PTEN、P27對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌新輔助化療療效的預(yù)測(cè)價(jià)值

陳天文 陶霖玉 梁亞男 王開昕 張好云 王紅鮮

20%～30%的乳腺癌患者存在人表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epithelial growth factor receptor2,HER2)基因擴(kuò)增或高表達(dá)。由于HER2陽(yáng)性乳腺癌普遍表現(xiàn)為低分化、高增殖能力和高侵襲性，所以預(yù)后較差[1-2]，蒽環(huán)類或紫杉類藥物是我國(guó)HER2陽(yáng)性乳腺癌化療中的常用選擇。因此，探尋HER2陽(yáng)性乳腺癌蒽環(huán)類化療療效預(yù)測(cè)指標(biāo)，對(duì)于優(yōu)化HER2陽(yáng)性乳腺癌個(gè)體化治療、提高其化療受益具有重要的臨床意義。本研究選取HER2受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵調(diào)控分子PTEN和P27蛋白為研究對(duì)象，研究分子表達(dá)與乳腺癌蒽環(huán)類新輔助化療療效的關(guān)系，探討PTEN和P27對(duì)化療療效的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

樣本選擇標(biāo)準(zhǔn)：①女性、單側(cè)乳腺癌、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；②既往無乳腺癌或其它癌癥病史；③空芯針穿刺活檢證實(shí)為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，保留有空芯針穿刺活檢標(biāo)本；④術(shù)前接受至少2個(gè)療程FEC方案(氟尿嘧啶+表阿霉素+環(huán)磷酰胺)新輔助化療，化療后可手術(shù)，接受過曲妥珠單抗靶向治療的患者除外；⑤專職的乳腺病理醫(yī)師對(duì)HER2免疫組化切片進(jìn)行逐一重新閱片，確認(rèn)HER2的IHC結(jié)果為+++或者FISH陽(yáng)性。

選取2007年5月至2012年9月我院甲狀腺乳腺外科收治的113例HER2陽(yáng)性乳腺癌患者，均符合樣本選擇標(biāo)準(zhǔn)且具有完備的臨床病理資料?；颊咧形荒挲g49歲，38.9%的患者已絕經(jīng)，原發(fā)癌灶大小為(5.5±2.6)cm，新輔助化療前臨床分期：Ⅱa期占26.0%，Ⅱb期 42.0%，Ⅲa 期24.0%，Ⅲb期8.0%?；颊哂谛螺o助化療后8例接受保乳手術(shù)，55例為乳腺癌改良根治術(shù)，50例為乳腺癌根治術(shù)。

1.2 新輔助化療方案

患者均接受了至少2個(gè)周期的FEC方案新輔助化療。具體用藥：表柔比星 80 mg/m2，第1天，靜脈滴注；氟尿嘧啶 500 mg/m2，第1天，靜脈滴注；環(huán)磷酰胺600 mg/m2，第1天，靜脈推注，21 天為 1 個(gè)周期，化療2～4個(gè)周期后休息1周行手術(shù)治療。

1.3 新輔助化療療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

化療前及化療后均由副主任醫(yī)師以上職稱的臨床醫(yī)生體檢和超聲醫(yī)師應(yīng)用B 超測(cè)量腫瘤大小來評(píng)定療效。療效評(píng)價(jià)參照 WHO 制定的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。療效分為完全緩解(complete remission，CR)、部分緩解(partial remission，PR)、疾病穩(wěn)定(stable disease，SD)和疾病進(jìn)展(progressive disease，PD)。完全緩解又分為病理完全緩解(pathologic complete remission，pCR)，臨床完全緩解(clinical complete remission，cCR) 。pCR 定義為原發(fā)腫瘤及區(qū)域淋巴結(jié)均無殘留浸潤(rùn)性癌細(xì)胞，其中殘留原位癌也包括在pCR 組。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑與免疫組化檢測(cè)

鼠抗人PTEN和P27單抗免疫組化試劑盒購(gòu)自上海麥莎生物科技有限公司?？招踞槾┐虡?biāo)本經(jīng)4%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，脫蠟水化，3% H2O2室溫孵育10 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；PBS沖洗，每次3 min，共3次，于pH 6.0 的檸檬酸緩沖液中微波修復(fù)15 min，室溫冷卻20 min；以非免疫動(dòng)物血清封閉10 min，PBS沖洗，每次3 min，共3次，加一抗室溫(24 ℃)孵育 1 h，PBS沖洗，每次3 min，共3次，加生物素標(biāo)記的二抗，室溫(24 ℃) 10 min，PBS 沖洗，用辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素親和素復(fù)合物孵育 10 min，PBS 沖洗，DAB染色，蘇木精復(fù)染，脫水，封片，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用試劑盒已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.5 免疫組化結(jié)果判定

所有切片均由一名專職乳腺癌免疫組化閱片的副主任醫(yī)師盲法獨(dú)立閱片完成，主要根據(jù)顯微鏡下腫瘤細(xì)胞著色(棕黃色著色視為陽(yáng)性著色)的比例進(jìn)行半定量法評(píng)估，均為400倍鏡下觀察10個(gè)視野下陽(yáng)性細(xì)胞所占的比例，PTEN和P27均按以下標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分：0～15%為陰性，≥15%為陽(yáng)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用 SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差及 95%可信區(qū)間(CI)進(jìn)行參數(shù)描述。計(jì)量資料采用秩和檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN和P27的表達(dá)

PTEN和P27在乳腺癌原發(fā)灶中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.8%(71/113)和70.8%(80/113),PTEN和P27共表達(dá)(PTEN及P27均陽(yáng)性)率為44.2%(50/113)，共缺失(PTEN及P27均陰性)率為23.0%(26/113)。

2.2 新輔助化療療效評(píng)價(jià)

新輔助化療后，臨床部分緩解及病理完全緩解定義為臨床有效，疾病穩(wěn)定及疾病進(jìn)展定義為臨床無效。113 例患者中，臨床部分緩解66例(58.4%)，病理完全緩解14例(12.4%)，臨床有效患者共80例(70.8%)；疾病穩(wěn)定30例(26.5%)，疾病進(jìn)展3例(2.7%)，臨床無效患者共33例(29.2%)。

2.3 PTEN和P27的表達(dá)與新輔助化療療效的關(guān)系

單因素分析患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、雌激素受體狀態(tài)、PTEN、P27分子表達(dá)等因素與新輔助化療療效的關(guān)系。結(jié)果表明，單獨(dú)PTEN或P27的表達(dá)與否不會(huì)影響蒽環(huán)類化療的療效，但PTEN與P27共表達(dá)的患者蒽環(huán)類化療的臨床有效率較高，與非共表達(dá)患者療效有顯著性差異(P=0.003)，見表1。多因素logistic回歸分析表明，PTEN與P27共表達(dá)是HER2陽(yáng)性乳腺癌蒽環(huán)類新輔助化療療效的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)(OR=3.411,95%CI=1.212～9.597,P=0.020)。

表1 單因素分析各因素與新輔助化療療效的關(guān)系(例，%)

3 討論

蒽環(huán)類化療在HER2陽(yáng)性乳腺癌的輔助治療中仍然占據(jù)著重要地位。國(guó)內(nèi)學(xué)者蔡媛等[3]對(duì)蒽環(huán)類藥物在乳腺癌新輔助化療療效預(yù)測(cè)中的價(jià)值進(jìn)行了深入研究。研究揭示HER2陽(yáng)性較HER2陰性的乳腺癌患者能從蒽環(huán)類新輔助化療中獲得更高的有效率。本研究從HER2受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路出發(fā)，以接受蒽環(huán)類新輔助化療的HER2陽(yáng)性乳腺癌患者為研究對(duì)象，探索HER2受體通路關(guān)鍵調(diào)控分子表達(dá)與新輔助化療療效的關(guān)系，試圖尋找蒽環(huán)類化療的療效預(yù)測(cè)指標(biāo)，從而指導(dǎo)HER2陽(yáng)性乳腺癌的個(gè)體化治療，提高患者的化療受益。

HER2/PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在HER2陽(yáng)性乳腺癌患者中普遍處于活化狀態(tài)，通路的高活性與癌細(xì)胞低分化、高增殖、易復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為有關(guān)[4]。PTEN及P27蛋白均是此通路的負(fù)性調(diào)控蛋白，分別通過抑制PI3K及CDK2的活性，引起PIP3去磷酸化和CyclinD1的下調(diào)，從而抑制下游分子的一系列磷酸化過程及細(xì)胞周期的進(jìn)展[5]。因此，PTEN及P27的表達(dá)對(duì)于通路活性的調(diào)控及HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞分化、凋亡及侵襲能力具有重要影響。一些體外研究表明，PTEN的缺失以及P27的下調(diào)與HER2陽(yáng)性乳腺癌曲妥珠單抗靶向治療耐藥有關(guān)[5-7]，但PTEN及P27的表達(dá)在乳腺癌化療療效預(yù)測(cè)及預(yù)后中的價(jià)值目前尚未完全闡明。

本研究揭示，在局部晚期HER2陽(yáng)性乳腺癌中，PTEN及P27陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.8%和70.8%,PTEN和P27共表達(dá)率為44.2%，共缺失率為23.0%，近1/5患者存在PTEN及P27蛋白的缺失。PTEN-P27共表達(dá)的患者新輔助化療有效率較高(70.8%)，可能機(jī)制為：蒽環(huán)類藥物通過抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ，減少癌細(xì)胞DNA復(fù)制，從而與PTEN及P27蛋白協(xié)同負(fù)性調(diào)控癌細(xì)胞周期進(jìn)展和細(xì)胞凋亡。但具體機(jī)制有待體內(nèi)體外研究來揭示。

總之，PTEN-P27共表達(dá)可以作為HER2陽(yáng)性乳腺癌蒽環(huán)類新輔助化療療效的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)，但這一分子指標(biāo)的臨床指導(dǎo)價(jià)值還有待更大樣本的前瞻性臨床研究來證實(shí)。

[1] Slamon DJ,Clark GM,Wong SG,et al.Human breast cancer:correlation of relapse and survival with amplification of the HER-2/neu oncogene〔J〕.Science,1987,235(4785):177-182.

[2] Cianfrocca M,Goldstein LJ.Prognostic and predictive factors in early-stage breast cancer〔J〕.Oncologist,2004,9(6):606-616.

[3] 蔡 媛,喬紅梅,鄭 甦,等.乳腺癌C-erbB-2表達(dá)在新輔助化療療效中的預(yù)見性〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2011,26(2):137-139.

[4] Kumandan S,Mahadevan NR,Chiu K,et al.Activation of the unfolded protein response bypasses trastuzumab-mediated inhibition of the PI-3K pathway〔J〕.Cancer Lett,2013,329(2):236-242.

[5] Nagata Y,Lan KH,Zhou X,et al.PTEN activation contributes to tumor inhibition by trastuzumab,and loss of PTEN predicts trastuzumab resistance in patients〔J〕.Cancer Cell,2004,6(2):117-127.

[6] Nahta R,Yu D,Hung MC,et al.Mechanisms of disease:understanding resistance to HER2-targeted therapy in human breast cancer〔J〕.Nat Clin Pract Oncol,2006,3(5):269-280.

[7] Kute T,Lack CM,Willingham M,et al.Development of Herceptin resistance in breast cancer cells〔J〕.Cytometry (Part A),2004,57(2):86-93.