惡液質(zhì)與腸道細(xì)菌移位對局限型進(jìn)展期胃癌患者臨床結(jié)局的影響

王永紅

惡液質(zhì)是指機(jī)體不再從外界環(huán)境中吸收營養(yǎng)性物質(zhì)，惡液質(zhì)患者往往表現(xiàn)為食欲不振、疲乏無力、外周感覺異常、身體極度消瘦、出現(xiàn)貧血等[1-2]。85%胃癌患者會出現(xiàn)惡液質(zhì)[3]。細(xì)菌移位(bacterial translocation，BT)是指腸道內(nèi)寄生的細(xì)菌通過腸道黏膜上皮和固有層，隨后進(jìn)入腸系膜淋巴結(jié)和其它腸外器官等無細(xì)菌的組織和器官[4-5],主要是由腸道內(nèi)寄生的細(xì)菌過度繁殖或菌群失調(diào)、機(jī)體免疫功能降低、腸道黏膜屏障損傷引起的。本研究旨在探討腸道BT與胃癌惡液質(zhì)發(fā)生的關(guān)系，及對胃癌患者預(yù)后的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2012年1月至2012年12月來我院普外科住院治療的原發(fā)性局限型進(jìn)展期胃癌患者120例，入選的標(biāo)準(zhǔn)為：①胃癌患者均為漢族，病理分型為胃腺癌，年齡50～75歲；②入院前一個月內(nèi)未接受過抗生素治療的患者；③3個月內(nèi)新確診的胃癌患者，未接受過手術(shù)治療、放療和化療等治療；④排除合并其它嚴(yán)重呼吸、循環(huán)和消化道等系統(tǒng)疾病者；⑤合并有精神疾病者不能配合治療者。實(shí)驗(yàn)研究前取得患者或患者家屬的同意并在知情同意書上簽字，獲得醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)。根據(jù)惡液質(zhì)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]分為胃癌惡液質(zhì)組(A組，60例)和胃癌無惡液質(zhì)組(B組，60例)。選擇60例健康體檢者作為對照組(G組)。A組患者中男性38例，女性22例；平均年齡(60.32±9.73)歲；BMI的平均值(19.62±1.93)kg/m2。B組患者中男性37例，女性23例；平均年齡(61.35±11.38)歲；BMI的平均值(26.72±2.17)kg/m2。G組健康人中男性38例，女性22例；平均年齡(60.76±10.28)歲；BMI的平均值(28.38±3.13)kg/m2。3組在性別(χ2=0.048，P>0.05)、年齡(F(2，178)=1.762，P>0.05)、BMI(F(2，178)=1.364，P>0.05)方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。外周血培養(yǎng)后，根據(jù)結(jié)果再分為惡液質(zhì)細(xì)菌移位陽性組(C組)、惡液質(zhì)細(xì)菌移位陰性組(D組)，非惡液質(zhì)細(xì)菌移位陽性組(E組)及非惡液質(zhì)細(xì)菌移位陰性組(F組)。外周血培養(yǎng)腸道細(xì)菌；檢測血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白細(xì)胞介素1(IL-1)。

1.2 方法

1.2.1 外周血細(xì)菌培養(yǎng) 所有患者與健康體檢者抽取空腹外周靜脈血20～30 ml，分別接種于BD血培養(yǎng)瓶中，將培養(yǎng)瓶置于BD BACTEC 9050全自動血培養(yǎng)儀中的指定位置，設(shè)置為35 ℃下培養(yǎng)7天后報(bào)告結(jié)果。對于BD BACTEC 9050全自動血培養(yǎng)儀警告陽性的標(biāo)本，在無菌超凈臺下抽取BD血培養(yǎng)瓶內(nèi)的液體接種于Macconkey平板及血瓊脂培養(yǎng)平板培養(yǎng)基中培養(yǎng)，必要時可加種SDR培養(yǎng)基，同時做涂片革蘭氏染色對細(xì)菌進(jìn)行初步分析，按照國標(biāo)方法對細(xì)菌菌屬做進(jìn)一步鑒定。

1.2.2 細(xì)胞因子水平檢測 A組和B組住院后，G組體檢時，抽取空腹外周靜脈血5 ml置于抗凝管中，離心后取血清后保存于-80 ℃的冰箱中待測。采用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)對外周血細(xì)胞因子IL-1α和TNF-α的水平進(jìn)行檢測。具體方法如下：①包被：用0.05 M PH為9.6的碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)濃度為1～10 μg/ml。在每個反應(yīng)孔中加入0.1 ml稀釋液，4℃過夜。次日棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌3次，每次洗滌3 min。②加樣：加入0.1 ml稀釋的待檢血清于上述反應(yīng)孔中，放置于37 ℃孵育1 h后洗滌。用同樣的方法做空白孔，陰性對照孔和陽性對照孔。③加酶標(biāo)抗體：將稀釋后的酶標(biāo)抗體0.1 ml加入各反應(yīng)孔中，于37 ℃孵育1 h后洗滌。④加底物液顯色：將0.1 ml臨時配制的TMB底物溶液加入各反應(yīng)孔中，37 ℃孵育20 min。⑤終止反應(yīng)：將0.05 ml 2 M硫酸加入各反應(yīng)孔中。⑥結(jié)果判定：用ELISA檢測儀測定各孔的OD值，若待檢血清的OD值大于規(guī)定的陰性對照的OD值2.1倍，結(jié)果判定為陽性。

1.3 隨訪

對胃癌患者隨訪2年，自出院之日開始計(jì)算，死亡為終點(diǎn)記錄時間，記算胃癌患者出院后的生存時間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)和方差分析。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌移位發(fā)生率比較和細(xì)菌分型

A組外周血培養(yǎng)中，16例陽性，細(xì)菌移位發(fā)生率為26.67%，其中包括大腸埃希菌(10例)、克雷伯氏菌(4例)、糞腸球菌(2例)；B組4例陽性，細(xì)菌移位發(fā)生率為6.67%，培養(yǎng)細(xì)菌均為大腸埃希菌；G組細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果均為陰性。A組的細(xì)菌移位率明顯高于B組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 細(xì)胞因子水平檢測結(jié)果

C組白介素1α(IL-1α)和腫瘤壞死因子(TNF-α)水平明顯高于D組、E組、F組和G組(P<0.05)。見表1。

表1 各組白介素1α(IL-1α)和腫瘤壞死因子(TNF-α)水平比較結(jié)果

2.3 患者的2年生存率結(jié)果

C組2年存活率為12.50%(2/16)，D組為22.73%(10/44)，E組為50.00%(2/4)，F(xiàn)組為46.43%(26/56)。C組2年存活率最低。

3 討論

惡液質(zhì)是由多種機(jī)制引起：①腫瘤患者由于中樞生理機(jī)制的改變、心理障礙如焦慮和壓抑等、腫瘤引起的消化功能障礙等原因?qū)е聶C(jī)體攝入營養(yǎng)物質(zhì)不足；②蛋白質(zhì)和脂肪等分解增多；③由于貧血導(dǎo)致的機(jī)體代謝的原料供應(yīng)減少；④腫瘤患者產(chǎn)生某些介質(zhì)參與機(jī)體代謝。實(shí)驗(yàn)表明感染性因素和非感染性因素都能夠通過不同的途徑激活炎癥細(xì)胞，釋放白細(xì)胞介素1(IL-1)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNFα)和干擾素γ(IFN-γ)等炎性細(xì)胞介質(zhì)[7]。有研究報(bào)道[8-9]炎性細(xì)胞因子，包括腫瘤壞死因子α(TNFα)、白細(xì)胞介素1(IL-1)、白細(xì)胞介素6(IL-6)和干擾素γ(IFN-γ)在惡液質(zhì)的發(fā)生和進(jìn)展過程中發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。許多癌癥患者雖然出現(xiàn)了體重減輕、貧血等惡液質(zhì)表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)檢查也發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞因子水平的升高，但是未發(fā)現(xiàn)外源性病理致病因素[10]。有學(xué)者在臨床和實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)[11]，炎性細(xì)胞因子機(jī)制在解釋其在腫瘤性惡液質(zhì)的發(fā)生發(fā)展過程中的作用尚不明確。

在這種情況下，我們將我院普外科住院的胃癌患者分為A組和B組，同時選擇體檢門診體檢健康者作為G組，通過檢測各組炎性細(xì)胞因子IL-1α和TNFα的水平變化，比較炎性細(xì)胞因子水平在各組中的變化，進(jìn)而說明炎性細(xì)胞因子與胃癌惡液質(zhì)發(fā)生的關(guān)系。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，C組白介素1α(IL-1α)和腫瘤壞死因子(TNF-α)水平明顯高于D組、E組、F組和G組(P<0.05)。通過對各組外周血細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果表明，A組外周血培養(yǎng)中，共有16例患者血培養(yǎng)結(jié)果為陽性，細(xì)菌移位發(fā)生率為26.67%，B組共有4例患者血培養(yǎng)結(jié)果為陽性，細(xì)菌移位發(fā)生率為6.67%，G組細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果均為陰性。A組的細(xì)菌移位率明顯要高于B組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。健康人腸道寄居著大量菌群，主要為大腸埃希菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌、變形桿菌等，在正常生理狀態(tài)下，它們保持著種類和數(shù)量上的動態(tài)平衡，對宿主起著生物拮抗、免疫、營養(yǎng)、延緩衰老和抗腫瘤的作用，一旦受物理、化學(xué)、生物等機(jī)體內(nèi)外環(huán)境因素影響時，就會出現(xiàn)細(xì)菌移位，由條件致病菌引發(fā)宿主致病[12]。因此，我們推斷胃癌患者出現(xiàn)腸道細(xì)菌移位，進(jìn)而引起炎性細(xì)胞因子的釋放，導(dǎo)致癌性惡液質(zhì)的發(fā)生。胃癌患者出院后我們隨訪2年，結(jié)果C組2年存活率最低(12.50%)。有研究報(bào)道[13]，20%的腫瘤患者死亡原因是惡液質(zhì)，50%腫瘤患者死亡時伴有惡液質(zhì)。惡液質(zhì)的發(fā)生往往與生活質(zhì)量較低和預(yù)后較差有關(guān)，并能夠?qū)δ[瘤的治療產(chǎn)生不利的作用[14]。

綜上所述，腸道菌群移位在胃癌患者惡液質(zhì)的發(fā)生過程中起到重要作用，但由于腸道菌群移位目前無早期診斷方法和特殊治療手段，尚不能預(yù)防腫瘤相關(guān)性惡液質(zhì)的發(fā)生，因此還需要我們對其進(jìn)一步研究。

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