suppressor p53：regulation and function［J］.Frontiers in Bioscience，2000，5：424－437.

［2］Iacopetta B.Tp53 mutation in colorectal cancer［J］.Human Mutation，2003，21（3）：271－276.

［3］王玉環(huán)，王春，孫振柱.Her－2、p53和 K－i67在結(jié)直腸癌中的表達及意義［J］.臨床薈萃，2011，26（14）：1228－1232.

［4］Komuro Y，Watanabe T，Hosoi Y，et al.Prediction of tumor radiosensitivity in rectal carcinoma based on p53and Ku70expression［J］.Exp Clin Cancer Res，2003，22（2）：223－228.

［5］Sadahiro S，Suzuki T，Maeda Y，et al.Predictors of tumor downsizing and regression with preoperative radiotherapy alone and with concomitant tegafur／uracil（UFT）sectable advanced rectal adenocarcinoma［J］.Hepatogastroenterology，2007，54（76）：1107－1112.

［6］Komuro Y，Watanabe T，Tsurita G，et al.Evaluating the combination of molecularprognostic factors in tumor radiosensitivity in rectal cancer［J］.Hepatogastroenterology，2005，52（63）：666－671.

［7］宋楓，高峰，董亮，等.結(jié)直腸癌中p53、nm23的表達研究及臨床意義［J］.醫(yī)學研究雜志，2010，39（2）：70－72.

［8］Steeg PS，Cohn KH，Leone A ，et al.Tumorm etastasis and nm23：current concepts［J］.Cancer cells，1994，3：257.

［9］崔紅霞，馮一中.大腸癌中 EGFR、nm23、Ki－67的表達及臨床意義［J］.臨床與實驗病理學雜志，2011，27（6）：647－649.

［10］鄒國楨，趙光明，陸夏良.Ki67、p53、nm23在大腸癌中表達及臨床意義［J］.四川醫(yī)學，2013，34（8）：1259－1260.